潰瘍性結(jié)腸炎患者活動(dòng)期腸道菌群及糞便炎癥標(biāo)志物檢測(cè)及其臨床意義

陳茜茜 朱海勇

[摘要] 目的 觀察潰瘍性結(jié)腸炎患者活動(dòng)期腸道菌群及糞便炎癥標(biāo)志物含量及其臨床意義。 方法 回顧性分析2018年3月至2021年1月在我院治療的60例潰瘍性結(jié)腸炎患者的臨床資料，按照病情狀況分為活動(dòng)期組（n=39）與緩解期組（n=21），同時(shí)選擇在我院體檢的50名健康者為對(duì)照組。比較三組研究對(duì)象的腸道需氧菌群（包括酵母菌、腸球菌、葡萄球菌、腸桿菌）、厭氧菌群（包括雙歧桿菌、擬桿菌、乳桿菌、真桿菌、消化球菌）以及糞便炎癥標(biāo)志物乳鐵蛋白（LF）、鈣衛(wèi)蛋白（FC）、髓過(guò)氧化酶（MPO）、基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）的水平。 結(jié)果 活動(dòng)期組酵母菌、腸球菌、葡萄球菌、腸桿菌數(shù)量明顯高于緩解期組與對(duì)照組，緩解期組酵母菌、腸球菌、腸桿菌數(shù)量明顯高于對(duì)照組（P<0.05）;活動(dòng)期組雙歧桿菌、乳桿菌、真桿菌明顯低于緩解期組與對(duì)照組，擬桿菌、消化球菌明顯高于緩解期組與對(duì)照組，緩解期組雙歧桿菌、乳桿菌、真桿菌明顯低于對(duì)照組，擬桿菌、消化球菌明顯高于對(duì)照組（P<0.05）;活動(dòng)期組LF、FC、MPO、MMP-9水平明顯高于緩解期組與對(duì)照組，緩解期組LF、FC、MPO、MMP-9水平明顯高于對(duì)照組（P<0.05）。 結(jié)論 潰瘍性結(jié)腸炎患者腸道菌群失調(diào)，糞便中炎癥標(biāo)志物水平明顯較高，能夠通過(guò)腸道菌群變化及糞便內(nèi)LF、FC、MPO、MMP-9水平評(píng)估疾病的活動(dòng)性。

[關(guān)鍵詞] 潰瘍性結(jié)腸炎;活動(dòng)期;需氧菌群;厭氧菌群;乳鐵蛋白;鈣衛(wèi)蛋白;髓過(guò)氧化酶;基質(zhì)金屬蛋白酶-9

[中圖分類號(hào)] R574.62? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1673-9701（2021）34-0016-04

[Abstract] Objective To observe the levels of intestinal flora and fecal inflammation markers in patients with ulcerative colitis and its clinical significance. Methods The clinical data of 60 patients with ulcerative colitis admitted to our hospital from March 2018 to January 2021 were retrospectively analyzed. According to their condition， the patients were divided into the active period group（n=39） and the remission period group（n=21）. At the same time， 50 healthy people who had a physical examination in our hospital were selected as the control group. The intestinal aerobic flora （including yeast， enterococcus， staphylococcus， and enterobacteriaceae）， the anaerobic flora（including bifidobacterium， bacteroides， lactobacillus， eubacterium， peptococcus）， and the fecal inflammation markers lactoferrin（LF）， calprotectin （FC）， myeloperoxidase （MPO）， matrix metalloproteinase-9 （MMP-9） between the three groups were compared and analyzed. Results The numbers of enterococcus， staphylococci， and enterobacteriaceae in the active stage group were significantly higher than those in the remission stage group and the control group. The numbers of yeast， enterococcus， and enterobacteriaceae in the remission stage group were significantly higher than those in the control group. The differences were statistically significant（P<0.05）. The bifidobacterium， lactobacillus， eubacteria in the active period group were significantly lower than those in the remission stage group and the control group. The bacteroides and peptococcus in the active period group were significantly higher than those in the remission stage group and the control group. The bifidobacterium， lactobacillus， and eubacteria in the remission stage group were significantly lower than those in the control group. The bacteroides and peptococcus in the remission stage group were significantly higher than those in the control group. The differences were statistically significant （P<0.05）. The levels of LF， FC， MPO， and MMP-9 in the active stage group were significantly higher than those in the remission group and the control group. The levels of LF， FC， MPO， and MMP-9 in the remission stage group were significantly higher than those in the control group， and the differences were statistically significant（P<0.05）. Conclusion In patients with ulcerative colitis， the intestinal flora is imbalanced， and the level of fecal inflammatory markers is significantly higher. The activity of the disease can be assessed by the changes in the intestinal flora and the levels of LF， FC， MPO， and MMP-9 in feces.

[Key words] Ulcerative colitis; Active stage; Aerobic flora; Anaerobic flora; Lactoferrin; Calprotectin; Myeloperoxidase; Matrix metalloproteinase-9

潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)病原因還沒(méi)有完全明確，現(xiàn)在大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為是由遺傳易感、環(huán)境、免疫功能不正常、腸道屏障功能出現(xiàn)障礙等諸多原因引發(fā)，其中，免疫應(yīng)答紊亂與慢性炎癥反應(yīng)為引發(fā)潰瘍性結(jié)腸炎的重要環(huán)節(jié)，腸道中的菌群紊亂是導(dǎo)致免疫應(yīng)答變化、炎癥反應(yīng)的一個(gè)關(guān)鍵因素，是發(fā)生潰瘍性結(jié)腸炎的關(guān)鍵因素[1-3]。近幾年，多項(xiàng)文獻(xiàn)[4-5]，腸道內(nèi)菌群的不協(xié)調(diào)與潰瘍性結(jié)腸炎息息相關(guān)。通常來(lái)說(shuō)炎癥性腸病腸道內(nèi)的菌群組成變化主要有多樣性減少、黏膜總菌改變、于疾病進(jìn)展期菌群組成變化，像增加侵襲性細(xì)菌的類型、減少保護(hù)性菌的數(shù)量[6]。潰瘍性結(jié)腸炎患者的腸黏膜屏障于腸道炎癥發(fā)生后受損，經(jīng)由受損的腸黏膜屏障，中性粒細(xì)胞進(jìn)入腸腔，通過(guò)糞便排出，所以，糞便內(nèi)的中性粒細(xì)胞衍生產(chǎn)物乳鐵蛋白（Lactoferrin，LF）、鈣衛(wèi)蛋白（Fecal calprotectin，F(xiàn)C）、髓過(guò)氧化酶（Myeloperoxidase，MPO）、基質(zhì)金屬蛋白酶-9（Matrix metalloproteinase-9，MMP-9）等往往被用于腸道炎癥評(píng)估[7-8]。但是國(guó)內(nèi)少有醫(yī)療機(jī)構(gòu)對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎患者的糞便做相應(yīng)的菌群分析，因而本院在患者入院后對(duì)菌群進(jìn)行分析。基于此，本研究回顧性分析我院診治的潰瘍性結(jié)腸炎患者的臨床資料，觀察其活動(dòng)期腸道菌群及糞便炎癥標(biāo)志物檢測(cè)及其臨床意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2018年3月至2021年1月在我院治療的60例潰瘍性結(jié)腸炎患者的臨床資料，本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)同意，且所有患者均知情同意。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合潰瘍性結(jié)腸炎的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)者[9]。排除標(biāo)準(zhǔn)：①處于哺乳期、妊娠期的婦女;②合并其他免疫系統(tǒng)疾病者;③合并惡性腫瘤者;④使用糖皮質(zhì)激素、免疫調(diào)節(jié)劑、免疫抑制劑、益生菌進(jìn)行治療的患者。按照病情狀況分為活動(dòng)期組（n=39）與緩解期組（n=21）。活動(dòng)期組男23例，女16例;年齡21～49歲，平均（28.69±8.11）歲;病程0.5～18.5年，平均（9.57±5.48）年。緩解期組男7例，女14例;年齡20～51歲，平均（29.06±8.21）歲;病程1～19年，平均（9.88±5.36）年。同時(shí)選擇在我院體檢的50名健康者為對(duì)照組，男29例，女21例;年齡19～52歲，平均（29.57±7.38）歲。兩組患者的基本資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法

所有研究對(duì)象在結(jié)腸鏡檢查日留取5～10 g新鮮糞便，于無(wú)菌便盒內(nèi)密閉保存，30 min之內(nèi)送檢。

1.2.1 直接涂片鏡檢與分析菌群? 對(duì)糞便標(biāo)本進(jìn)行涂片，面積為1.5 cm×2.0 cm左右，厚度像血膜的菌膜，于干燥固定之后格蘭染色，借助油鏡對(duì)視野（10個(gè)）進(jìn)行觀察，按照各油鏡視野下細(xì)菌總數(shù)同各類細(xì)菌的比值，對(duì)菌群是否失調(diào)及失調(diào)的程度進(jìn)行判斷，分級(jí)及判斷標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)《腸道菌群糞便涂片檢查圖譜》[10]。

1.2.2 細(xì)菌培養(yǎng)鑒定? 選擇接種環(huán)10 μL取一環(huán)糞便，使用四區(qū)劃線法實(shí)施接種。①需氧培養(yǎng)，麥康凱平板與血平板接種，于37℃且包括5%體積分?jǐn)?shù)的CO2的有氧環(huán)境內(nèi)孵育24 h，選擇VITEK 2全自動(dòng)細(xì)菌鑒定儀（生物梅里埃公司）對(duì)需氧菌群（包括酵母菌、腸球菌、葡萄球菌、腸桿菌）進(jìn)行檢測(cè)。②厭氧培養(yǎng)：厭氧血平板接種，于無(wú)氧且37℃的環(huán)境內(nèi)孵育48 h，之后進(jìn)行耐氧試驗(yàn)，選擇API 20A厭氧菌鑒定卡（北京千舜生物科技有限公司）鑒定厭氧菌群（包括雙歧桿菌、擬桿菌、乳桿菌、真桿菌、消化球菌）。

1.2.3 糞便炎癥標(biāo)志物檢測(cè)? 選擇生理鹽水稀釋糞便標(biāo)本，然后進(jìn)行離心，選取上清液，使用酶聯(lián)免疫吸附法對(duì)LF、FC、MPO、MMP-9水平進(jìn)行檢測(cè)，試劑盒都由南京建成科技有限公司提供。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組比較采用方差分析，兩兩比較采用t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組需氧菌菌群的數(shù)量比較

活動(dòng)期組酵母菌、腸球菌、葡萄球菌、腸桿菌數(shù)量明顯高于緩解期組與對(duì)照組，緩解期組酵母菌、腸球菌、腸桿菌數(shù)量明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表1。

2.2 三組厭氧菌菌群的數(shù)量比較

活動(dòng)期組雙歧桿菌、乳桿菌、真桿菌明顯低于緩解期組與對(duì)照組，擬桿菌、消化球菌明顯高于緩解期組與對(duì)照組;緩解期組雙歧桿菌、乳桿菌、真桿菌明顯低于對(duì)照組，擬桿菌、消化球菌明顯高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表2。

2.3 三組糞便炎癥標(biāo)志物水平比較

活動(dòng)期組LF、FC、MPO、MMP-9水平明顯高于緩解期組與對(duì)照組，緩解期組LF、FC、MPO、MMP-9水平明顯高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表3。

3 討論

潰瘍性結(jié)腸炎屬于常見(jiàn)胃腸道的非特異性慢性疾病，此病臨床特征和體征輕重緩急會(huì)交替變換，具有不一致性，患者既可出現(xiàn)全身癥狀，也會(huì)僅出現(xiàn)結(jié)腸癥狀[11]。相關(guān)文獻(xiàn)顯示，發(fā)生潰瘍性結(jié)腸炎的原因同腸道菌群、免疫、遺傳以及環(huán)境等因素息息相關(guān)。腸道內(nèi)的優(yōu)勢(shì)菌群同人體的免疫系統(tǒng)會(huì)維持動(dòng)態(tài)平衡，通常腸道免疫系統(tǒng)不將這些共生菌群看作非己，所以耐受于其免疫系統(tǒng)，然而若腸道出現(xiàn)慢性炎癥，這類細(xì)菌會(huì)大量增殖，導(dǎo)致腸道免疫屏障被破壞，腸黏膜免疫功能被抑制，從而導(dǎo)致人體腸道出現(xiàn)免疫反應(yīng)，引發(fā)潰瘍性結(jié)腸炎[12-14]。然而具體的機(jī)制目前尚不明確，同炎性因子是否相關(guān)仍有待分析。