56 510例患者不規(guī)則抗體及特異性檢測結(jié)果分析

洪毅，李菲，楊陽，賈萬里，孟潔，梁蕊，剌芝芳，葉維莉

西安高新醫(yī)院輸血科，陜西 西安 710075

不規(guī)則抗體篩查是指檢測患者血清中除ABO以外的其他血型系統(tǒng)的抗體，不規(guī)則抗體主要由相關(guān)的免疫刺激產(chǎn)生，包括臨床輸血和妊娠。不規(guī)則抗體是導(dǎo)致交叉配血不相合、遲發(fā)性溶血性反應(yīng)、新生兒溶血病以及ABO血型正反定型不符的重要因素之一[1]。故對臨床患者的不規(guī)則抗體篩查有著重要的臨床意義。近年來，隨著相關(guān)輸血實(shí)驗(yàn)技術(shù)水平的不斷提高以及全自動血型儀的廣泛使用，使得不規(guī)則抗體篩查得到普及，進(jìn)一步保障了患者的輸血安全?，F(xiàn)將我院近年來對患者的不規(guī)則抗體篩查結(jié)果分析如下：

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來源 西安高新醫(yī)院輸血科2010年1月至2019年12月的門急診患者、有備血需求住院患者及常規(guī)檢測不規(guī)則抗體篩查的患者共56 510例，標(biāo)本要求為采集每例患者EDTA-K2抗凝靜脈血3 mL，用于血清學(xué)試驗(yàn)的檢測。

1.2 儀器與試劑 全自動血型分析儀(達(dá)亞美，瑞士)、離心機(jī)(久保田，日本)、水浴箱(GFL，德國)、孵育器(達(dá)亞美，瑞士)；ABO血型正反定型和RhD血型鑒定卡(達(dá)亞美，瑞士)、篩查細(xì)胞及譜細(xì)胞(上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司)；抗-C、抗-c、抗-E、抗-e、抗-M、抗-N、直接抗球蛋白試劑(上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司)；抗Lea及抗Leb(Millipore，美國)；低離子抗人球蛋白卡(達(dá)亞美，瑞士)。試驗(yàn)中使用的所有試劑批檢均合格，并且均在相應(yīng)的有效期內(nèi)使用。

1.3 檢驗(yàn)方法

1.3.1 血型鑒定 使用全自動血型分析儀，對所有患者標(biāo)本進(jìn)行ABO及RhD血型的鑒定。

1.3.2 抗體篩查 應(yīng)用低離子抗球蛋白卡進(jìn)行不規(guī)則抗體篩查。不規(guī)則抗體篩查陽性的所有標(biāo)本均需進(jìn)行復(fù)檢，采用手工試管法進(jìn)行復(fù)檢，同時(shí)排除人為、操作、試劑等的因素，確保試驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性。

1.3.3 抗體鑒定 對不規(guī)則抗體篩查陽性的樣本，送至陜西省血液中心血型參比室進(jìn)一步進(jìn)行抗體特異性的鑒定。參比實(shí)驗(yàn)室所使用的不規(guī)則抗體鑒定用譜細(xì)胞為荷蘭Sanquin公司，試驗(yàn)方法包括鹽水介質(zhì)法、特殊介質(zhì)凝聚胺法以及經(jīng)典抗球蛋白法(試管法)三種方法，對送檢的不規(guī)則抗體篩查陽性標(biāo)本進(jìn)行抗體鑒定，并對所檢出的抗體做效價(jià)測定[2-3]。

1.3.3.1 特異性抗體的鑒定 采用鹽水介質(zhì)法、特殊介質(zhì)凝聚胺法、經(jīng)典抗球蛋白法(試管法)三種方法，鑒定特異性同種抗體的標(biāo)準(zhǔn)為患者血漿或血清與譜細(xì)胞反應(yīng)有一定的格局，同時(shí)凝集強(qiáng)度在1+～4+。

1.3.3.2 非特異性抗體的鑒定 其鑒定標(biāo)準(zhǔn)為患者血漿或血清與譜細(xì)胞及自身細(xì)胞反應(yīng)的凝集強(qiáng)度無明顯的差別，同時(shí)測定的患者紅細(xì)胞放散液與譜細(xì)胞反應(yīng)在凝集強(qiáng)度上也均一致。

1.3.3.3 聯(lián)合抗體的鑒定 試管法正反定型中出現(xiàn)正反不一致，同時(shí)出現(xiàn)抗體篩查陽性以及交叉配血結(jié)果不相合，應(yīng)該考慮血清中存在IgM聯(lián)合IgG多種不規(guī)則抗體，且在不同反應(yīng)溫度有不同的反應(yīng)格局。對此類抗體鑒定方法為：(1)取患者血漿各100 μL分別加于11支試管中，再加入50 μL譜細(xì)胞于前10支試管，最后一管加入自身細(xì)胞50 μL，室溫立即離心，多次離心分別記錄反應(yīng)結(jié)果；以及增強(qiáng)反應(yīng)試驗(yàn)即將試管放置于4℃冰箱10 min后離心觀察凝集情況，對照譜細(xì)胞格局表，分析IgM類同種抗體的特異性。(2)將鹽水介質(zhì)中有凝集的試管在37℃水浴箱輕搖3 min，觀察鹽水法凝集強(qiáng)度是否有減弱，若有減弱，繼續(xù)孵育30 min進(jìn)行經(jīng)典抗球蛋白試驗(yàn)，水浴箱孵育30 min后生理鹽水洗滌3次，加入抗球蛋白試劑，離心后觀察是否有凝集，若凝集，對照譜細(xì)胞反應(yīng)格局表，分析IgG類同種抗體特異性。(3)對于同種性質(zhì)的聯(lián)合抗體，應(yīng)該根據(jù)血清與譜細(xì)胞反應(yīng)格局的凝集強(qiáng)度的強(qiáng)弱差別，逐一鑒定，如有必要時(shí)可通過吸收放散試驗(yàn)進(jìn)行進(jìn)一步的鑒定。

2 結(jié)果

2.1 不規(guī)則抗體篩查的檢出率 56 510例標(biāo)本中共檢出不規(guī)則抗體170例，檢出率為0.30%，170例不規(guī)則抗體標(biāo)本送陜西省血液中心做抗體鑒定，其中男性33例(19.4%)，女性137例(80.6%)。

2.2 不規(guī)則抗體篩查分布 170例中同種特異性抗體有145例，自身抗體25例，其中同種特異性抗體主要為抗-E 62例(36.5%)及抗-D 13例(7.64%)抗體，見表1。

表1 不規(guī)則抗體種類的分布

2.3 不規(guī)則抗體在各血型系統(tǒng)中的分布 不規(guī)則抗體在Rh血型系統(tǒng)中112例(76.9%)、Lewis系統(tǒng)13例(6.3%)、MNS系統(tǒng)20例(13.8%)，見表2。

表2 同種不規(guī)則抗體在各血型系統(tǒng)中的分布

3 討論

本文對56 510例門急診患者、住院備血患者進(jìn)行輸血前不規(guī)則抗體篩查及抗體特異性鑒定結(jié)果的分析研究，檢出不規(guī)則抗體170例，檢出率為0.3%，其中男性患者33例，占檢出率19.4%，女性患者137例，占檢出率的80.6%。結(jié)果顯示女性患者比男性患者產(chǎn)生不規(guī)則抗體的比率要高，主要為女性妊娠的原因比男性有更多得接受同種免疫刺激的機(jī)會，即女性同時(shí)存在雙重免疫刺激機(jī)會是由妊娠和輸血所引起的，因此女性患者不規(guī)則抗體篩查結(jié)果為陽性的檢出率高于男性患者[4]。本次不規(guī)則抗體鑒定試驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)顯示：IgG類不規(guī)則抗體占61.2%，IgM類所檢測出的不規(guī)則抗體占22.8%，IgG聯(lián)合IgM不規(guī)則抗體占5.52%；其中Rh血型系統(tǒng)的所檢測出的不規(guī)則抗體比例占總比率的76.9%；Lewis系統(tǒng)不規(guī)則抗體比例占總比率的9.3%；MNS系統(tǒng)不規(guī)則抗體比例占總比率的13.8%。

本試驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，Rh系統(tǒng)產(chǎn)生的不規(guī)則抗體比率較高。Rh系統(tǒng)抗體為免疫性IgG抗體，且多具有臨床意義，此類抗體可結(jié)合已致敏在患者紅細(xì)胞上的相應(yīng)抗原，形成抗原抗體復(fù)合物，被機(jī)體巨噬細(xì)胞系統(tǒng)攻擊識別，引起血管外溶血，是遲發(fā)性溶血性輸血反應(yīng)[5]。我國輸血現(xiàn)狀為只對患者的ABO血型及RhD血型進(jìn)行輸血前檢測，而對Rh血型系統(tǒng)的其他抗原包括C、c、E及e不做為常規(guī)檢測[6]，采用隨機(jī)配合性輸血，易導(dǎo)致患者在輸血后產(chǎn)生針對輸入性抗原的抗體。本次試驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)顯示：83例(48.8%)抗-E，抗-cE，抗-Ce抗體的產(chǎn)生均與患者多次輸血有關(guān)，而13例產(chǎn)生抗-D的患者均為RhD陰性孕婦，均有孕產(chǎn)史。RhD陰性孕產(chǎn)婦患者在接受到一定量的RhD陽性紅細(xì)胞的刺激后，50%～70%的孕產(chǎn)婦會產(chǎn)生Rh抗D抗體，主要是由于E、C、c、e這四個(gè)抗原的免疫原性明顯弱于RhD抗原。但是，在本調(diào)查研究中發(fā)現(xiàn)，其產(chǎn)生的對應(yīng)抗體中，抗E是最常見的抗體，其次為抗c抗體，而抗C與抗e經(jīng)常同時(shí)出現(xiàn)于同一樣本內(nèi)，這也與相關(guān)的調(diào)查結(jié)果一致[7]。因此，在以后的輸血前檢測中是否可將患者Rh血型系統(tǒng)做為常規(guī)檢測，同時(shí)輸血時(shí)選擇與患者Rh血型完全一致的血液進(jìn)行輸注，避免患者因輸血免疫產(chǎn)生抗體，或者是因免疫回憶產(chǎn)生的溶血性輸血反應(yīng)，是值得進(jìn)一步探討的問題。

MNS血型系統(tǒng)抗體是最為常見的IgM類抗體，是天然產(chǎn)生的，MNS血型系統(tǒng)中以抗M抗體常見，并且在血漿或血清中通常是以IgM形式存在?？筂抗體可通過妊娠、輸血免疫刺激產(chǎn)生，但也有無免疫刺激產(chǎn)生的個(gè)體，臨床意義顯著的是IgG性質(zhì)的抗M抗體。IgG-M抗體可導(dǎo)致交叉配血不和也有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道[8]，還可發(fā)生比較嚴(yán)重的新生兒溶血病，總之，MNS系統(tǒng)抗體多對配血結(jié)果影響不大，但在血型鑒定中易干擾反定型，影響血型鑒定的結(jié)果。Lewis血型系統(tǒng)中有6個(gè)血型抗原，Lea和Leb是最常見的兩個(gè)血型抗原，這兩種血型抗原與其他血型系統(tǒng)的抗原有所不同，主要是由于Lewis血型抗原最初存在于人體的血清和人體的唾液等分泌液中，以水溶性抗原的形式為主?？筁ea或抗Leb血清反應(yīng)的特性是被紅細(xì)胞表面所吸附，且可以放散，故由抗-Lea和抗-Leb抗體引起的輸血不良反應(yīng)較少，但也有相關(guān)個(gè)例報(bào)道[9]。介于MNS系統(tǒng)與Lewis系統(tǒng)抗體多為IgM性質(zhì)，有補(bǔ)體結(jié)合性，且偶有在37℃條件下有反應(yīng)性的抗體活性，故對于此類患者的輸血應(yīng)盡量選擇相應(yīng)血型抗原為陰性的血液，交叉配血后進(jìn)行配合性輸注，減少輸血不良反應(yīng)的發(fā)生。

IgG聯(lián)合IgM抗體的檢出是根據(jù)不同抗體性質(zhì)進(jìn)行鑒別，本研究中的一例抗-cE聯(lián)合抗-M是較為常見的混合抗體，在室溫條件下反應(yīng)檢出抗-M抗體，37℃反應(yīng)抗-M無活性，再進(jìn)行經(jīng)典抗球試驗(yàn)，檢出抗-cE抗體，最終選擇cE抗原及M抗原均陰性的紅細(xì)胞與患者進(jìn)行交叉配血。

自身抗體的檢出可提示患者有可能存在免疫系統(tǒng)的疾病，尤其是自身免疫性溶血性貧血，此類患者的試驗(yàn)特點(diǎn)是有可能存在ABO正反定型不符、抗體篩查試驗(yàn)陽性、自身反應(yīng)陽性、交叉配血不相合及譜細(xì)胞反應(yīng)全凝集等情況，對于自身抗體反應(yīng)特性的鑒定，需排除同種特異性抗體的存在。此次研究中出現(xiàn)的25例自身抗體均為非特異性自身抗體，即與譜細(xì)胞反應(yīng)凝集強(qiáng)度一致，與自身細(xì)胞反應(yīng)強(qiáng)度相當(dāng)，放散液反應(yīng)無特異性。對于此類患者輸血，嚴(yán)格把控輸血指征并結(jié)合臨床癥狀，結(jié)合藥物治療，降低溶血速率[10]。

綜上所述，不規(guī)則抗體的篩查及特異性的鑒定，可以發(fā)現(xiàn)針對臨床輸血有意義的不規(guī)則抗體，同時(shí)了解同種特異性抗體的種類、性質(zhì)以及實(shí)驗(yàn)室的檢測方法等，可以最大程度的減少溶血性輸血反應(yīng)的發(fā)生，提前預(yù)知抗體屬性，對于保障臨床患者輸血的安全性、及時(shí)性、有效性有著較為重要的臨床意義。