復(fù)方藤芷膏治療小鼠化療性靜脈炎的實(shí)驗(yàn)研究1）

楊晉田，劉麗坤，王晞星，李宜放，戴筱杰，李躍華，杜雅莉

化療性靜脈炎是化療過(guò)程中常見(jiàn)的并發(fā)癥，目前治療方法較多，但是作用效果單一，中醫(yī)藥治療顯示出它的優(yōu)勢(shì)。本研究應(yīng)用中藥復(fù)方藤芷膏治療化療性靜脈炎取得了較好的臨床療效，通過(guò)觀察復(fù)方藤芷膏對(duì)長(zhǎng)春瑞濱注射液導(dǎo)致的小鼠化療性靜脈炎的發(fā)生率和病理組織改變的影響，探討復(fù)方藤芷膏對(duì)化療性靜脈炎的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康昆明種小鼠，體重31g±2g，由山西省中醫(yī)藥研究院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室提供，合格證號(hào)：晉動(dòng)（A）－003號(hào)。實(shí)驗(yàn)前1周飼養(yǎng)于山西省中醫(yī)藥研究院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心以適應(yīng)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境，實(shí)驗(yàn)室溫度20℃±2℃，相對(duì)濕度34%，持續(xù)12h明暗交替。小鼠雌雄分籠，自由活動(dòng)，自由飲水，標(biāo)準(zhǔn)鼠食喂養(yǎng)。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥品及試劑 復(fù)方藤芷膏：山西省中醫(yī)藥研究院制劑室提供。羊毛脂：天津文申泰化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)080301。凡士林：山西省中醫(yī)藥研究院制劑室提供。喜遼妥：德國(guó)三共藥廠（Sankyo Pharma GmbH），批號(hào)309001。酒石酸長(zhǎng)春瑞濱注射液：江蘇豪森藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)20080218。甲醛溶液：山西省中醫(yī)藥研究院中心實(shí)驗(yàn)室提供。病理切片，HE染色試劑 ：70%乙 醇 ，75% 乙 醇 ，80%乙 醇 ，85%乙 醇 ，90% 乙 醇 ，95% 乙醇，100%乙醇，鹽酸乙醇，二甲苯，石蠟，蒸餾水，蘇木素，伊紅。

1.3 實(shí)驗(yàn)主要器材 Olympus光學(xué)顯微鏡，日本Olympus公司。LEICA－2135型旋轉(zhuǎn)切片機(jī)，德國(guó)。MIAS－2000圖像分析系統(tǒng)，四川川大智勝軟件股份有限公司。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 小鼠化療性靜脈炎模型的建立 參照文獻(xiàn)［1］和預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行模型制備。小鼠尾靜脈右側(cè)進(jìn)針注射長(zhǎng)春瑞濱注射液。常規(guī)消毒備皮，微量注射器接4號(hào)針頭抽取少量生理鹽水，于小鼠尾靜脈的右側(cè)中、遠(yuǎn)三分之一處向近心端穿刺，穿刺盡量一次成功，避免針頭在組織中探找靜脈。針頭進(jìn)入血管后，先注射生理鹽水約0.1mL確保針頭在靜脈內(nèi)藥物無(wú)外滲后，保持針頭位置不變，接內(nèi)裝有長(zhǎng)春瑞濱的注射器快速推注，隨后再注射少量生理鹽水沖洗靜脈。注射完成后檢查血管，疑有外滲者廢棄后再取小鼠重新造模。長(zhǎng)春瑞濱使用劑量：根據(jù)長(zhǎng)春瑞濱臨床常規(guī)用藥劑量通過(guò)藥理學(xué)公式換算［2，3］，按實(shí)驗(yàn)小鼠體重算出小鼠用藥量為4.75mg／kg，按照7倍量注射（經(jīng)此前預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，此量注射成模率100%，無(wú)動(dòng)物死亡），注射量為0.01 mL／g。

1.4.2 分組及治療給藥 取化療性靜脈炎模型小鼠40只，隨機(jī)分為4組：模型對(duì)照組、喜遼妥對(duì)照組、治療高劑量組、治療低劑量組。造模72h后，小鼠尾靜脈自根部至尾端外涂治療用藥膏或賦形劑，每日2次，2次間隔時(shí)間6h，連續(xù)敷藥6d。每次涂藥前生理鹽水清潔尾部，然后將藥膏均勻涂于鼠尾四周，涂藥后尾部用抗敏膠帶包扎，保證藥物在局部停留6h，以利于藥物吸收。復(fù)方藤芷膏高、低劑量組外涂不同濃度復(fù)方藤芷膏，喜遼妥對(duì)照組外涂喜遼妥乳膏，模型對(duì)照組外涂賦形劑。

1.4.3 樣品采集 實(shí)驗(yàn)用藥6d結(jié)束后，小鼠脫臼處死，取鼠尾自尾端2cm以上截取2cm，用10%甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋。

1.5 觀察指標(biāo)

1.5.1 靜脈炎分級(jí) 記錄動(dòng)物整體情況、靜脈顏色改變、局部組織腫脹及消退情況。參考國(guó)際靜脈輸液護(hù)理學(xué)會(huì)（INS）臨床分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)及國(guó)內(nèi)高玉珍等［3］的實(shí)驗(yàn)，用藥6d后分別對(duì)小鼠化療性靜脈炎進(jìn)行臨床評(píng)價(jià)。0級(jí)為正常無(wú)靜脈炎發(fā)生；Ⅰ級(jí)為穿刺點(diǎn)出現(xiàn)紅斑和或水腫，靜脈無(wú)條索狀改變，未觸及硬結(jié)；Ⅱ級(jí)為穿刺點(diǎn)出現(xiàn)紅斑和／或水腫，沿靜脈出現(xiàn)條索狀改變（腫脹、變紅），未觸及硬結(jié)；Ⅲ級(jí)為穿刺點(diǎn)紅斑和／或水腫，靜脈有條索狀改變，可觸及硬結(jié)或出現(xiàn)潰爛。

1.5.2 病理組織學(xué)觀察 臨床評(píng)價(jià)后脫臼處死，取鼠尾自尾端2cm以上截取2cm，用10%甲醛固定，HE染色，鏡下觀察尾靜脈組織學(xué)病理變化。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SAS 9.0統(tǒng)計(jì)軟件包對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。各組靜脈炎發(fā)生率用構(gòu)成比描述，統(tǒng)計(jì)推斷采用非參數(shù)檢驗(yàn)，組間差異比較用秩和檢驗(yàn)，組內(nèi)差異用符號(hào)秩和檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 光鏡下可見(jiàn)結(jié)果

2.1.1 模型對(duì)照組 ①受損靜脈淤血，血管腔擴(kuò)大，內(nèi)皮層不完整，內(nèi)膜可脫落；②白細(xì)胞邊集并大量附著于血管內(nèi)表面，血管壁全層及周圍結(jié)締組織內(nèi)可見(jiàn)較多炎細(xì)胞浸潤(rùn)，以巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞為主含少量中性粒細(xì)胞；③血管周圍組織水腫，組織間隙增大，可有少量出血。

2.1.2 喜遼妥對(duì)照組 大部分小鼠可見(jiàn)：①受損靜脈淤血，血管腔擴(kuò)大，內(nèi)皮層不完整，內(nèi)膜可脫落；②血管周圍組織水腫，組織間隙增大，可有少量出血。

2.1.3 治療高劑量組 有輕微炎性改變，內(nèi)皮層不完整，有個(gè)別可見(jiàn)血管周圍組織水腫，組織間隙增大，可有少量出血。

2.1.4 治療低劑量組 炎性改變較明顯，大部分可見(jiàn)白細(xì)胞邊集并少量附著于血管內(nèi)表面，血管壁全層及周圍結(jié)締組織內(nèi)可見(jiàn)炎細(xì)胞浸潤(rùn)。

2.2 治療前各組靜脈炎炎癥程度比較（見(jiàn)表1）

表1 治療前各組靜脈炎炎癥程度比較 只（%）

2.3 治療后各組靜脈炎炎癥程度比較（見(jiàn)表2）

表2 治療后各組靜脈炎炎癥程度比較 只（%）

3 討論

化療性靜脈炎是化療過(guò)程中出現(xiàn)的一種并發(fā)癥，根據(jù)肌膚灼熱、疼痛、局部顏色青紫呈條索狀改變等表現(xiàn)，屬中醫(yī)學(xué)“脈痹”范疇。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，人體氣血運(yùn)行“如環(huán)無(wú)端”，血脈只有處于“如水之流”的狀態(tài)才能發(fā)揮正常的作用?；熕幬飳儆跓岫局罚拘扒忠u人體血脈，熱毒與血互結(jié)成瘀，阻塞絡(luò)脈，導(dǎo)致血凝不流，血脈阻塞，引起靜脈炎?；熜造o脈炎的病理學(xué)表現(xiàn)為受損靜脈淤血，白細(xì)胞邊集并大量附著于血管內(nèi)表面，血管周圍組織水腫等，從微觀角度也提示化療性靜脈炎與瘀毒之關(guān)系。因此，化療性靜脈炎的病機(jī)在于瘀毒凝滯血脈，即瘀毒內(nèi)阻，脈絡(luò)不通.復(fù)方藤芷膏為臨床經(jīng)驗(yàn)用方，方中以藤黃為君藥、白芷為主要藥物，再配合冰片、生軍、薄荷等藥物達(dá)到清熱祛濕，解毒排膿，消腫止痛，活血祛瘀、通經(jīng)絡(luò)的目的。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，高劑量復(fù)方藤芷膏對(duì)小鼠化療性靜脈炎有抗炎、修復(fù)、活血止痛、消腫的作用。該藥直接局部外敷，保留一定的時(shí)間，藥物直達(dá)病所，滲透靜脈血絡(luò)，消除病變部位癥狀，使藥物發(fā)揮最大功效，是治療靜脈炎的最佳用藥途徑。本實(shí)驗(yàn)為臨床的應(yīng)用提供了可觀依據(jù)，為化療性靜脈炎的治療提供了新思路、新方法。

［1］ 黃吉春，郭勇，余鴻.化療性靜脈炎小鼠模型的建立［J］.四川動(dòng)物，2007，26（3）：693－696.

［2］ 陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1993：30－36.

［3］ 高玉珍，廖蔓云，孫宇寧，等.中藥治療靜脈炎的臨床應(yīng)用與觀察［J］.護(hù)理學(xué)雜志，1993，8（4）：265.