腹瀉型腸易激綜合征患者的腸道微生態(tài)特征

王菲，高斌

腸易激綜合征(irritable bowel syndrome)屬于臨床十分常見的一種病癥，患者癥狀表現(xiàn)以腹痛、腹瀉等為主，由于缺乏代表性，診斷較為困難[1]。據(jù)相關(guān)調(diào)查顯示，我國(guó)該病患病率超過5%，且近幾年呈增高趨勢(shì)[2]。目前，該疾病的病因尚未明確，難以通過單一藥物徹底治愈患者，因此，需要對(duì)患者腸道菌群情況予以分析，實(shí)施對(duì)癥治療[3]。本文醫(yī)院收治腹瀉型腸易激綜合征患者60例為例，與健康體檢者對(duì)比分析其腸道微生物的特征，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年4月-2019年10月就診于泰興市中醫(yī)院脾胃病專科的腹瀉型腸易激綜合征患者60例作為觀察組研究對(duì)象，包括男18例，女42例，年齡18～70(41.2±1.4)歲，病程7個(gè)月～3年，平均病程(1.4±0.6)年?；颊呔霈F(xiàn)腹瀉表現(xiàn)，無器質(zhì)性病變。選擇同期于醫(yī)院接受體檢的健康者60例作為對(duì)照組，包括男20例，女40例，年齡19～70(41.4±1.3)歲。2組性別、年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，入選者均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 方法 依照標(biāo)準(zhǔn)糞便采樣流程，嚴(yán)格遵循無菌化原則，采集2組受檢者糞便樣本50 g。采用腸道菌群細(xì)菌基因組提取試劑盒，依照試劑盒說明書及實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)程，提取制備微生物總DNA。16SrRNA擴(kuò)增與測(cè)序：對(duì)提取到的2組全基因組DNA質(zhì)檢，檢測(cè)采用光分分度法，合格者進(jìn)行V4可變區(qū)擴(kuò)增。擴(kuò)增引物：測(cè)序區(qū)域338F(ACTCCTACGGGAGGCAGCAG)-806R(GGACTACHVGGGTWTCTAAT)。擴(kuò)增條件：94 ℃變性、50 ℃退火、72 ℃延伸各30 s。PCR產(chǎn)物均一化處理后建庫(kù)，PCR驗(yàn)采用Trans Gen AP221-02，20 μl反應(yīng)體系，體系成分：2.5 mM dNTPs，F(xiàn)astPfu Polymerase，ddH2O，5×FastPfu Buffer，F(xiàn)orward Primer，BSA，Template DNA，Reverse Primer。測(cè)序平臺(tái)系統(tǒng)：Illumina系統(tǒng)。

觀察組采取復(fù)合乳酸菌腸溶膠囊(聚克)聯(lián)合健脾安神合劑治療，聚克每次0.66 g，每天3次，健脾安神合劑每次20 ml，每天3次。持續(xù)治療1個(gè)月，觀察治療效果。

1.3 觀察指標(biāo) 觀察2組16SrRNA基因測(cè)序結(jié)果，統(tǒng)計(jì)覆蓋率，比較2組腸道菌群主要科屬分布差異，統(tǒng)計(jì)觀察組治療有效率。

2 結(jié) 果

2.1 腸道微生態(tài)比較 在97%相似度條件下，對(duì)序列進(jìn)行操作單元聚類，獲得OTU代表序列48 132個(gè)，包括綱水平4 806個(gè)、科水平47 553個(gè)、屬水平47 082個(gè)。繪制稀釋性曲線，大部分測(cè)序樣本接近平臺(tái)期，組間樣本測(cè)序覆蓋率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，測(cè)序深度基本覆蓋絕大多數(shù)物種。2組基因序列數(shù)及覆蓋率見表1。將測(cè)序序列比對(duì)16SrRNA數(shù)據(jù)庫(kù)，發(fā)現(xiàn)樣本細(xì)菌主要由以下3組序列組成，見表2。其中，觀察組Frimicutes序列豐度較對(duì)照組顯著增加，Bacteroidetes序列豐度較對(duì)照組顯著下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，2組Proteobacteria序列豐富無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。分析高通量測(cè)序數(shù)據(jù)，2組腸道菌群產(chǎn)堿桿菌科、毛螺旋菌科、理研菌科、瘤胃菌科豐度相當(dāng)，觀察組韋榮球菌科、纖維桿菌科、彎曲菌科豐度顯著低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表1 2組基因序列數(shù)及覆蓋率

表2 2組腸道菌群結(jié)構(gòu)分析 [個(gè)(%)]

表3 2組腸道菌群主要科屬分布 (%)

2.2 觀察組患者治療結(jié)果 經(jīng)1個(gè)月治療后，60例中37例(61.67%)完全康復(fù)，22例(36.66%)癥狀明顯改善，僅1例(1.67%)癥狀變化較小，未達(dá)理想目標(biāo)，總治療顯效率為98.33%。

3 討 論

腸道是人體主要的消化器官之一，處于與外界間接連通的狀態(tài)下，內(nèi)部除了消化液、食物糜外，還含有大量的微生物，其中有對(duì)人體有益的，也有有害的[4]。根據(jù)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)專家研究顯示，在健康的人體腸道內(nèi)存在著體系復(fù)雜、數(shù)量龐大的微生物生態(tài)，所包含的種類超過500種，且其中>99%者為厭氧型細(xì)菌，其余還包括好氧型細(xì)菌、兼性厭氧型細(xì)菌或其他種類微生物[5-6]。根據(jù)對(duì)不同腸道部位的研究顯示，十二指腸和空腸內(nèi)所含有的細(xì)菌種類最少，其中非厭氧型細(xì)菌種類較為罕見，而越是靠近回腸末端，所包含的細(xì)菌種類和數(shù)量就越多[7]。根據(jù)這些細(xì)菌在腸道組織內(nèi)定植位置的差異區(qū)分可總結(jié)出3個(gè)子生態(tài)系統(tǒng)，其一是膜菌群，該類細(xì)菌主要定植于腸道黏膜深層部位，由于可與黏膜粘連而產(chǎn)生“生物膜”系統(tǒng)，因此被稱為膜菌群，代表性種類為雙歧桿菌屬、乳酸桿菌屬，其均被稱為腸道共生型細(xì)菌，對(duì)腸道消化功能和免疫功能具有積極作用[8]；其二是糞桿菌為代表的厭氧型細(xì)菌，其分布于腸道黏膜的中層部位，主要包括鏈球菌、優(yōu)桿菌等[9]；其三是腔菌群，主要分布在腸道黏膜表層部位，與另外兩類菌群的區(qū)別在于腔菌群具有游動(dòng)性，即可在黏膜表層發(fā)生轉(zhuǎn)移，如大腸桿菌、腸球菌等。當(dāng)人體處于健康狀態(tài)下，這些腸道菌群就成為腸道消化系統(tǒng)中不可缺少的環(huán)節(jié)，幫助人體分解食物中的部分物質(zhì)，加快蛋白質(zhì)、脂肪、糖分等代謝速度，參與維生素的合成反應(yīng)中，所釋放的有益代謝產(chǎn)物則可供人體利用，因此也將其稱為“益生菌”[10]。同時(shí)，部分細(xì)菌還可以輔助腸道黏膜發(fā)揮生物屏障作用，有效抵御外界致病菌的侵害，尤其是可幫助人體降解部分致癌物質(zhì)，如亞硝胺等，有效保證了人體健康。當(dāng)人體處于偏向健康狀態(tài)下時(shí)，腸道內(nèi)菌群種類和數(shù)量處于動(dòng)態(tài)平衡下，即有益于人體的發(fā)育和維持日常消耗，但一旦被外界部分因素影響就可能破壞這種平衡，進(jìn)而出現(xiàn)腸道代謝紊亂，引發(fā)各類疾病。

腹瀉型腸易激綜合征屬于典型的腸道菌群失調(diào)癥狀，主要表現(xiàn)為結(jié)腸和小腸菌群失調(diào)。其中結(jié)腸菌群失調(diào)的特征為細(xì)菌數(shù)量大幅度波動(dòng)和比例失衡，雙歧桿菌、乳酸桿菌等主要的益生菌類數(shù)量大幅度減少，而如大腸桿菌、芽孢桿菌等可致病菌比例則快速升高。同時(shí)根據(jù)醫(yī)學(xué)研究顯示，腹瀉型腸易激綜合征患者腸道內(nèi)微生物的定植抗力(雙歧桿菌/大腸桿菌的比例值)處于減弱狀態(tài)，也就說明益生菌在流失。也正是由于結(jié)腸內(nèi)菌群定植抗力的減弱，導(dǎo)致大多數(shù)細(xì)菌均通過腸道蠕動(dòng)向小腸內(nèi)轉(zhuǎn)移，造成小腸內(nèi)細(xì)菌數(shù)量快速增加。但也有研究指出，在治療腹瀉型腸易激綜合征時(shí)如使用質(zhì)子泵抑制劑類藥物，則可有效抑制胃酸的分泌，而胃酸濃度降低，也會(huì)導(dǎo)致小腸內(nèi)細(xì)菌數(shù)量的增加，反而可能加重病情。

綜上所述，腹瀉型腸易激綜合征患者其腸道微生態(tài)存在失調(diào)情況，臨床治療該疾病應(yīng)重視對(duì)患者腸道菌群的調(diào)整，以提高其治療效果，促進(jìn)患者康復(fù)。