攀枝花市2019-2020年縣（區(qū)）獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力比對(duì)結(jié)果分析

張昕彤，熊 杰，梁易曉，蒲楊柳，陳富忠，胡生富

（四川省攀枝花市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，四川 攀枝花 617000）

為全面提升基層獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力和動(dòng)物疫情監(jiān)測(cè)預(yù)警水平，推進(jìn)各級(jí)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室重視實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)工作。2019 至2020 年，攀枝花市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心組織全市5個(gè)縣（區(qū)）級(jí)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展了H5亞型禽流感抗體、O型口蹄疫抗體、豬瘟抗體、小反芻獸疫抗體和非洲豬瘟病毒核酸共5項(xiàng)檢測(cè)項(xiàng)目能力比對(duì)。結(jié)果顯示，2019年全市各縣（區(qū)）平均檢測(cè)準(zhǔn)確率為94%，其中H5-AI Ab 檢測(cè)準(zhǔn)確率為88%，豬瘟和小反芻獸疫抗體檢測(cè)準(zhǔn)確率均為100%；2020年全市各縣（區(qū)）平均檢測(cè)準(zhǔn)確率為95.7%，其中H5-AI Ab 檢測(cè)準(zhǔn)確率為96%，O-FMD Ab 檢測(cè)準(zhǔn)確率為100%，ASFV 核酸檢測(cè)準(zhǔn)確率為90%（其中有一縣區(qū)不具備檢測(cè)能力，未開(kāi)展此項(xiàng)檢測(cè)）。結(jié)果表明，2019 年至2020年，全市縣（區(qū)）獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室整體檢測(cè)水平穩(wěn)步提升，其中ELISA測(cè)抗體的方法掌握較好，HA-HI方法檢測(cè)能力也有一定提升，而熒光定量PCR 檢測(cè)病毒核酸的技術(shù)還有待提高。

獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室是指隸屬于各級(jí)獸醫(yī)主管部門，承擔(dān)動(dòng)物疫病檢測(cè)、診斷和監(jiān)測(cè)等工作的獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室，而實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力比對(duì)是加強(qiáng)獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室管理的主要抓手，也是評(píng)價(jià)和提高實(shí)驗(yàn)室管理水平和檢測(cè)能力的重要手段。檢測(cè)能力比對(duì)結(jié)果客觀地反映了全市縣（區(qū)）獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力，提示獸醫(yī)主管部門應(yīng)重視獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力比對(duì)工作，進(jìn)一步加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室建設(shè)，加大資金投入，提升技術(shù)人員業(yè)務(wù)能力，規(guī)范實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)流程，保證檢測(cè)結(jié)果的正確率。為更好地發(fā)揮比對(duì)結(jié)果的作用，攀枝花市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心對(duì)比對(duì)結(jié)果進(jìn)行了總結(jié)和分析，旨在為今后的相關(guān)工作提供參考，以求在今后的工作中改正不足、提升水平，為全市重大動(dòng)物疫病防控打下堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 比對(duì)項(xiàng)目

2019年全市各縣（區(qū)）實(shí)驗(yàn)室因人員及設(shè)施設(shè)備等原因無(wú)法開(kāi)展病原學(xué)檢測(cè)，所以此次比對(duì)試驗(yàn)所設(shè)項(xiàng)目均為血清學(xué)檢測(cè)。分別設(shè)有豬瘟抗體、小反芻獸疫抗體和H5亞型禽流感抗體（H5-AI Ab）檢測(cè)3個(gè)項(xiàng)目，各縣（區(qū)）實(shí)驗(yàn)室從中抽取2個(gè)項(xiàng)目進(jìn)行比對(duì)檢測(cè)。

2020 年全市共設(shè)H5-AI Ab、O 型口蹄疫抗體（O-FMD Ab）和非洲豬瘟病毒（ASFV）核酸檢測(cè)3 個(gè)比對(duì)項(xiàng)目。為適應(yīng)非洲豬瘟防控需要，攀枝花市首次將ASFV核酸檢測(cè)納入比對(duì)項(xiàng)目。除一個(gè)縣（區(qū)）實(shí)驗(yàn)室不具備ASFV核酸檢測(cè)能力外，其余縣（區(qū)）均參加此次3個(gè)項(xiàng)目。

1.2 比對(duì)方法

H5-AI Ab檢測(cè)采用HA-HI方法，豬瘟抗體檢測(cè)采用阻斷ELISA方法，小反芻獸疫抗體和O-FMD Ab檢測(cè)采用ELISA方法，ASFV核酸檢測(cè)采用熒光定量PCR方法，具體操作參照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。

1.3 比對(duì)材料

1.3.1 比對(duì)試劑

由攀枝花市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心統(tǒng)一提供禽流感病毒H5 亞型（Re-11 株）血凝抑制試驗(yàn)抗原（哈爾濱維科生物技術(shù)有限公司）和標(biāo)準(zhǔn)陰性、陽(yáng)性血清；豬瘟、小反芻獸疫和口蹄疫病毒O 型ELISA 抗體檢測(cè)試劑盒（無(wú)錫優(yōu)聯(lián)）；非洲豬瘟病毒熒光PCR 檢測(cè)試劑盒（青島立見(jiàn)診斷技術(shù)發(fā)展中心），其中DNA提取試劑由各實(shí)驗(yàn)室自備。

1.3.2 比對(duì)樣品

每個(gè)項(xiàng)目每個(gè)縣（區(qū)）準(zhǔn)備比對(duì)樣品5份，并設(shè)置重復(fù)樣品。其中H5-AI Ab 檢測(cè)比對(duì)樣品抗體滴度設(shè)置﹤1 log2、4 log2 和7 log2 3 個(gè)參考值（哈爾濱維科生物技術(shù)有限公司制備）；豬瘟、小反芻獸疫抗體和O-FMD Ab 及ASFV 核酸檢測(cè)比對(duì)樣品設(shè)置陰性、陽(yáng)性2 個(gè)參考值。隨機(jī)抽取，驗(yàn)證后制備盲樣，進(jìn)行分裝、編號(hào)和保存，由各縣（區(qū)）自行領(lǐng)取。

1.3.3 評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)

H5-AI Ab檢測(cè)：檢測(cè)結(jié)果與參考值一致或±1；

豬瘟、小反芻獸疫抗體和O-FMD Ab 及ASFV 核酸檢測(cè)：陽(yáng)性樣品檢測(cè)結(jié)果為“陽(yáng)性”，陰性樣品檢測(cè)結(jié)果為“陰性”。

2 結(jié)果

2.1 總體結(jié)果

2019 年全市各縣（區(qū)）平均檢測(cè)準(zhǔn)確率為94%，其中H5-AI Ab 檢測(cè)準(zhǔn)確率為88%，豬瘟和小反芻獸疫抗體檢測(cè)準(zhǔn)確率為100%；2020年全市各縣（區(qū)）平均檢測(cè)準(zhǔn)確率為95.7%，其中H5-AI Ab 檢測(cè)準(zhǔn)確率為96%，O-FMD Ab檢測(cè)準(zhǔn)確率為100%，ASFV核酸檢測(cè)準(zhǔn)確率為90%。具體詳見(jiàn)表1、表2。

表1 2019年全市各縣（區(qū)）實(shí)驗(yàn)室比對(duì)結(jié)果匯總表

表2 2020年全市各縣（區(qū)）實(shí)驗(yàn)室比對(duì)結(jié)果匯總表

2.2 豬瘟、小反芻獸疫抗體和O-FMD Ab檢測(cè)結(jié)果

2019 年有2 個(gè)縣（區(qū)）抽到豬瘟抗體檢測(cè)，3 個(gè)縣（區(qū)）抽到小反芻獸疫抗體檢測(cè)，檢測(cè)準(zhǔn)確率均為100%；2020 年5 個(gè)縣（區(qū)）的O-FMD Ab 檢測(cè)準(zhǔn)確率均為100%。

2.3 H5-AI Ab檢測(cè)結(jié)果

2019 年有3 個(gè)縣（區(qū)）檢測(cè)準(zhǔn)確率為100%，有2 個(gè)縣（區(qū)）檢測(cè)準(zhǔn)確率分別為60%和80%，其中參考值為7 log2的樣品，有2個(gè)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果相差2個(gè)滴度，參考值為4 log2的樣品，有1個(gè)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果相差2個(gè)滴度；2020年有4個(gè)縣（區(qū)）檢測(cè)準(zhǔn)確率為100%，有1個(gè)縣（區(qū)）檢測(cè)準(zhǔn)確率為80%，其中參考值為4 log2 的樣品，此實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果相差2個(gè)滴度。

2.4 ASFV核酸檢測(cè)結(jié)果

2019 年未開(kāi)展此比對(duì)項(xiàng)目，2020 年首次納入比對(duì)項(xiàng)目，其中有3 個(gè)縣（區(qū)）檢測(cè)準(zhǔn)確率為100%，1 個(gè)縣（區(qū)）檢測(cè)準(zhǔn)確率為60%，有2個(gè)陽(yáng)性樣品未檢出，還有1個(gè)縣（區(qū)）不滿足條件，未參加此項(xiàng)目檢測(cè)。

3 分析

3.1 從總體比對(duì)結(jié)果來(lái)看

縣（區(qū)）獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室整體檢測(cè)水平穩(wěn)步提升。檢測(cè)準(zhǔn)確率從2019 年的94%上升到2020 年的95.7%，說(shuō)明全市縣（區(qū)）級(jí)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室具備檢測(cè)相應(yīng)動(dòng)物疫病的能力，但個(gè)別實(shí)驗(yàn)室個(gè)別項(xiàng)目檢測(cè)結(jié)果仍有偏差，還需查找原因并加以改進(jìn)提高。

3.2 從不同檢測(cè)項(xiàng)目的比對(duì)結(jié)果來(lái)看

ELISA ＞HA-HI ＞PCR（詳見(jiàn)下圖）。ELISA 檢測(cè)抗體方法檢測(cè)準(zhǔn)確率最高，均為100%，可能與ELISA作為最常用的血清學(xué)檢測(cè)方法，采用成品的檢測(cè)試劑盒，操作過(guò)程較為簡(jiǎn)單，試驗(yàn)不易受主觀因素影響有關(guān)；HA-HI檢測(cè)抗體方法準(zhǔn)確率從2019 年的88%上升到2020 年的96%，說(shuō)明全市部分縣（區(qū)）實(shí)驗(yàn)室HA-HI 試驗(yàn)檢測(cè)能力有一定提高，但HA-HI試驗(yàn)易受儀器設(shè)備、抗原、紅細(xì)胞、人員操作及主觀判讀等因素影響，試驗(yàn)結(jié)果易出現(xiàn)偏差；PCR檢測(cè)方法作為病原學(xué)檢測(cè)常用的檢測(cè)方法，從樣品處理、核酸提取、擴(kuò)增到結(jié)果判定，操作過(guò)程比較復(fù)雜，對(duì)儀器設(shè)備和操作人員技術(shù)要求較高，從比對(duì)結(jié)果可以看出，全市還有一個(gè)實(shí)驗(yàn)室因不滿足條件而未開(kāi)展此項(xiàng)目檢測(cè)，另外一個(gè)實(shí)驗(yàn)室則是未檢出陽(yáng)性樣品，原因可能有以下幾點(diǎn)：一是與其實(shí)驗(yàn)室購(gòu)置的簡(jiǎn)易PCR 檢測(cè)儀器靈敏度及提取試劑盒有關(guān)，二是與其移液器等儀器設(shè)備未定期進(jìn)行質(zhì)量檢定有關(guān)，三是病毒核酸檢測(cè)技術(shù)剛在縣級(jí)實(shí)驗(yàn)室普及，人員操作不熟練。

圖 2019-2020年不同檢測(cè)項(xiàng)目準(zhǔn)確率對(duì)比圖

實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)工作是做好動(dòng)物疫病防控的技術(shù)支撐，檢測(cè)能力水平的高低、檢測(cè)結(jié)果的正確與否直接關(guān)系到今后疫病防控工作的推進(jìn)和各項(xiàng)防控措施的實(shí)施。通過(guò)能力比對(duì)可以看出全市縣級(jí)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力仍需加強(qiáng)，具體可從以下方面著手：一是加強(qiáng)組織領(lǐng)導(dǎo)，強(qiáng)化實(shí)驗(yàn)室建設(shè)。加大實(shí)驗(yàn)室資金的投入，配置精良儀器設(shè)備并定期檢定更新。二是定期開(kāi)展實(shí)驗(yàn)室人員操作技能培訓(xùn)，提升人員素養(yǎng)，穩(wěn)定人員隊(duì)伍。三是完善實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系和生物安全管理體系，嚴(yán)格操作程序，規(guī)范實(shí)驗(yàn)活動(dòng)，保證實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)工作常態(tài)化，提高實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)工作規(guī)范性和科學(xué)性。