β-連接蛋白在浸潤性小葉癌和浸潤性導管癌鑒別診斷中的價值研究

白璐

ILC 為臨床上常見的乳腺惡性上皮性腫瘤,發(fā)病率僅低于IDC,在浸潤性乳腺癌樣本總量中所占比例為5.0%～15.0%。與IDC 比較,ILC 患者臨床癥狀、影像學檢查表征缺乏特異性,盡管IDC 患者很少出現(xiàn)淋巴轉(zhuǎn)移,但容易向肺、骨、子宮等處轉(zhuǎn)移。臨床早期、準確診斷ILC,是擬定臨床治療方案的重要基礎(chǔ)。但在組織學形態(tài)上部分IDC 與ILC 易混淆,故而選擇適宜的化學標記物進行檢測,是臨床鑒別診斷IDC 與ILC的關(guān)鍵［1］。E-鈣粘蛋白(E-cadherin)、P120 均是當前臨床上常用的輔助鑒別指標,在IDC 內(nèi)兩者均表達,但在ILC 內(nèi)前者表達缺失,后者多表達于細胞質(zhì)中。但約有10%的ILC 患者會出現(xiàn)E-cadherin 表達,部分時P120 定位難度高的情況,故而繼續(xù)利用新標記物輔助鑒別診斷IDC 與ILC?，F(xiàn)已證實,多種細胞增殖、轉(zhuǎn)移及轉(zhuǎn)移過程中均有Wnt 信號通路的參與,β-連接蛋白為Wnt 通路內(nèi)的重要調(diào)控因子之一,在調(diào)整細胞間粘附性方面發(fā)揮重要作用［2］。本文主要探究其在IDC與ILC 內(nèi)的表達情況,解讀其診斷價值,現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 采集2018 年4 月～2019 年8 月行手術(shù)切除術(shù)的60 例乳腺癌患者作為研究對象,均為女性,均因發(fā)現(xiàn)乳腺腫塊就診入組。結(jié)合浸潤性不同分為IDC組(35 例)、ILC 組(16 例)和IDC+ILC 組(9 例)。IDC組年齡31～64 歲,平均年齡(44.7±6.5)歲。ILC 組年齡30～62 歲,平均年齡(45.1±5.7)歲。IDC+ILC 組年齡31～65 歲,平均年齡(45.7±6.5)歲。三組患者的一般資料比較,差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05),具有可比性。本次研究通過醫(yī)學倫理委員會審批,患者及家屬知情同意。

1.2方法 采集所有研究對象的組織標本,使用10.0%福爾馬林溶液予以常規(guī)固定,石蠟包裹厚度為4 μm 的切片。免疫組化技術(shù)采用EnVision 兩步法,嚴格依照說明書對標本做染色處理。β-連接蛋白、E-cadherin、P120 均來源于兔抗人多克隆,水浴枸櫞酸對抗原進行修復處理,陽性對照均選定為乳腺正常導管上皮細胞。

1.3觀察指標及判定標準 分析比較β-連接蛋白在正常乳腺組織與IDC 內(nèi)的表達情況,β-連接蛋白于ILC 內(nèi)的表達情況,并分析β-連接蛋白與E-cadherin及P120 表達情況的相關(guān)性。判斷染色結(jié)果：正常機體中,β-連接蛋白于細胞膜上表達,當觀察到細胞膜呈現(xiàn)出黃或棕黃染色時被判定為陽性細胞；β-連接蛋白異常表達的場所有細胞質(zhì)及核內(nèi),將質(zhì)與核顯黃或棕黃染色時判定為陽性。E-cadherin、P120 均表達在細胞膜或質(zhì)內(nèi),陽性時細胞膜或質(zhì)呈黃或者為棕黃色。

1.4統(tǒng)計學方法 采用SPSS22.0 統(tǒng)計學軟件對數(shù)據(jù)進行處理。計量資料以均數(shù)±標準差()表示,采用t 檢驗；計數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗,相關(guān)性分析采用Spearman 分析。P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1β-連接蛋白在正常乳腺組織與IDC 內(nèi)的表達情況 60 例患者癌旁與瘤體內(nèi)殘存的正常乳腺組織中,β-連接蛋白在上皮細胞膜上表現(xiàn)出連貫的強陽性表達,陽性率為100.0%(60/60)。IDC 組中,22 例患者的β-連接蛋白在細胞膜上呈強陽性表達,陽性率為62.9%(22/35),其他13 例表現(xiàn)為細胞質(zhì)與核內(nèi)棕黃色染色的異常表達,陽性率為37.1%(13/35)。IDC+ILC 組中,5 例患者的β-連接蛋白在細胞膜上呈強陽性表達,陽性率為55.6%(5/9),其他4 例患者表現(xiàn)為細胞質(zhì)與核內(nèi)棕黃色染色的異常表達,陽性率為44.4%(4/9)。IDC 組和IDC+ILC 組的β-連接蛋白表達情況比較,差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。

2.2β-連接蛋白于ILC 內(nèi)的表達情況 采用免疫組化檢測ILC 組與IDC+ILC 組患者ILC 內(nèi)β-連接蛋白的表達情況,ILC 組16 例患者β-連接蛋白均表達為陰性,即提示該類免疫組織標記物的陽性表達缺失,陰性率為100.0%(16/16)。但是與IDC+ILC 組9 例患者的ILC 成分內(nèi)和IDC 及生理狀態(tài)正常乳腺導管上皮細胞相比較,β-連接蛋白表達顯著缺失,陰性率為100.0%。ILC 組與IDC+ILC 組ILC 成分內(nèi)β-連接蛋白表達情況比較,差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。IDC 組細胞質(zhì)/核異常表達率為37.1%(13/35),IDC 組和ILC組的β-連接蛋白表達情況比較,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。見表1。

2.3β-連接蛋白與E-cadherin 及P120 表達情況的相關(guān)性分析 60 例患者乳腺癌癌旁與殘存的健康乳腺組織上皮內(nèi),E-cadherin 與P120 均呈現(xiàn)出連貫的細胞膜染色強陽性,陽性率均為100.0%(60/60)；在IDC 組35 例與IDC+ILC 組9 例患者IDC 成分內(nèi),E-cadherin與P120 都表現(xiàn)為連續(xù)性的細胞膜染色強陽性,陽性率均為100.0%。經(jīng)分析發(fā)現(xiàn),E-cadherin、P120 與β-連接蛋白表達程度呈正相關(guān)(r=0.994、0.872,P＜0.05)。但是在ILC 組16 例與IDC+ILC 組9 例患者ILC 成分內(nèi),E-cadherin 的表達程度均有不斷弱化趨勢,甚至出現(xiàn)缺失,與β-連接蛋白缺失表達程度呈正相關(guān)(r=0.987、0.925,P＜0.05)。但是與在IDC 及正常乳腺上皮細胞上的表達形式不同,在ILD 與混合型癌并發(fā)的病例內(nèi)P120 均呈現(xiàn)為細胞質(zhì)棕黃色染色,β-連接蛋白表達缺失,兩種標記物的表達情況比較,差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。見表2。

表1 β-連接蛋白在IDC 組和ILC 組的表達情況比較［n(%)］

表2 不同標記蛋白在ILC 與混合型癌ILC 成分內(nèi)表達情況比較［n(%),n=25］

3 討論

ILC 是僅次于IDC 的第二個常見病理學類型,IDC、ILC 在分子表型、細胞學形態(tài)與生物學屬性方面均存在差異,故而患者預(yù)后固然有別。腫瘤細胞失去粘附力、呈印度列兵樣或環(huán)繞導管靶環(huán)樣羅列生長及缺乏顯著管腔等是ILC 的主要病理改變［3］。在臨床上,乳腺癌是一個異質(zhì)性腫瘤,同類或同一患者的乳腺癌組織形態(tài)也可能存在較明顯區(qū)別,臨床實踐中不乏一些有小葉表征的IDC,其在組織結(jié)構(gòu)、細胞樣態(tài)等諸多方面均表現(xiàn)出較高相似性,該類IDC 腺癌瘤體偏大,可促成微小型的巢團,但依然會表現(xiàn)出喪失粘附性的細胞樣態(tài),和經(jīng)典的ILC 精確區(qū)分難度較大［4］。

E-cadherin 表達缺失為ILC 的特異性表征,E-cadherin 水平下降會誘導細胞之間粘附性銜接降低、極性弱化,細胞由上皮樣轉(zhuǎn)型成間質(zhì)樣,以上改變?yōu)樯掀らg質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)的一種重要標識［5］。E-cadherin 下調(diào)所誘導的EMT 對細胞遷徙過程有促進作用,強化細胞的遷徙能力,誘發(fā)轉(zhuǎn)移過程。相比之下,ILC 根容易朝遠處轉(zhuǎn)移,并且常見的轉(zhuǎn)移位置和IDC 存在差異,以骨、胃腸道、卵巢等較為常見。當下臨床多結(jié)合E-cadherin 與P120 表達情況辨識IDC 與ILC,在IDC內(nèi)以上兩種標記蛋白均呈現(xiàn)為細胞質(zhì)著色,但在現(xiàn)實操作中很難準確判斷E-cadherin 的表達程度,并且在人工操作因素干擾下很難能區(qū)分P120 在細胞膜或質(zhì)上的著色狀況［6］。鑒于以上情況,國內(nèi)外諸多臨床學者均在尋覓一個新標記物鑒別診斷腺癌。

β-連接蛋白為Wnt 通路內(nèi)一種重要的活化因子,現(xiàn)已證實該因子參與胚胎發(fā)育、器官生長及腫瘤發(fā)生發(fā)展諸多過程,并發(fā)揮重要作用。當Wnt 通路被活化時,β-連接蛋白無法降解并被整合至細胞核內(nèi),和轉(zhuǎn)錄因子互為作用并驅(qū)動轉(zhuǎn)錄過程,對部分基因表達過程起到一定調(diào)控作用,同時誘導腫瘤疾病的發(fā)生過程。β-連接蛋白也是機體內(nèi)一種粘附因子,在E-cadherin與catenin 蛋白銜接過程發(fā)揮重要的協(xié)同作用,對組織結(jié)構(gòu)完整度與極性均起到一定維護作用［7］。本次研究中,在健康乳腺組織內(nèi)β-連接蛋白均呈強陽性表達,于IDC 內(nèi)雖然所有病例均表現(xiàn)β-連接蛋白陽性表達,但DC 內(nèi)細胞質(zhì)/核異常表達率為37.1%,提示乳腺癌疾病發(fā)生、發(fā)展過程中均可能有Wnt 通路的參與作用。ILC 組與IDC+ILC 組ILC 成分內(nèi)β-連接蛋白整體表達為陰性,且E-cadherin 表達缺失合并P120 細胞質(zhì)表達,原因可能是E-cadherin 突變進而喪失和β-連接蛋白的銜接能力導致的,相關(guān)分子機制需深入探究［8］。

綜上所述,在乳腺IDC、ILC 內(nèi)β-連接蛋白表達水平有別,可以作為臨床鑒別診斷的依據(jù)之一。