TP-ELISA、TRUST和TPPA聯(lián)合檢測在梅毒診斷中的臨床價值分析

王瀾

摘? 要：目的? 探討梅毒螺旋體-酶聯(lián)免疫吸附試驗（TP-ELISA）、甲苯胺紅不加熱血清學(xué)試驗（TRUST）和梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗（TPPA）聯(lián)合檢測對梅毒的診斷價值。方法? 對2018年1月～2020年1月韶關(guān)市慢性病防治院收治的1 397例性病患者進(jìn)行回顧性研究，均行TP-ELISA、TRUST和TPPA檢測，對比陽性檢出率和診斷效能（敏感性、特異性、準(zhǔn)確性、陽性預(yù)測值和陰性預(yù)測值）。結(jié)果? TP-ELISA和TPPA對梅毒抗體的陽性檢出率和診斷效能對比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），兩種方式陽性檢出率和診斷效能均高于TRUST，與單一診斷方式相比，三種方式聯(lián)合應(yīng)用診斷價值更高，組間對比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論? 聯(lián)合應(yīng)用TP-ELISA、TRUST和TPPA，可對梅毒予以準(zhǔn)確診斷，值得臨床應(yīng)用。

關(guān)鍵詞：梅毒螺旋體-酶聯(lián)免疫吸附試驗;甲苯胺紅不加熱血清學(xué)試驗;梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗;梅毒;診斷效能

中圖分類號：R759.1? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A? ? 文章編號：1009-8011（2021）-18-0136-03

梅毒為慢性傳播性疾病，由蒼白密螺旋體所致，疾病發(fā)生早期，可對患者皮膚黏膜造成損傷。發(fā)展至晚期可對患者心血管、神經(jīng)和骨骼等組織造成損傷，疾病表現(xiàn)個體差異明顯，典型性不足，誤診與漏診風(fēng)險大[1-2]?，F(xiàn)階段，臨床探討出多種方式對梅毒進(jìn)行血清學(xué)檢查，梅毒螺旋體-酶聯(lián)免疫吸附試驗（TP-ELISA）、甲苯胺紅不加熱血清學(xué)試驗（TRUST）和梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗（TPPA）是常用的三種診斷方式，其診斷敏感性和特異性各有差異，應(yīng)用原理也存在明顯差別[3-4]。為促進(jìn)疾病診斷價值的提升，本文選取韶關(guān)市慢性病防治院收治的1 397例性病患者為研究對象，對三種方式聯(lián)合應(yīng)用的診斷價值進(jìn)行如下總結(jié)。

1? 資料與方法

1.1? 一般資料

選取2018年1月～2020年1月韶關(guān)市慢性病防治院收治的1 397例性病患者為研究對象，其中男721例，女676例;年齡22～70歲，平均年齡（50.12±2.24）歲。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，患者均自愿簽署知情同意書。

1.2? 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡20～70歲者;②對文中所用檢查方式可耐受者。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①采血后需行手術(shù)治療者;②需行輸血治療者;③存在免疫系統(tǒng)病變者;④存在其他類型性傳播疾病者。

1.3? 方法

1.3.1? 標(biāo)本采集

在1 397例疑似患者晨起空腹?fàn)顟B(tài)下抽取肘靜脈血5 mL，置于離心機(jī)處理，轉(zhuǎn)速為3 500 r/min，時長為10 min，取離心后清液待測。

1.3.2? 儀器與試劑

TP-ELIAS試劑盒（生產(chǎn)企業(yè)：廈門英科新創(chuàng)科技有限公司，國藥準(zhǔn)字S20000066），TRUST試劑盒（生產(chǎn)企業(yè)：上海榮盛生物科技有限公司，國藥準(zhǔn)字S10940098），TPPA試劑盒（生產(chǎn)企業(yè)：日本富士瑞必歐株式會社珠海麗珠有限公司，國械注進(jìn)20173406813）。

1.3.3? 試驗方法

TP-ELISA：以Nichol株為抗原，將高純度梅毒螺旋體特異抗原包被于微反應(yīng)孔，加入酶標(biāo)抗原和血清標(biāo)本，形成梅毒螺旋體抗原-梅毒螺旋體抗體-酶標(biāo)梅毒螺旋體抗原復(fù)合夾心物，顯色反應(yīng)通過酶底物色原液反應(yīng)，顯色越明顯表明抗體水平越高;酶標(biāo)儀波長設(shè)為450 nm、空白孔調(diào)零，對光密度進(jìn)行測量，光密度/被檢分析物量值<1即可判定為陰性，反之為陽性。

TRUST：以包被心磷脂的膽固醇為載體，經(jīng)非特異性抗體反應(yīng)形成膠體微粒;取甲苯膠紅溶液上懸浮抗原微粒，與血清抗體進(jìn)行反應(yīng)，經(jīng)肉眼觀察到紅色凝集塊即可判定為陽性，反之為陰性。

TPPA：以致敏顆粒為抗體，由精致菌體主要成分制得，包被梅毒螺旋體Nichols株，顆粒與抗體結(jié)合后，可出現(xiàn)凝集現(xiàn)象。陽性：凝集均一或為較大環(huán)狀;可疑：凝集較小、環(huán)狀分布，外緣光滑完整;陰性：顆粒呈紐扣狀分布，邊緣光滑。用稀釋溶液將血清標(biāo)本于U形板上稀釋，往其中加入顆粒，靜置2 h后觀察，致敏粒子孔稀釋倍數(shù)≥1：80為陽性。

1.4? 觀察指標(biāo)

1.4.1? 梅毒抗體檢測結(jié)果分布

分析TP-ELISA、TRUST和TPPA對梅毒抗體的陽性檢出率。

1.4.2? 梅毒抗體檢測結(jié)果對比

分析三種方式單獨(dú)使用與聯(lián)合應(yīng)用檢出梅毒抗體的真陽、假陽、真陰與假陰例數(shù)。

1.4.3? 診斷效能對比

對比單一診斷與聯(lián)合診斷方式對梅毒抗體的診斷敏感性、特異性、準(zhǔn)確性、陽性預(yù)測值和陰性預(yù)測值。計算公式：敏感性=真陽性例數(shù)/（真陽性+假陽性）例數(shù)×100%;特異性=真陰性例數(shù)/（假陰性+真陰性）例數(shù)×100%;準(zhǔn)確度=（真陽性+真陰性）例數(shù)/總例數(shù)×100%;陽性預(yù)測值=真陽性例數(shù)/經(jīng)該方案診斷為陽性例數(shù)×100%;陰性預(yù)測值=真陰性例數(shù)/經(jīng)該方案診斷為陰性例數(shù)×100%。

1.5? 統(tǒng)計學(xué)分析

采用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS 22.0進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計數(shù)資料用[n（%）]表示，組間比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2? 結(jié)果

2.1? 不同方式梅毒抗體檢測結(jié)果分布

TP-ELISA和TPPA對梅毒抗體的陽性檢出率對比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），兩種方式陽性檢出率均高于TRUST，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），三種方式陽性檢出率對有差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

2.2? 不同方式診斷結(jié)果對比

1 397例疑似患者中，375例患者經(jīng)《梅毒診斷標(biāo)準(zhǔn)》[5]確診，其中TP-ELISA檢出真陽例數(shù)為330例，真陰例數(shù)為940例，假陽例數(shù)為45例，真陰例數(shù)為82例;TRUST對應(yīng)例數(shù)分別為280例、900例、95例和122例;TPPA對應(yīng)例數(shù)分別為344例、950例、31例、72例。三種方式聯(lián)合診斷對應(yīng)例數(shù)分別為362例、980例、13例、42例。見表2。

2.3? 不同方式診斷效能對比

TP-ELISA和TPPA各項診斷效能對比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），兩種方式診斷效能均高于TRUST（P<0.001），三種方式聯(lián)合敏感性、特異性、準(zhǔn)確性、陽性預(yù)測值和陰性預(yù)測值均高于單一診斷方式，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.001）。見表3。

3? 討論

梅毒以梅毒螺旋體為病原體，可通過性接觸傳染，也可通過手術(shù)、輸血、接吻、哺乳等途徑傳播;孕婦感染梅毒后，可經(jīng)胎盤傳染胎兒，增加早產(chǎn)、流產(chǎn)風(fēng)險，影響新生人口素質(zhì)。因此，需重視疾病檢測工作，盡早診斷疾病，控制梅毒傳播[6-7]。

目前臨床主要用梅毒血清學(xué)試驗對梅毒進(jìn)行診斷，分為特異性和非特異性兩種。TPPA法是梅毒確認(rèn)試驗，它使用Nochols株，所用檢測方法為雙抗體夾心法，所得檢測結(jié)果特異性高，可開展效價測定。人體感染梅毒后，抗體將終身存在于體內(nèi)，不受疾病發(fā)展進(jìn)程和干預(yù)措施的影響，結(jié)果較為穩(wěn)定，靈敏性和特異度都比較高，假陽性概率低，可用于各期梅毒的檢測[8]。但該方式難以自動化進(jìn)行，需通過肉眼觀察，不能對原始數(shù)據(jù)進(jìn)行儲存，檢測時需稀釋樣本，樣本數(shù)量過大時，無法批量篩查，具體操作時步驟繁瑣，反應(yīng)時間長，無法進(jìn)行快速檢測，使得該試驗方案無法被廣泛應(yīng)用至梅毒鑒別診斷中。因此，應(yīng)尋找一種更為簡便、靈敏的方式對疾病進(jìn)行診斷，判定疾病嚴(yán)重程度。

TP-ELISA為基因工程檢測技術(shù)，通過使用純化基因工程包被微孔板，對梅毒螺旋體抗原示蹤物予以標(biāo)記，通過對血清和血漿標(biāo)本中的免疫球蛋白G和免疫球蛋白M檢測來對疾病進(jìn)行準(zhǔn)確診斷[9]。試驗過程中使用全自動酶免疫，可檢測大批量樣本，在獻(xiàn)血體檢和大樣本篩查中被廣泛應(yīng)用，是診斷梅毒的首選方式。待血清內(nèi)抗體含量較高時，可有前帶效應(yīng)，導(dǎo)致檢查過程中出現(xiàn)假陰性結(jié)果，降低診斷準(zhǔn)確性，單獨(dú)應(yīng)用時診斷價值并不高，應(yīng)與其他方式結(jié)合，以準(zhǔn)確診斷疾病。

TRUST為非特異性試驗的一種，以脂質(zhì)為抗原，對抗心磷脂抗體進(jìn)行檢測，其滴度與病程相關(guān)，病毒感染或疾病再次發(fā)作，可增加其滴度，予以相應(yīng)的干預(yù)措施后，可使得滴度下降。該試驗可反映抗體滴度變化，在此基礎(chǔ)上判定疾病發(fā)展情況[10]。但該方式陽性檢出率低，患者發(fā)病早期，癥狀不典型，有時出現(xiàn)陰性結(jié)果，存在誤診漏診情況。

TPPA、TP-ELISA和TRUST均是檢查梅毒螺旋體的血清學(xué)方法，各有其優(yōu)缺點(diǎn)：①TPPA有著較好的靈敏度和特異性，操作過程復(fù)雜，人為因素復(fù)雜，易出現(xiàn)誤差，成本高，無法進(jìn)行快速檢測;②TP-ELISA結(jié)果簡潔，數(shù)據(jù)易保存，成本低，很少出現(xiàn)人為原因?qū)е碌恼`差，但仍有假陰性結(jié)果出現(xiàn)，因此對于高度疑似而TP-ELISA檢測結(jié)果為陰性者，應(yīng)對血清樣本行梯度稀釋處理后再檢測，以免稀釋倍數(shù)不足出現(xiàn)假陰性結(jié)果;③TRUST操作簡便，靈敏度和特異性都不高，易出現(xiàn)假陽性結(jié)果，主要被用在療效判定、復(fù)發(fā)預(yù)測和再感染評估中。上述方式均在梅毒螺旋體檢測中發(fā)揮作用，但都不能作為感染梅毒螺旋體的絕對依據(jù)，即便檢測結(jié)果為陰性，也不能排除感染的存在。因此應(yīng)在條件允許的基礎(chǔ)上聯(lián)合運(yùn)用三種檢測方式，既可獲得較高的靈敏度與特異性，也能減少其他疾病和待測樣本中其他物質(zhì)導(dǎo)致的假陽性和假陰性結(jié)果，對疾病予以準(zhǔn)確診斷。綜合分析各種檢查結(jié)果，追蹤弱陽性患者，以降低誤診與漏診風(fēng)險。林明春等人[11]聯(lián)合應(yīng)用三種檢測方式，結(jié)果顯示診斷靈敏度和特異度分別為98.28%和94.74%，診斷價值更高，考慮可在TP-ELISA篩查的基礎(chǔ)上，進(jìn)行TRUST和TPPA篩查，以準(zhǔn)確診斷梅毒。文中數(shù)據(jù)顯示，三種方式聯(lián)合應(yīng)用診斷效能更高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。因此綜合運(yùn)用多種檢驗方式，可互相補(bǔ)充，進(jìn)一步提高對梅毒確診率。

綜上所述，TP-ELISA、TRUST和TPPA聯(lián)合診斷梅毒準(zhǔn)確性和特異性都比較高，可準(zhǔn)確預(yù)測疾病，進(jìn)而提高疾病確診率。

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