高效液相色譜法在藥品檢驗中的應用

呂亞蘭

高效液相色譜法屬于一種分離分析技術，其分析實驗樣品的方法為主要將流動相設定為液體，采用高壓輸液系統(tǒng)向裝有固定裝置的色譜柱中泵入緩沖液、不同比例混合溶劑或不同極性單一溶劑等流動相，在色譜柱中分離成分，然后采用特定的檢測儀檢測[1]。此法目前廣泛應用于工農學、醫(yī)學、化學等領域，均發(fā)揮著極為重要的作用[2]。本研究分析高效液相色譜法在藥品檢驗中的應用價值，報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料、試藥與儀器 藥物選取吳川市人民醫(yī)院銀杏黃酮類藥物，依據檢驗方法不同分為高效液相色譜法組和薄層色譜法檢測組。試劑包括銀杏葉提取物(Dr.Willmar Schwabe GmbH & Co.KG生產，國藥準字H20140768)、磷酸、重蒸水、甲醇、黃銅醇苷元槲皮素對照物。儀器選用包括Waters S400型積分儀、E2695型高效液相色譜儀、常規(guī)脫氣機、可編程序紫外檢測器、定量管(10 μl)、色譜柱(YMC-Pack ODS-A，粒徑5 μm、孔徑120 A、尺寸250 mm×10 mm)。

1.2 樣品制備 取銀杏提取物0.2 g置于甲醇40 ml中混合搖勻，待完全溶解后加入1.5 mol/L鹽酸溶液45 ml混合搖勻，置于37 ℃水浴鍋中加熱100～120 min，取出標本待冷卻后置于50 ml容量瓶中，甲醛定容備用。

1.3 方法

1.3.1 薄層色譜法：(1)取樣品0.2 g制備薄層板：將3份水、1份固定相取出于研缽中研磨混合，去除表面氣泡后向涂布器中倒入，在玻板上平穩(wěn)涂布，設置厚度為0.2～0.3 mm，完成涂布后取下玻板，在水平臺上放置，在室溫下晾干，在干燥箱中放置備用，干燥箱存放有干燥劑。(2)點樣：自動點樣，在此過程中采用半自動點樣儀，將適量展開劑加入室內，放入事先點樣好的薄層板，將室蓋密封起來，取出薄層板晾干的時間為展開到10～15 cm時，檢測過程中嚴格依據展開因素，運用試劑顯色法顯色薄層板，在此過程中將顯色劑硫酸溶液充分利用起來，對比其獲取的比移值與事先準備好的對照物的比移值，從而對藥品進行鑒別。

1.3.2 高效液相色譜法：取樣品0.2 g，行儀器進檢測前將流動相準備好，在0.4%磷酸溶液中混入甲醇，溶液比45∶55，設置流速、柱溫、進樣體積、波長分別為1.0 ml/min、25～27 ℃、10 μl、360 nm，然后檢驗藥品，在此過程中嚴格依據規(guī)定步驟。

1.4 觀察指標 比較2組對槲皮素、山萘素、異鼠李素的分離率、純度以及對山萘素的回收率。

2 結 果

2.1 對槲皮素、山萘素、異鼠李素的分離率與純度比較 高效液相色譜法組對槲皮素、山萘素、異鼠李素的分離率、純度均顯著高于薄層色譜法檢測組。見表1。

表1 2組對槲皮素、山萘素、異鼠李素的分離率與純度比較 (%)

2.2 對山萘素的回收率比較 高效液相色譜法組對山萘素的回收率為98.50%，顯著高于薄層色譜法檢測組的89.00%。見表2。

表2 對山萘素的回收率比較

3 討 論

在色譜法中，高效液相色譜法占有重要地位，又稱高分離度液相色譜法或高壓液相色譜法，原理主要為采用高壓輸液系統(tǒng)在固定相色譜柱中裝入混合溶劑或單一溶劑進行分離，然后在檢測器中放置檢測，從而分析樣品[3]。由此可以看出，高效液相色譜法的原理基本類似于經典液相色譜法，但高效液相色譜法將高壓輸液泵及具有較高靈敏度的檢測儀充分利用了起來，比經典液相色譜法具有更高的準確性[4]。在藥品檢驗中，高效液相色譜法的特點主要為：(1)高壓：高效液相色譜法以液體為流動相，在流動相從色譜柱經過時具有較大的阻力，為了從色譜柱通過必須將載液壓力增加；(2)高速：高效液相色譜法具有較快的載液流速、分析速度，通常情況下能夠在15～30 min對一個樣品進行分析；(3)高效：高效液相色譜法具有較高的分離效能，對流動相、固定相進行合理應用能夠獲取最佳的分離效果；(4)靈敏度高：高效液相色譜法的進樣量、紫外檢測器分別達μl數量級、0.1 ng[5]。

相關醫(yī)學研究表明，與薄層色譜法相比，高效液相色譜法對異鼠李素、山萘素、槲皮素具有較高的分離度、純度，以此認為藥品檢驗中應用高效液相色譜法能夠將準確的檢驗結果提供出來，促進分離效果、回收率的提升[6]。相關醫(yī)學研究表明，在藥品檢驗中應用高效液相色譜法具有較快的檢測速度、準確的結果，能夠在極大程度上促進分離效果、回收率的提升[7-8]。另有研究表明，將高效液相色譜法應用于藥品檢驗中能夠獲取極好的分離效果，促進產品回收率、提取物純度的增加、測定結果可靠性、準確性的提升[9-10]。本研究結果顯示，高效液相色譜法組對槲皮素、山萘素、異鼠李素的分離率、純度均顯著高于薄層色譜法檢測組；高效液相色譜法組對山萘素的回收率98.50%，顯著高于薄層色譜法檢測組89.00%，與上述研究結果相一致。

綜上所述，藥品檢驗中高效液相色譜法的應用效果較薄層色譜法好，更能有效提升對槲皮素、山萘素、異鼠李素的分離率、純度以及對山萘素的回收率，值得推廣。