核轉(zhuǎn)錄因子NF-kB與肺癌骨轉(zhuǎn)移的相關(guān)性研究

劉 哲 吳芳庚 鄒俊韜 鄒平安 鐘 赟

肺癌是常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，很多肺癌患者來(lái)院就診時(shí)已伴有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的情況，其中以骨骼為靶器官轉(zhuǎn)移的病灶越來(lái)越多，且以多發(fā)為主。骨轉(zhuǎn)移中最常見(jiàn)的轉(zhuǎn)移部位為肋骨，其次為胸椎和腰椎及骨盆；也易在含有紅骨髓的軀干骨定殖，研究發(fā)現(xiàn)其較少在含黃骨髓的四肢長(zhǎng)骨生長(zhǎng)[1-2]。

核轉(zhuǎn)錄因子通路在惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中占有重要的地位，目前己經(jīng)證實(shí)的多條與惡性腫瘤的生長(zhǎng)和生存至關(guān)重要通路中NF-kB均起著重要的作用，特別是在血液系統(tǒng)疾病中的惡性腫瘤，其組成性的激活是許多疾病的發(fā)生、進(jìn)展的共同性特征標(biāo)志[3]。

本研究通過(guò)研究肺癌細(xì)胞中的NF-kB表達(dá)情況，明確NF-kB在肺癌細(xì)胞中的表達(dá)及其與發(fā)生骨轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性，為臨床治療提供依據(jù)，及早對(duì)有轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)的患者進(jìn)行預(yù)防性的判斷與治療。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2017年1月1日至2020年6月1日江西省腫瘤醫(yī)院病理科系統(tǒng)中診斷為肺癌及發(fā)生了骨轉(zhuǎn)移的42例患者經(jīng)福爾馬林固定石蠟包埋的骨轉(zhuǎn)移組織的病理標(biāo)本。入選標(biāo)準(zhǔn)：①已確診病例，②有足夠的標(biāo)本用于診斷和染色，③病案資料及聯(lián)系方式完整；排除原發(fā)性骨源性疾病。以42例肺癌骨轉(zhuǎn)移疾病患者病理組織作為研究對(duì)象。收集肺癌骨轉(zhuǎn)移患者在初次確診時(shí)的相關(guān)臨床資料，包括性別、年齡、病理類型(常規(guī)病理及免疫組化)、病灶的大小、受累區(qū)域、肺癌腫瘤標(biāo)志物。所有病例的病理診斷均由我院病理科明確。病例入組后，由至少一名以上的具有高級(jí)職稱的病理醫(yī)師負(fù)責(zé)對(duì)所有病例標(biāo)本的病理切片按照肺癌國(guó)際診斷及分類標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行復(fù)核，并根據(jù)相關(guān)的基線資料，由臨床主治醫(yī)師及以上的醫(yī)生進(jìn)行分期。隨機(jī)選取42例未發(fā)生骨轉(zhuǎn)移即早期肺癌患者標(biāo)本作為對(duì)照組。

1.2 試劑與方法

兔抗人NF-kB p65單克隆抗體購(gòu)自美國(guó)cell signaling公司，實(shí)驗(yàn)中抗原修復(fù)采用的是檸檬酸鈉緩沖液熱抗原修復(fù)，即S-P免疫組織化學(xué)法，并以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照組，使用已知陽(yáng)性病理切片作為陽(yáng)性對(duì)照使用。

1.3 結(jié)果判斷

NF-ΚB染色陽(yáng)性定位于細(xì)胞核之中，染色表現(xiàn)為棕褐色或黃色顆粒狀。每例患者隨機(jī)觀察5個(gè)高倍視野(×200)的切片，并對(duì)每例切片采用半定量積分法判斷是否為陽(yáng)性的結(jié)果。積分標(biāo)準(zhǔn)為：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≤5%為0分；>5%～25%為1分；>25%～50%為2分；>50%～75%為3分；>75%為4分；陽(yáng)性染色黃色為1分；棕黃色為2分；棕褐色為3分。兩者積分相乘，0分為陰性(-)，1～4分為弱陽(yáng)性(+)，5～8分為中度陽(yáng)性(++)，9～12分為強(qiáng)陽(yáng)性(+++)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS22統(tǒng)計(jì)軟件包比較2組的差別，采用卡方檢驗(yàn)，以P值<0.05判斷其差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 NF-kB表達(dá)在肺癌骨轉(zhuǎn)移中的表達(dá)

42例肺癌骨轉(zhuǎn)移患者中31例NF-kB陽(yáng)性，陽(yáng)性率為73.8%；42例對(duì)照組中19例NF-kB陽(yáng)性，陽(yáng)性率為42.2%，2組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=8.868，P=0.003)。

2.2 NF-kB表達(dá)與肺癌骨轉(zhuǎn)移患者臨床病理特征的關(guān)系

NF-kB的表達(dá)與腫瘤患者的性別、年齡無(wú)相關(guān)性，與腫塊大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病理類型相關(guān)(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 NF-kB表達(dá)與肺癌骨轉(zhuǎn)移患者臨床病理特征的關(guān)系(例，%)

3 討論

NF-kB這一信號(hào)分子是1986年由Sen等[4]在成熟的B淋巴細(xì)胞中所提取出的一種對(duì)細(xì)胞信號(hào)通路起到調(diào)控的重要核轉(zhuǎn)錄因子。研究發(fā)現(xiàn)NF-kB廣泛存在于真核生物中，NF-kB可以對(duì)免疫應(yīng)答、炎癥反應(yīng)起到調(diào)控作用，還參與了炎癥的急性反應(yīng)階段、細(xì)胞分化、細(xì)胞周期調(diào)控、細(xì)胞凋亡及對(duì)病毒感染的反應(yīng)等。近來(lái)的研究還發(fā)現(xiàn)，在人類乳腺癌[5]、膀胱癌[6]、胃癌[7]等多種惡性腫瘤中均發(fā)現(xiàn)有NF-kB持續(xù)活化的現(xiàn)象[8-10]，而NF-kB的持續(xù)活化能紊亂微血管的纖溶系統(tǒng)從而引起其生理機(jī)制的改變，為腫瘤血行轉(zhuǎn)移提供了血液動(dòng)力學(xué)的基礎(chǔ)[11]。NF-kB能夠參與免疫細(xì)胞的分化，增殖和活化[12-14]。NF-kB還能促進(jìn)IL-2受體，T細(xì)胞受體α、β鏈的表達(dá)，從而介導(dǎo)了IL-2的毒性損害以及T細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞粘附，導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞受損從而為腫瘤的轉(zhuǎn)移提供了條件[15-17]。NF-kB通過(guò)上調(diào)凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis，IAP)而抑制瘤細(xì)胞等的凋亡，從而加速了疾病的發(fā)生，這可能與Rel家族中不同成分及不同信號(hào)通路的刺激、傳遞有關(guān)[18-19]。

有研究表明核轉(zhuǎn)錄因子NF-kB 是重要的轉(zhuǎn)錄因子，通常以非活性形式存在幾乎所有細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中，只有被激活后，才能從細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)位于細(xì)胞核發(fā)揮重要的作用，活化的NF-kB 與腫瘤的發(fā)生發(fā)展、抗凋亡及促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)等相關(guān)。肺腺癌晚期患者易遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，轉(zhuǎn)移部位以胸腰椎、骨盆轉(zhuǎn)移及四肢長(zhǎng)骨骨干最為常見(jiàn)，其轉(zhuǎn)移的主要因素可能與腺癌病灶多位于肺組織的周邊，因此容易直接侵犯而累及肋骨、胸椎。

本研究發(fā)現(xiàn)，肺癌骨轉(zhuǎn)移組NF-kB 陽(yáng)性表達(dá)明顯高于對(duì)照組，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，提示NF-kB 與肺癌骨轉(zhuǎn)移有一定的相關(guān)性。NF-kB 的表達(dá)與患者的年齡及性別分組無(wú)關(guān)，但與腫瘤病灶的大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及病理類型相關(guān)。小細(xì)胞肺癌的腫瘤中 NF-kB 的表達(dá)高于腺癌和鱗狀細(xì)胞癌。目前國(guó)內(nèi)外未見(jiàn)報(bào)道，具體機(jī)制尚有待探討。NF-kB 被活化后進(jìn)一步促進(jìn)了腫瘤的惡性進(jìn)展，并且發(fā)現(xiàn)存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的腫瘤組織較無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的表達(dá)增高，這說(shuō)明NF-kB 有可能參與了腫瘤的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移。在以后的臨床中，NF-kB水平變化在骨轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)較高的患者的篩查中可能起到預(yù)警的作用。