復(fù)方中藥對早期斷奶仔豬血清免疫球蛋白及腸黏膜免疫細胞的影響

孟冬霞，馬政禹，曹日亮

（1.山西農(nóng)業(yè)大學(xué)，山西 晉中 030801；2.山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，山西 太原 030032）

仔豬早期斷奶（3～5周齡斷奶）是現(xiàn)代養(yǎng)豬的關(guān)鍵技術(shù)之一，它可以提高母豬生產(chǎn)力及圈舍利用率、減少母體向仔豬傳播疾病的幾率，在我國規(guī)模化豬場得到廣泛重視。但早期斷奶易誘發(fā)“仔豬早期斷奶綜合征”，仔豬表現(xiàn)為下痢、生長緩慢、飼料利用率低、免疫力和抗病力下降，發(fā)病率和死亡率增高等癥狀，給養(yǎng)豬業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟損失[1]。以前主要通過在飼料中添加促生長類抗生素預(yù)防仔豬腹瀉，但隨著限抗、禁抗的政策實施，尋找安全、有效的綠色替抗產(chǎn)品盡可能降低早期斷奶對仔豬造成的傷害是當(dāng)前養(yǎng)豬業(yè)迫切需要解決的問題。

研究證實中草藥添加劑可有效緩解仔豬斷奶應(yīng)激[2-6]。本項目在研究復(fù)方中藥對早期斷奶仔豬生長性能及血清激素水平影響的基礎(chǔ)上，進一步研究其對早期斷奶仔豬血清免疫球蛋白及腸黏膜免疫細胞的影響，探討復(fù)方中藥抗仔豬早期斷奶應(yīng)激的作用效果，為開發(fā)口感好、安全、高效、無殘留的綠色飼料添加劑提供參考。

1 材料與方法

1.1 飼養(yǎng)試驗設(shè)計

試驗動物為相同飼養(yǎng)條件的120頭28日齡杜長大三元雜種仔豬，初始體重相接近，組間差異不顯著。隨機分為4組，空白對照組Ⅰ（28日齡不斷奶，飼喂基礎(chǔ)飼糧），空白對照組Ⅱ（28日齡斷奶，飼喂基礎(chǔ)飼糧），中草藥Ⅰ組（28日齡斷奶，飼喂基礎(chǔ)飼糧+0.3%組方Ⅰ制得的中藥制劑），中草藥Ⅱ組（28日齡斷奶，飼喂基礎(chǔ)飼糧+0.3%組方Ⅱ制得的中藥制劑）。試驗期為14 d，于2015年7月27日至8月9日在山西太原某豬場進行。豬舍、飼養(yǎng)條件、衛(wèi)生環(huán)境、飼料品質(zhì)及其他飼養(yǎng)管理等均相同，試驗豬常規(guī)免疫，自由采食和飲水。試驗基礎(chǔ)飼糧的原料組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 試驗基礎(chǔ)飼糧的原料組成及營養(yǎng)水平

1.2 中藥制劑

山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所中獸醫(yī)藥研究室負責(zé)中藥的選擇、組方。組方Ⅰ由茯苓乙醇提取物、魚腥草乙醇提取物、白頭翁乙醇提取物、白術(shù)乙醇提取物、麥冬乙醇提取物、黨參乙醇提取物、當(dāng)歸乙醇提取物、姜黃乙醇提取物、山楂水提取物、葡萄糖、蒙脫石等按一定比例組成；組方Ⅱ由魚腥草乙醇提取物、白術(shù)乙醇提取物、黨參乙醇提取物、當(dāng)歸乙醇提取物、姜黃乙醇提取物、蒙脫石等按一定比例組成；所有中藥均購自河北安國市祁瑞中藥材有限責(zé)任公司。

乙醇提取物的制備：將原料清洗干凈，放入提取罐中，加入9～10倍量體積分?jǐn)?shù)為80%的乙醇，回流提取3次，每次分別為2 h、1 h、1 h，過濾，合并提取液；將提取液減壓回收乙醇，并濃縮至相對密度1.20～1.25，得提取物浸膏；提取物浸膏經(jīng)噴霧干燥機干燥即可。

水提取物的制備：將山楂粉碎成顆粒，加水浸泡1～3 h，加入原料8～12倍量水煎煮2～3次，過濾，合并煎煮液；將煎煮液減壓濃縮至相對密度1.20～1.25，噴霧干燥后得混合提取物。

1.3 測定指標(biāo)及方法

1.3.1 血樣采集與血清制備 試驗結(jié)束時，從各組隨機選取5頭仔豬，空腹清晨稱重后，從前腔靜脈采血5 mL于離心管中，室溫下放置20 min，以3 000 r/min離心10 min，吸取血清，置于-20 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 血清免疫球蛋白的指標(biāo)測定 測定血清中免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A（IgA）和免疫球蛋白M（IgM）的含量，試劑盒購自浙江伊利康生物技術(shù)有限公司，按說明書要求進行測定。

1.3.3 腸黏膜免疫細胞的指標(biāo)測定 試驗結(jié)束時，每組隨機抽取3頭豬，麻醉（15%復(fù)方噻胺酮，0.1 mL/kg體重）后，剖開腹腔，剪取十二指腸、空腸、回腸段各1 cm的樣品，制作病理切片（甲醛固定→脫水→包蠟→切片→染色），分析腸黏膜免疫細胞的數(shù)量和分布。

1.4 數(shù)據(jù)分析

試驗數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件中的ANOVA程序進行方差分析和鄧肯氏（Duncan）多重比較，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 中藥制劑對仔豬血清免疫球蛋白的影響

由表2可知，中草藥Ⅰ組的免疫球蛋白A、免疫球蛋白G、免疫球蛋白M含量極顯著高于空白對照組Ⅱ（P＜0.01），顯著高于中草藥Ⅱ組（P＜0.05），與空白對照組Ⅰ差異不顯著（P＞0.05）。

表2 中藥制劑對仔豬血清免疫球蛋白的影響

2.2 中藥制劑對仔豬腸黏膜免疫細胞的影響

由表3可知，中草藥Ⅰ組的上皮內(nèi)淋巴細胞數(shù)量，與空白對照組Ⅰ差異不顯著（P＞0.05），極顯著高于空白對照組Ⅱ（P＜0.01），顯著高于中草藥Ⅱ組（P＜0.05）；杯狀細胞數(shù)量，中草藥Ⅰ組與空白對照組Ⅰ差異不顯著（P＞0.05），極顯著高于空白對照組Ⅱ（P＜0.01），在十二指腸段、空腸段顯著高于中草藥Ⅱ組（P＜0.05）、在回腸段與中草藥Ⅱ組差異不顯著（P＞0.05）；肥大細胞數(shù)量，中草藥Ⅰ組顯著高于空白對照組Ⅰ（P＜0.05），極顯著高于空白對照組Ⅱ（P＜0.01），在十二指腸、回腸段中草藥Ⅰ組極顯著高于中草藥Ⅱ組（P＜0.01），在空腸段中草藥Ⅰ組顯著高于中草藥Ⅱ組（P＜0.05）。

表3 中藥制劑對仔豬腸黏膜免疫細胞的影響

3 討論

3.1 中藥制劑對仔豬血清免疫球蛋白的影響

斷奶仔豬一方面通過母乳獲得母源抗體的被動免疫，另一方面通過完善自身免疫系統(tǒng)獲得主動免疫。仔豬斷奶后被動免疫被中斷，而自身的免疫系統(tǒng)尚不成熟，所以仔豬很容易遭受外界病原微生物的侵襲導(dǎo)致動物生長受阻，甚至死亡[7]。血清中免疫球蛋白的含量在一定程度上是對動物機體體液免疫狀況的一種反映。免疫球蛋白的主要作用是與抗原起免疫反應(yīng)，生成抗原-抗體復(fù)合物，使病原體失去致病作用。因此血清中維持較高水平的免疫球蛋白是保證仔豬健康和平穩(wěn)度過斷奶關(guān)的重要基礎(chǔ)[8]。IgG是主動免疫后機體產(chǎn)生的主要抗體，是動物機體抗感染的主力，在體內(nèi)發(fā)揮抗菌、抗病毒和抗毒素等免疫活性，在體液免疫中最為重要。IgA是外分泌液中的主要Ig，對呼吸道和腸道等局部黏膜免疫起著相當(dāng)重要的作用。IgM是動物機體遭受病原體感染時，初次免疫應(yīng)答中最早產(chǎn)生的抗體，具有抗菌和抗病毒等免疫活性[9]。斷奶仔豬血清中IgG、IgM和IgA含量提高，在一定程度上表明其免疫力增強。中草藥Ⅰ組的免疫球蛋白A、免疫球蛋白G、免疫球蛋白M含量極顯著高于空白對照組Ⅱ（P＜0.01），顯著高于中草藥Ⅱ組（P＜0.05），與空白對照組Ⅰ差異不顯著（P＞0.05）。試驗結(jié)果表明，飼糧中添加0.3%組方Ⅰ制得的中藥制劑能夠明顯提高斷奶應(yīng)激仔豬的體液免疫功能，在一定程度上增強斷奶仔豬免疫力。

3.2 中藥制劑對仔豬腸黏膜免疫細胞的影響

腸黏膜是機體抵御外源物質(zhì)以及微生物的重要屏障，上皮內(nèi)淋巴細胞是黏膜免疫系統(tǒng)中最先接觸抗原的免疫活性細胞，在腸道黏膜中起重要的免疫屏障作用；杯狀細胞分泌黏液，保護腸黏膜，是構(gòu)成腸道機械屏障的結(jié)構(gòu)之一；肥大細胞是抗感染免疫的第一線細胞，且能通過所分泌的細胞因子參與獲得性免疫，是重要的免疫活性細胞[10]。中藥組對仔豬腸黏膜免疫細胞都有不同程度的提高，中草藥Ⅰ組的效果優(yōu)于中草藥Ⅱ組。與空白對照組Ⅱ相比，中草藥Ⅰ組極顯著提高上皮內(nèi)淋巴細胞數(shù)量、杯狀細胞數(shù)量、肥大細胞數(shù)量（P＜0.01）；中草藥Ⅱ組顯著提高上皮內(nèi)淋巴細胞數(shù)量（P＜0.05）、極顯著提高回腸段杯狀細胞數(shù)量（P＜0.01）、顯著提高空腸段肥大細胞數(shù)量（P＜0.05）。試驗結(jié)果表明：飼糧中添加0.3%組方Ⅰ制得的中藥制劑，能促進小腸上皮內(nèi)淋巴細胞、杯狀細胞、肥大細胞的增殖，提高腸道的免疫學(xué)屏障功能。