復方中藥對大腸桿菌脂多糖免疫應激早期斷奶仔豬血清細胞因子的影響

孟冬霞，馬政禹，曹日亮

（1.山西農業(yè)大學，山西 晉中 030801；2.山西省農業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)研究所，山西 太原 030032）

早期斷奶（21～35 d斷奶）是現(xiàn)代養(yǎng)豬的關鍵技術之一。但由于仔豬自身的發(fā)育特點及營養(yǎng)、環(huán)境和心理等應激因素的綜合影響，極易誘發(fā)仔豬早期斷奶綜合征。研究證實，早期斷奶對仔豬免疫、內分泌、消化器官均有嚴重的影響，尤其對胃腸道的形態(tài)、內容物pH、消化酶活性、微生物區(qū)系等產生不利影響[1-6]。仔豬常表現(xiàn)出采食量低、消化不良、腹瀉、免疫力降低、發(fā)病率增高等癥狀，給養(yǎng)豬業(yè)帶來很大的經濟損失[7]。免疫應激是導致仔豬早期斷奶綜合征的重要因素之一[8]。在“飼料禁抗、養(yǎng)殖減抗、產品無抗”的養(yǎng)殖背景下，尋找安全、有效的綠色替抗產品降低斷奶應激對仔豬造成的傷害是當前養(yǎng)豬業(yè)迫切需要解決的問題。

研究證實中草藥添加劑可有效緩解仔豬斷奶應激[9-13]。本試驗在研究復方中藥對早期斷奶仔豬生產性能、血清激素水平、血清免疫球蛋白及腸黏膜免疫細胞影響的基礎上，進一步研究其對早期斷奶仔豬血清細胞因子的影響，通過給仔豬注射大腸桿菌脂多糖（LPS）建立免疫應激模型[14]，探討復方中藥對大腸桿菌LPS免疫應激斷奶仔豬的保護作用，為其臨床應用提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 飼養(yǎng)試驗設計

選用48頭28日齡斷奶、體重相近的杜長大三元雜種仔豬，隨機分為4組。空白對照組：飼喂基礎飼糧，35日齡腹腔注射100 μg/kg體重的生理鹽水；中藥組：飼喂基礎飼糧+0.3%中藥制劑，35日齡腹腔注射100 μg/kg體重的生理鹽水；內毒素組：飼喂基礎飼糧，35日齡腹腔注射100 μg/kg體重的大腸桿菌LPS；中藥+內毒素組：飼喂基礎飼糧+0.3%中藥制劑，35日齡腹腔注射100 μg/kg體重的大腸桿菌LPS。

試驗期為14 d，于2015年8月16—29日在山西太原某豬場進行。豬舍、飼養(yǎng)條件、衛(wèi)生環(huán)境、飼料品質及其他飼養(yǎng)管理等均相同，試驗豬常規(guī)免疫，自由采食和飲水。試驗開始第7天采血進行細胞因子測定。試驗開始第14天，稱重，觀察中藥對免疫應激仔豬生長性能的影響，將另文報道。試驗基礎飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 試驗基礎飼糧組成及營養(yǎng)水平

1.2 中藥制劑

山西省農業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)研究所中獸醫(yī)藥研究室負責中藥的選擇、組方。組方由茯苓乙醇提取物、魚腥草乙醇提取物、白頭翁乙醇提取物、白術乙醇提取物、麥冬乙醇提取物、黨參乙醇提取物、當歸乙醇提取物、姜黃乙醇提取物、山楂水提取物、葡萄糖、蒙脫石等按一定比例組成；所有中藥均購自河北安國市祁瑞中藥材有限責任公司。

乙醇提取物的制備：將原料清洗干凈，放入提取罐中，加入9～10倍量體積分數(shù)為80%的乙醇，回流提取3次，每次分別為2 h、1 h、1 h，過濾，合并提取液；將提取液減壓回收乙醇，并濃縮至相對密度1.20～1.25，得提取物浸膏；提取物浸膏經噴霧干燥機干燥即可。

水提取物的制備：將山楂粉碎成顆粒，加水浸泡1～3 h，加入原料8～12倍量水煎煮2～3次，過濾，合并煎煮液；將煎煮液減壓濃縮至相對密度1.20～1.25，噴霧干燥后得混合提取物。

1.3 LPS

大腸桿菌血清型055:B5，Sigma公司產品，注射時用生理鹽水配成含LPS 500 μg/mL的溶液。

1.4 血樣采集和血清制備

試驗開始第7天，LPS注射后3 h，從各組隨機選取6頭仔豬，前腔靜脈采血10 mL于離心管中，室溫下放置20 min，3 000 r/min離心10 min，吸取血清，置于-20 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5 測定指標及方法

血清白細胞介素-1β（IL-1β）、白細胞介素-6（IL-6）和腫瘤壞死因子-α（TNF-α）的含量用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）進行測定；試劑盒均購自美國R＆D System。

1.6 數(shù)據分析

試驗數(shù)據采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件中的ANOVA程序進行方差分析和鄧肯氏（Duncan）多重比較，結果以平均值±標準差表示。

2 結果與分析

由表2可知，中藥組的白細胞介素-1β極顯著低于其它各組（P＜0.01）；內毒素組的白細胞介素-1β極顯著高于其它各組（P＜0.01）；中藥+內毒素組的白細胞介素-1β極顯著低于內毒素組（P＜0.01），極顯著高于中藥組（P＜0.01），顯著高于空白對照組（P＜0.05）。中藥組的白細胞介素-6、腫瘤壞死因子-α與空白對照組差異不顯著（P＞0.05），極顯著低于內毒素組和中藥+內毒素組（P＜0.01）；內毒素組的白細胞介素-6、腫瘤壞死因子-α極顯著高于其它各組（P＜0.01）；中藥+內毒素組的白細胞介素-6、腫瘤壞死因子-α極顯著低于內毒素組（P＜0.01），極顯著高于中藥組和空白對照組（P＜0.01）。

表2 中藥對LPS免疫應激斷奶仔豬血清細胞因子的影響

3 討論

細胞因子在免疫應答與免疫調節(jié)中發(fā)揮重要作用，細胞因子的檢測在評價免疫狀態(tài)、探討免疫應激發(fā)生機制及免疫的營養(yǎng)調控中都有重要意義[15-17]。IL-1β、IL-6、TNF-α等細胞因子是炎癥細胞在炎癥反應過程中產生的蛋白質，其含量高低反映著炎癥反應狀態(tài)[18]。免疫應激指動物在受到能誘發(fā)免疫反應的病原和非病原因素刺激時所出現(xiàn)的一系列神經內分泌反應及由此而引起各種功能和代謝的改變[19]。研究表明，動物在發(fā)生免疫應激反應時，應激原會刺激單核／巨噬細胞系統(tǒng)過量分泌，并釋放IL-1β、IL-6和TNF-α等炎性細胞因子，這是引起免疫應激動物生長抑制的主要原因[20]。本試驗采用腹腔注射大腸桿菌脂多糖（LPS）的方法模擬免疫應激，測定復方中藥對注射大腸桿菌LPS后3 h細胞因子的變化。由試驗結果可知，腹腔注射大腸桿菌LPS后，斷奶仔豬血清中IL-1β、IL-6和TNF-α含量極顯著升高，說明其免疫系統(tǒng)被激活；中藥+內毒素組的中藥制劑使斷奶仔豬血清中白細胞介素-1 β、白細胞介素-6和腫瘤壞死因子-α的含量極顯著下降（P＜0.01）。結果表明中藥制劑有抗內毒素的作用，通過抑制免疫應激所引起的細胞因子水平的上升，來減輕炎癥反應對機體的損傷，有效緩解應激反應。