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    蘇云金桿菌G033A對化學農(nóng)藥防治草地貪夜蛾的減量效應

    2021-02-23 05:33:08徐婷婷胡本進畢思佳徐麗娜
    中國生物防治學報 2021年6期
    關鍵詞:甲維鹽氯蟲甲酰胺

    胡 飛,徐婷婷,胡本進,畢思佳,佟 強,徐麗娜*,張 杰

    (1. 安徽省農(nóng)業(yè)科學院植物保護與農(nóng)產(chǎn)品質量安全研究所,合肥 230031;2. 中國農(nóng)業(yè)科學院植物保護研究所/植物病蟲害生物學國家重點實驗室,北京 100193)

    草地貪夜蛾Spodoptera frugiperda是一種源于美洲熱帶、亞熱帶地區(qū)的重大遷飛性害蟲[1]。2019年入侵我國并迅速蔓延至全國26個省/市/自治區(qū),成為嚴重威脅我國玉米生產(chǎn)的重大害蟲[2]?;瘜W藥劑因具有殺蟲速度快、使用方法簡便等特點,被普遍應用于我國草地貪夜蛾應急防控。尤其是甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽(emamectin benzoate,簡稱甲維鹽)和氯蟲苯甲酰胺(chlorantraniliprole)因對草地貪夜蛾具有較高殺蟲活性[3-5],其單劑和復配劑成為全國各地防治草地貪夜蛾的主打藥劑。

    然而,草地貪夜蛾在入侵我國前已經(jīng)歷了漫長的化學防治過程,抗性相關基因檢測發(fā)現(xiàn),入侵我國的群體對傳統(tǒng)有機磷、有機氯和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥具有較高的抗性基因變異頻率,目前雖尚未檢測到對新型酰胺類農(nóng)藥的抗性基因突變位點,但田間種群對氯蟲苯甲酰胺的敏感性也有所下降[6,7]。而波多黎各草地貪夜蛾田間種群已對氯蟲苯甲酰胺產(chǎn)生160倍的高水平抗性,對甲維鹽亦產(chǎn)生低水平抗性[8]。目前,我國對草地貪夜蛾執(zhí)行分區(qū)治理策略,在其周年繁殖區(qū)不斷有蟲源遷入、繁殖,為減少蟲源外遷,玉米的生長周期內往往需多次用藥;遷飛過渡區(qū)和重點防范區(qū)為壓低遷入蟲口基數(shù)、降低危害,應用化學防治也是不可避免的防治手段。而草地貪夜蛾作為一種遷飛性昆蟲,抗性種群的抗性等位基因會持續(xù)存在[9],大量長期使用某種化學藥劑,使其處于巨大的選擇壓力之下,勢必導致抗性的產(chǎn)生。盡快制訂并實施科學合理的綜合治理和抗性治理策略,延緩抗藥性的產(chǎn)生,是草地貪夜蛾可持續(xù)防控的當務之急[10]。

    微生物藥劑與化學藥劑混配使用是近年來減少化學藥劑使用量,緩解抗藥性產(chǎn)生的重要手段。其中,蘇云金桿菌(Bacillus thuringiensis,Bt)是應用范圍最廣、使用量最大、防治最成功的微生物殺蟲劑,它與化學藥劑混用,不僅可以有效防控對氯蟲苯甲酰胺和阿維菌素產(chǎn)生抗性的小菜蛾,而且可以減少化學藥劑的使用量[11]。中國農(nóng)業(yè)科學院植物保護研究所研制的蘇云金桿菌 G033A對鱗翅目、鞘翅目葉甲科害蟲均具有較高毒力,已由武漢科諾生物科技股份有限公司登記生產(chǎn)。2020年11月獲批擴作登記用于草地貪夜蛾防治,在安徽宣城、河南新鄉(xiāng)、廣西南寧等地進行了春玉米、夏玉米和秋玉米草地貪夜蛾防治田間應用,整體防治效果都達到80%以上[12]。然而與化學藥劑相比,速效性差、用藥量大是蘇云金桿菌不可忽視的缺陷。為了減少化學藥劑使用量、延緩抗藥性的產(chǎn)生,同時進一步提高生物農(nóng)藥利用率,本研究通過室內生測和田間試驗測定了減量 G033A和低劑量化學藥劑混配對草地貪夜蛾的防治效果,以期為生物農(nóng)藥的推廣和應用技術提供新的思路。

    1 材料與方法

    1.1 供試藥劑

    蘇云金桿菌G033A(簡稱G033A)可濕性粉劑(商品名:禁衛(wèi)軍?),由武漢科諾生物科技股份有限公司提供,有效成分含量32000 IU/mg,防治草地貪夜蛾的推薦用藥量150~300 g/667 m2,本次試驗中選用推薦最低劑量的50%作為聯(lián)合試驗中G033A的使用量。5%甲維鹽水分散粒劑(WG),河北中保綠農(nóng)作物科技有限公司提供;200 g/L氯蟲苯甲酰胺懸浮劑(SC),由美國富美實公司提供;15%甲維鹽·氯蟲苯甲酰胺懸浮劑(SC),安徽省農(nóng)業(yè)科學院植物保護與農(nóng)產(chǎn)品質量安全研究所自研。

    1.2 供試蟲源

    用于室內生物測定的草地貪夜蛾系 2019年采自安徽省黃山市春玉米田,在室內以人工飼料長期飼養(yǎng)的實驗室種群,飼養(yǎng)過程中未接觸任何殺蟲劑。飼養(yǎng)條件為(27±1)℃,光周期14L:10D,相對濕度60%±10%。選擇蟲體一致,健康的3齡初幼蟲進行測試。

    1.3 G033A聯(lián)用化學藥劑室內生測

    根據(jù)各化學藥劑在草地貪夜蛾或其它鱗翅目害蟲上的推薦使用量,分別設置0.2 g/L、0.3 g/L、0.3 g/L為甲維鹽、氯蟲苯甲酰胺和甲維鹽·氯蟲苯甲酰胺的參考試驗濃度,并以此為基準設置化學藥劑減量25%、50%和75%共12個藥劑單獨處理。在配制好的化學藥劑溶液中,按照濃度1.5 g/L加入G033A,充分混勻后配制成化學藥劑和G033A混劑共12個處理;并以相同濃度G033A單獨使用為對照(表1)。

    表1 室內生物活性測定中蘇云金桿菌G033A與化學藥劑聯(lián)用配方表Table 1 Compound formula of Bacillus thuringiensis G033A and pesticides in bioassay

    采用浸葉法進行生物測定,選取展開的幼嫩玉米葉片,剪成1.5 cm×1.5 cm大小,在配制好的不同處理藥液中浸漬10 s,待其自然晾干后放入墊有濕潤濾紙的12孔培養(yǎng)板中,每孔放入4片葉片。然后將饑餓處理6 h的供試幼蟲接入培養(yǎng)板中,每處理12頭,重復6次。

    1.4 G033A聯(lián)用化學藥劑對草地貪夜蛾的田間防治試驗

    試驗在安徽省農(nóng)業(yè)科學院崗集試驗基地(117o22′ E,30. 96′ N)進行,試驗田塊地勢平坦,土層深厚,中上等肥力,土壤肥力較均等,有機質含量一般,玉米于2020年7月3日播種,每667 m2定植約3500株,株距0.35 m,行距0.5 m,田間肥水管理等條件一致,符合當?shù)剞r(nóng)業(yè)生產(chǎn)實踐,面積約4000 m2。選擇草地貪夜蛾發(fā)生嚴重時開展試驗。

    試驗共設14個處理(表2列舉13個),每處理4次重復,小區(qū)采用隨機區(qū)組排列,每小區(qū)面積約30 m2,玉米定株120株左右,小區(qū)間設1 m寬保護行,藥劑用量見表2。于2020年8月6日莖葉噴霧施藥1次。田間草地貪夜蛾發(fā)生蟲態(tài)大多為卵~低齡幼蟲期,試驗前未施用任何農(nóng)藥,玉米百株受害率為60%~70%。采用背負式電動噴霧器對準葉心重點噴施,用水量為 50 L/667 m2。

    表2 蘇云金桿菌G033A與化學農(nóng)藥聯(lián)用配方表Table 2 Compound furmula of Bacillus thuringiensis G033A and chemical pesticides

    1.5 調查方法

    室內生物測定,接蟲后每24 h觀察一次幼蟲存活狀態(tài),連續(xù)觀察3 d,以軟毛筆輕觸蟲體不動判定為死亡。以清水為對照,記錄死亡幼蟲數(shù)量和存活幼蟲數(shù)量,并據(jù)此計算幼蟲校正死亡率。

    田間藥效試驗,分別于藥后 5 d、10 d、15 d 各調查一次,每個處理隨機取5點,每點20株玉米,施藥前調查玉米植株上草地貪夜蛾數(shù)量。蟲口減退率和防治效果如下公式,試驗數(shù)據(jù)采用SPSS 21.0進行差異顯著性分析。

    蟲口減退率(%)=(施藥前活蟲數(shù)—施藥后活蟲數(shù))/施藥前活蟲數(shù)×100;防治效果(%)=(處理區(qū)蟲口減退率—空白對照區(qū)蟲口減退率)/(100—空白對照區(qū)蟲口減退率)×100。

    2 結果與分析

    2.1 G033A與減量化學藥劑聯(lián)合應用對草地貪夜蛾幼蟲存活的影響

    處理后24 h,甲維鹽參考劑量(0.2 g/L)及減量25%、50%和75%單獨使用,草地貪夜蛾3齡幼蟲校正死亡率分別為99.07%、87.04%、85.19%和80.56%;各劑量與G033A聯(lián)合使用,幼蟲校正死亡率分別為100.00%、99.07%、91.67%和87.96%,結果表明:甲維鹽減量與G033A聯(lián)合使用的幼蟲校正死亡率顯著高于其減量單獨使用(P<0.05)。處理后48 h,甲維鹽參考劑量(0.2 g/L)及減量25%、50%和75%單獨使用,草地貪夜蛾幼蟲的校正死亡率分別為100.00%、94.44%、97.22%和86.11%;各劑量與G033A聯(lián)合使用,幼蟲校正死亡率均為100.00%,甲維鹽減量與G033A聯(lián)合使用的幼蟲校正死亡率均顯著高于其減量單獨使用(P<0.05)。處理后72 h,甲維鹽各劑量單獨使用及與G033A聯(lián)合使用,幼蟲校正死亡率均為100.00%,處理間差異不顯著(圖1)。

    圖1 G033A與不同劑量5%甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽水分散粒劑聯(lián)合應用對草地貪夜蛾3齡幼蟲的致死率Fig. 1 Effects of G033A combined with different dose of 5% emamectin benzoate WDG on mortality of Spodoptera frugiperda 3rd larvae

    處理后24 h,氯蟲苯甲酰胺參考劑量(0.3 g/L)及減量25%、50%和75%單獨使用,草地貪夜蛾幼蟲的校正死亡率分別為20.37%、11.11%、6.48%和1.85%;各劑量與G033A聯(lián)合使用,幼蟲校正死亡率分別為58.33%、25.93%、23.15%和8.33%,氯蟲苯甲酰胺與G033A聯(lián)合使用的幼蟲校正死亡率均顯著高于其單獨使用(P<0.05)。處理后48 h,氯蟲苯甲酰胺推薦劑量(0.3 g/L)及減量25%、50%和75%單獨使用,草地貪夜蛾幼蟲的校正死亡率分別為70.37%、63.88%、39.81%和30.55%;各劑量與G033A聯(lián)合使用,幼蟲校正死亡率分別為92.59%、76.85%、75.93%和72.22%,氯蟲苯甲酰胺與G033A聯(lián)合使用的幼蟲校正死亡率均顯著高于其單獨使用(P<0.05)。處理后72 h,氯蟲苯甲酰胺各劑量與G033A聯(lián)合使用,幼蟲校正死亡率均為 100.00%;而其單獨使用時,只有參考劑量處理幼蟲校正死亡率為 100%,其他各減量處理幼蟲校正死亡率均顯著低于相應聯(lián)合用藥(圖2)。

    圖2 G033A與不同劑量200 g/L氯蟲苯甲酰胺懸浮劑聯(lián)合應用對草地貪夜蛾3齡幼蟲的致死率Fig. 2 Effects of G033A combined with different doses of 200 g/L chlorantraniliprole SC on mortality of Spodoptera frugiperda 3rd larvae

    處理后24 h,甲維鹽·氯蟲苯甲酰胺參考劑量(0.3 g/L)及減量25%、50%和75%單獨使用,草地貪夜蛾幼蟲的校正死亡率分別為68.52%、66.67%、60.19%和27.78%;各劑量與G033A聯(lián)合使用,幼蟲校正死亡率分別為83.33%、77.78%、63.89%和41.67%,甲維鹽·氯蟲苯甲酰胺各濃度與G033A聯(lián)合使用的幼蟲校正死亡率均顯著高于其單獨使用。處理后48 h,甲維鹽·氯蟲苯甲酰胺參考劑量及減量25%、50%和75%單獨使用,幼蟲校正死亡率分別為87.96%、87.96%、73.15%和61.11%;各劑量與G033A聯(lián)合使用,幼蟲校正死亡率分別為100.00%、98.15%、83.33%和71.30%,甲維鹽·氯蟲苯甲酰胺各濃度與G033A聯(lián)合使用的幼蟲校正死亡率均顯著高于其單獨使用。處理后72 h,甲維鹽·氯蟲苯甲酰胺與G033A聯(lián)合使用的各處理,幼蟲校正死亡率均為 100.00%,而其單獨使用時,只有參考劑量和減量 25%處理幼蟲校正死亡率為100%,減量50%和75%使用,幼蟲校正死亡率顯著低于與G033A聯(lián)合用藥處理(圖3)。

    圖3 G033A與不同劑量15%甲維鹽·氯蟲苯甲酰胺懸浮劑混配對草地貪夜蛾3齡幼蟲的致死率Fig. 3 Effects of G033A combined with different doses of 15% emamectin benzoate chlorantraniliprole SC on mortality of Spodoptera frugiperda 3rd larvae

    濃度為1.5 g/L的G033A單獨處理24、48和72 h后,幼蟲校正死亡率分別為0.00%、38.89%和72.22%,其與本試驗中的三種化學藥劑聯(lián)合使用相同時間后,幼蟲校正死亡率均顯著高于其單獨使用。

    2.2 G033A與減量化學藥劑聯(lián)合應用對草地貪夜蛾的田間防治效果

    G033A防治草地貪夜蛾最低推薦劑量(150 g/667 m2)單獨施用5 d、10 d和15 d,對草地貪夜蛾的田間防效分別為 35.97%、59.21%和 52.57%。甲維鹽、氯蟲苯甲酰胺和甲維鹽·氯蟲苯甲酰胺參考劑量(5、15、20 g/667 m2)單獨施用5 d、10 d和15 d,對草地貪夜蛾的田間防效分別為82.18%、71.03%和44.43%;81.02%、83.83%和77.89%;91.16%、87.61%和83.44%。甲維鹽與G033A聯(lián)合使用可以提高甲維鹽的持效性,甲維鹽減量25%、50%和G033A聯(lián)合施用15 d后,對草地貪夜蛾的防效分別為66.77%和70.64%,顯著高于藥劑參考劑量單獨施用的防效,甲維鹽減量75%和G033A聯(lián)合使用后,對草地貪夜蛾的防效仍高于甲維鹽參考劑量單獨施用,只是差異不顯著。氯蟲苯甲酰胺及甲維鹽·氯蟲苯甲酰胺與G033A聯(lián)合使用,其速效性和持效性均可改善,二種藥劑分別減量25%、50%和G033A聯(lián)合使用5 d和15 d后,對草地貪夜蛾的防效均高于其參考劑量單獨施用,只是差異不顯著(表3)。

    表3 G033A與低劑量化學殺蟲劑混配對草地貪夜蛾的防治效果Table 3 Effect of G033A mixed with low dose chemical insecticides on Spodoptera frugiperda

    3 討論

    蘇云金桿菌因殺蟲效果佳、特異性強、無殘留、對非靶標生物安全等特點成為目前推廣最為廣泛的生物殺蟲劑,蘇云金桿菌 G033A作為我國獲批的第一個轉基因抗蟲工程菌對草地貪夜蛾、黃曲條跳甲等鱗翅目和鞘翅目昆蟲均展現(xiàn)出較高毒力[13]。而且,近年來病原微生物與化學殺蟲劑混配使用成為減少藥劑使用量,緩解抗藥性產(chǎn)生的重要手段,現(xiàn)有研究表明,蘇云金桿菌與茚蟲威、阿維菌素等多種殺蟲劑復配具有增效作用,而且其與其它生物殺蟲劑或化學殺蟲劑混配使用已在實際生產(chǎn)中不斷推廣,表現(xiàn)出防效增加、持效期延長、抗藥性延緩等特點[14-21]。本次試驗通過室內生測和田間試驗全面測定了G033A分別與5%甲維鹽、200g/L氯蟲苯甲酰胺、和15%甲維鹽·氯蟲苯甲酰胺減量75%、50%和25%及常規(guī)用量聯(lián)合使用對草地貪夜蛾的防治效果,證明不僅草地貪夜蛾的死亡率明顯上升,而且顯著提高了低劑量化學農(nóng)藥的殺蟲速率。田間畝施用G033A(75 g)+5%甲維鹽(5 g)、G033A(75 g)+200 g/L氯蟲苯甲酰胺(11.25 g)、G033A(75 g)+15%甲維鹽·氯蟲苯甲酰胺(15 g)、G033A(75 g)+15%甲維鹽·氯蟲苯甲酰胺(10 g)均對草地貪夜蛾具有較好的防治效果??梢?,G033A與特定化學藥劑聯(lián)用具有協(xié)同增效作用。常以共毒系數(shù)評價混配化學農(nóng)藥的增效作用,然而對于微生物與化學殺蟲劑的混合應用,它們之間可能并不是直接加和,共毒系數(shù)不能如實反映協(xié)同效果[22]。應參考農(nóng)藥共毒系數(shù)評價方法,結合 G033A殺蟲特點,以至少減量50%農(nóng)藥與G033A混用后保持害蟲致死率和明顯縮短LT50為協(xié)同增效指標,測定共毒指數(shù)(CTLT50),以評估協(xié)同增效作用[23]。以此為基礎,進一步開展 G033A與不同藥劑的聯(lián)合應用試驗,明確增效作用,篩選最佳增效配比,以為菌藥復配制劑的開發(fā)提供支持。

    G033A克服了蘇云金桿菌殺蟲譜窄的缺陷,然而見效慢、使用量大、對高齡幼蟲活性低等缺點仍然存在。本研究進行的室內試驗以3齡幼蟲為對象,田間防治時蟲源亦多為低齡幼蟲,而實際生產(chǎn)中草地貪夜蛾常以各種齡期幼蟲混合發(fā)生,而且高齡幼蟲因具有暴食性,破壞力更為巨大,針對高齡幼蟲的防治效果有待進一步研究;另外選取的化學藥劑種類有限,后續(xù)還需開展多種藥劑與 G033A聯(lián)合使用,進一步研究 G033A對化學農(nóng)藥防治草地貪夜蛾的減量效應。玉米全生育期伴有多種鱗翅目害蟲混發(fā),如棉鈴蟲、玉米螟、粘蟲、甜菜夜蛾等,針對G033A與化學農(nóng)藥聯(lián)合使用防治玉米主要害蟲技術還需開展深入研究。

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