南瓜色素的分離制備及其抗氧化作用

錢穎聰，胡 煒，陳天鑒，阮依莉，林藝涵，張擁軍

（中國(guó)計(jì)量大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院，浙江 杭州 310018）

南瓜色素是從葫蘆科南瓜屬南瓜（Cucurbita moschata（Duch.ex Lam.）Duch.ex Poiret）果肉得到的黃色天然食品級(jí)色素，是一種少有的著色力強(qiáng)的理想天然色素，穩(wěn)定性好且具有抗氧化作用，可在多種領(lǐng)域中得到應(yīng)用[1，2]。南瓜色素主要由α-胡蘿卜素，β-胡蘿卜素和葉黃素這三類類胡蘿卜素構(gòu)成，這是使南瓜果肉呈現(xiàn)強(qiáng)烈的黃色或橙色的原因[3]，其中按照Bartosz Kulczynski 等對(duì)于南瓜色素的分析可知，每100 g鮮南中β-胡蘿卜素1.29～8.33 mg，葉黃素3.34～22.92 mg[4]?？芍~黃素占大多數(shù)。葉黃素因含有羥基、羰基、甲氧基或環(huán)氧化結(jié)構(gòu)而極性較強(qiáng)，故在極性較強(qiáng)的有機(jī)溶劑中溶解性較大。黃愛(ài)妮等研究發(fā)現(xiàn)，無(wú)水乙醇、丙酮、乙酸乙酯與乙醚都可以作為南瓜色素的提取劑，其中無(wú)水乙醇提取率最大[5]。目前已有關(guān)于南瓜果肉色素提取、穩(wěn)定性方面的研究報(bào)道[6-10]，在南瓜色素分離純化及抗氧化性方面的研究也逐漸開(kāi)展[11-13]。但現(xiàn)有研究大多停留在南瓜色素提取制備等方面，關(guān)于其純化、結(jié)構(gòu)及定量分析方法等方面的研究鮮有報(bào)道；關(guān)于其抗氧化的研究也只涉及體外試管比色實(shí)驗(yàn)，鮮有生物體內(nèi)抗氧化方面的研究?；诖?，本實(shí)驗(yàn)首先通過(guò)比色法和高效液相色譜法建立了南瓜色素的定量測(cè)定方法，采用乙醇作為提取液，進(jìn)而采用Box-Behnken Design（BBD）的試驗(yàn)設(shè)計(jì)方法對(duì)超聲輔助提取南瓜色素的工藝條件進(jìn)行優(yōu)化，利用大孔吸附樹(shù)脂對(duì)制備的南瓜色素進(jìn)行純化，并對(duì)純化后南瓜色素在秀麗隱桿線蟲(chóng)（Caenorhabditis elegans）模式生物體內(nèi)的抗氧化作用進(jìn)行了研究，以期為南瓜色素的開(kāi)發(fā)利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 原料與試劑

南瓜采用黃狼南瓜購(gòu)于杭州下沙物美超市，無(wú)病蟲(chóng)害和腐爛，洗凈后去皮、籽、瓤并切絲，置65 ℃烘箱中烘干后粉碎，過(guò)60目篩備用；甲醇與乙腈為色譜純，購(gòu)于杭州米克化工儀器有限公司；二甲基亞砜（DMSO）等化學(xué)試劑均為分析純，購(gòu)于杭州米克化工儀器有限公司；大孔吸附樹(shù)脂（AB-8、D-101、DA-201、DM-301）購(gòu)于東鴻化工有限公司；野生型秀麗隱桿線蟲(chóng)（N2），大腸桿菌E.coliOP50，由浙江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院惠贈(zèng)；BCA蛋白定量測(cè)定試劑盒，超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒，丙二醛（MDA）測(cè)試盒，所有試劑盒購(gòu)于南京建成科技有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 南瓜色素定量分析方法的建立

采用超聲輔助醇提的方法制備南瓜色素，用95%的乙醇溶液洗脫至無(wú)色，用DA-201樹(shù)脂純化后，在300～800 nm范圍內(nèi)進(jìn)行光譜掃描獲得最大吸收峰。參考周業(yè)豐等的方法[14]略做修改，即純化后色素，用無(wú)水乙醇配置成不同濃度的稀釋液，測(cè)定南瓜色素在可見(jiàn)區(qū)（446 nm）具有最大吸收，在446 nm處檢測(cè)不同濃度南瓜色素的吸光度，繪制濃度-吸光度關(guān)系曲線，線性回歸方程為：y=0.132 9x-0.009 2，R=0.994 1。南瓜色素濃度與吸光度之間存在較好的線性關(guān)系。

1.2.2 南瓜色素提取工藝單因素試驗(yàn)

1.2.2.1 浸提劑濃度優(yōu)化

配置濃度分別為50%、60%、70%、80%、90%、100%的乙醇溶液，在料液比1∶10，超聲30 min，溫度50 ℃，水浴震蕩40 min條件下提取。

1.2.2.2 浸提時(shí)間的優(yōu)化

將水浴震蕩時(shí)間分別設(shè)置為10、20、30、40、50、60 min，在乙醇濃度100%，料液比1∶10，超聲30 min，溫度50 ℃條件下提取。

1.2.2.3 浸提料液比的優(yōu)化

分別按照料液比1∶5、1∶10、1∶15、1∶20、1∶25、1∶30、1∶35、1∶40（g/mL）加入無(wú)水乙醇，在超聲30 min，溫度50 ℃，水浴震蕩40 min條件下提取。

1.2.2.4 浸提溫度的優(yōu)化

將浸提溫度分別設(shè)置為20、30、40、50、60、70 ℃，在乙醇濃度100%，料液比1∶10，超聲30 min，水浴震蕩40 min條件下提取。

1.2.2.5 超聲輔助時(shí)間的優(yōu)化

將超聲波輔助時(shí)間分別設(shè)置為10、20、30、40、50、60 min，在乙醇濃度100%，料液比1∶10，溫度50 ℃，水浴震蕩40 min條件下提取。

1.2.3 響應(yīng)面優(yōu)化提取條件

根據(jù)單因素試驗(yàn)的結(jié)果，確定影響南瓜色素得率最顯著的3 個(gè)因素，以南瓜色素得率為響應(yīng)值，采用Box-Behnken Design（BBD）的試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化南瓜色素的提取工藝條件。

1.2.4 大孔樹(shù)脂型號(hào)的選擇

稱取活化后大孔樹(shù)脂AB-8、D-101、DA-201與DM-301，加入南瓜色素提取液，置于恒溫水浴振蕩器中進(jìn)行振蕩吸附，測(cè)定最佳波長(zhǎng)下吸光度，計(jì)算吸附率；將吸附平衡的大孔樹(shù)脂抽濾，加入無(wú)水乙醇進(jìn)行水浴振蕩解吸，測(cè)定最佳波長(zhǎng)下吸光度，計(jì)算解吸率。吸附率與解吸率計(jì)算公式參考努爾比亞·亞力坤的等的方法[15]。計(jì)算公式為：

（1）吸附率%=（初始吸光值－吸附后吸光值）/初始吸光值×100%

（2）解析率%=解吸后吸光值/（初始吸光值－吸附后吸光值）×100%。

1.2.5 大孔樹(shù)脂靜態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)

1.2.5.1 吸附解吸最佳時(shí)長(zhǎng)

靜態(tài)吸附動(dòng)力學(xué)曲線：取20 mL 南瓜提取液，向其中加入經(jīng)過(guò)預(yù)處理的大孔樹(shù)脂2 g，靜態(tài)吸附，每隔30 min測(cè)定1次吸光度，持續(xù)180 min。

解吸動(dòng)力學(xué)曲線：過(guò)濾達(dá)到飽和吸附的樹(shù)脂，向樹(shù)脂中加入20 mL無(wú)水乙醇，靜態(tài)解吸，每隔10 min測(cè)定一次吸光度。

1.2.5.2 樹(shù)脂與提取液的最佳比例

分別稱取0.5、1.0、1.5、2，2.5、3、3.5、4.0 g處理好的最優(yōu)型號(hào)樹(shù)脂，各加入20 mL南瓜色素提取液，靜置最優(yōu)時(shí)長(zhǎng)后，測(cè)定各吸附液的吸光度。

1.2.5.3 樹(shù)脂與提取液的最佳pH值取7 份20 mL 南瓜色素粗提液，分別加入1 g 最優(yōu)型號(hào)樹(shù)脂。pH 值分別調(diào)為1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0、11.0（HCl或NaOH調(diào)節(jié)），靜態(tài)吸附最優(yōu)時(shí)長(zhǎng)后，在最優(yōu)波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度。

1.2.6 大孔樹(shù)脂動(dòng)態(tài)實(shí)驗(yàn)取已吸附南瓜色素的樹(shù)脂10 g，裝入25×200 mm的色譜柱，用蒸餾水洗脫8個(gè)柱體積后，再用無(wú)水乙醇洗脫至洗脫液無(wú)色，流速為1.0 mL/min，測(cè)定每份收集液的吸光度，確定洗脫劑用量。

1.2.7 線蟲(chóng)體內(nèi)抗氧化指標(biāo)檢測(cè)。

C.elegans經(jīng)同步化培養(yǎng)后使用，實(shí)驗(yàn)設(shè)DMSO空白對(duì)照組、VE陽(yáng)性對(duì)照組與不同濃度樣品組（12.5、25、50 μmol/L）。同步化線蟲(chóng)挑至含大腸桿菌OP50的NGM培養(yǎng)基，樣品處理6 h后，制備線蟲(chóng)均漿，采用試劑盒法檢測(cè)線蟲(chóng)體內(nèi)總超氧化物歧化酶活力（T-SOD）和丙二醛（MDA）水平。

1.2.8 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)均以Means±SD表示，使用IBM SPSS Statistics 22 進(jìn)行顯著性分析（P＜0.0.5）。

2 結(jié)果與分析

2.1 南瓜色素的提取工藝優(yōu)化

2.1.1 南瓜色素超聲提取的單因素試驗(yàn)

2.1.1.1 乙醇濃度的優(yōu)化

乙醇濃度對(duì)南瓜色素得率的影響較大。隨乙醇濃度增加，南瓜色素得率快速上升，濃度增加至95%時(shí)，色素得率趨于平緩，故選擇95%乙醇作為浸提劑濃度。

2.1.1.2 超聲時(shí)間、料液比、浸提溫度、浸提時(shí)間的優(yōu)化

超聲時(shí)間、料液比、浸提溫度、浸提時(shí)間對(duì)南瓜色素得率的影響見(jiàn)圖1。由圖1（A），隨著超聲時(shí)間的延長(zhǎng)，南瓜色素得率出現(xiàn)先升后降的趨勢(shì)，可能是超聲過(guò)長(zhǎng)破壞南瓜色素導(dǎo)致[3]。超聲40 min時(shí)得率最大，故選擇40 min作為響應(yīng)面優(yōu)化的中心水平。由圖1（B），隨著料液比的增加，色素得率快速上升，隨著趨于平緩并有下降趨勢(shì)，其原因可能是隨著料液比的增大，單位體積提取劑中對(duì)南瓜色素的溶解量已基本飽和，南瓜色素向浸提劑的擴(kuò)散達(dá)到平衡，導(dǎo)致南瓜色素不能充分溶出[16]。料液比1∶40時(shí)得率最大，故選擇1∶40作為響應(yīng)面優(yōu)化的中心水平。

由圖1（C），溫度為40 ℃時(shí)得率最高，原因是溫度過(guò)高使南瓜色素降解導(dǎo)致[17]，故選擇40 ℃作為最佳提取溫度。由圖1（D），隨著浸提時(shí)間的延長(zhǎng)，南瓜色素得率出現(xiàn)先降后升再降的趨勢(shì)，浸提60 min時(shí)色素得率最高，隨后下降可能是隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，南瓜色素被氧化所致，故選擇60 min作為響應(yīng)面優(yōu)化的中心水平。

圖1 超聲條件對(duì)南瓜色素得率的影響Figure 1 The effect of ultrasonic condition on yield of pumpkin pigment

2.1.2 響應(yīng)面優(yōu)化南瓜色素的提取工藝條件

根據(jù)南瓜色素提取的單因素試驗(yàn)，確定3 因素3 水平為料液比1∶10、1∶40、1∶70，浸提時(shí)間40、60、80 min，超聲時(shí)間20、40、60 min。通過(guò)Design-expert 8.0.6數(shù)據(jù)處理軟件的Box-Behnken Design（BBD）的試驗(yàn)設(shè)計(jì)原理，以南瓜色素得率為響應(yīng)值，試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果見(jiàn)表1，可獲得3個(gè)因素與響應(yīng)值間的回歸方程，如下：

Y=-0.28A2+0.084B2-0.51C2+0.11AB-0.11AC-0.009BC+0.035A+0.049B+0.9C+6.27

回歸方程中，Y表示南瓜色素得率的預(yù)測(cè)值，A、B與C分別代表超聲時(shí)間、浸提時(shí)間與料液比的自變量，對(duì)回歸方程系數(shù)分析結(jié)果見(jiàn)表2。對(duì)回歸模型進(jìn)行方差分析，影響南瓜色素得率的順序?yàn)榱弦罕龋窘釙r(shí)間＞超聲時(shí)間。相關(guān)系數(shù)R2（決定系數(shù)）與R2Adj（調(diào)節(jié)決定系數(shù)）分別為0.942 4與0.868 2，表明預(yù)測(cè)值與觀測(cè)值間具有較高相關(guān)性。同時(shí)，較低的變異系數(shù)（C.V.%3.67）表明高度的可靠性與精密度。P用于檢測(cè)每個(gè)系數(shù)的顯著性，其中模型的P=0.001 5，說(shuō)明模型適應(yīng)性非常顯著該模型的擬合度好，可以真實(shí)地描述各個(gè)影響因子與響應(yīng)值之間的關(guān)系。同時(shí)，失擬項(xiàng)（0.131 3）不顯著，說(shuō)明回歸方程與實(shí)際情況吻合較好，實(shí)驗(yàn)誤差小。

表1 南瓜色素提取的BBD設(shè)計(jì)及響應(yīng)值Table 1 BBD design and response value of pumpkin pigment extraction

表2 響應(yīng)面二次型方差分析Table 2 Response surface quadratic analysis of variance

由實(shí)驗(yàn)結(jié)果做響應(yīng)面圖，見(jiàn)圖2，可看出各因素在南瓜色素得率過(guò)程中的相互作用，從而確定合適的配比參數(shù)。預(yù)測(cè)的配比參數(shù)為：超聲時(shí)間41.56 min、浸提時(shí)間80 min、料液比1∶66.14，該條件下南瓜色素得率理論值為6.74 mg/g。為了驗(yàn)證模型預(yù)測(cè)的準(zhǔn)確性，實(shí)驗(yàn)對(duì)預(yù)測(cè)參數(shù)進(jìn)行了驗(yàn)證，參數(shù)調(diào)整為：超聲時(shí)間42 min、浸提時(shí)間80 min、料液比1∶66。經(jīng)過(guò)3組平行實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)?zāi)瞎仙氐寐蕿?.760±0.005 mg/g，與預(yù)測(cè)理論值無(wú)顯著性差異，響應(yīng)面優(yōu)化真實(shí)可靠。

2.2 南瓜色素純化工藝的選擇

2.2.1 大孔樹(shù)脂型號(hào)的選擇

由表3可知，AB-8的吸附率最優(yōu)，其次為D-101，而解吸率相較其他型號(hào)較差。樹(shù)脂的選擇需同時(shí)考慮吸附率和解吸率，其中AB-8是常用的大孔樹(shù)脂，價(jià)格低廉，因此綜合考慮之后選取AB-8。

圖2 自變量間的交互作用對(duì)南瓜色素得率的影響Figure 2 The effect of interaction among variables on the yield of pumpkin pigment

表3 不同型號(hào)大孔樹(shù)脂的解吸率和吸附率Table 3 Desorption and adsorption rates of different types of macroporous resins

2.2.2 靜態(tài)吸附解吸時(shí)長(zhǎng)的選擇

由圖3（A），靜態(tài)吸附時(shí)隨著時(shí)間增加，得率逐漸降低，在150 min后趨于穩(wěn)定，因此靜態(tài)吸附的最佳時(shí)間是150 min。由圖3（B），靜態(tài)解吸時(shí)吸光度隨時(shí)間增加得率升高，50 min后趨于平緩，故解吸的最佳時(shí)間為50 min。相較于努爾·亞力坤等的研究結(jié)果[15]，由于樹(shù)脂型號(hào)的不同，AB-8對(duì)于南瓜色素吸附解吸的時(shí)長(zhǎng)比D-101短。

圖3 靜態(tài)吸附解吸時(shí)長(zhǎng)對(duì)南瓜色素的影響Figure 3 The effect of static adsorption and desorption time on pumpkin pigment

2.2.3 料液比的選擇

由圖4可知，在每200 mL乙醇中樹(shù)脂質(zhì)量達(dá)到2.5 g時(shí)被吸附的色素提取液得率趨于穩(wěn)定，所以較優(yōu)的樹(shù)脂與色素提取液比例為1∶8（g/mL）。

2.2.4 洗脫劑的選擇由表4，解吸時(shí)最優(yōu)洗脫劑為乙酸乙酯，其次為丙酮，由于各文獻(xiàn)中樹(shù)脂型號(hào)選擇不同，洗脫劑有所不同，出于安全考慮，后期實(shí)驗(yàn)采用乙醇作為洗脫劑。

圖4 樹(shù)脂用量對(duì)南瓜色素得率影響Figure 4 The effect of resin dosage on the yield of pumpkin pigment

表4 不同洗脫劑對(duì)南瓜色素解吸的影響Table 4 Effect of different eluents on the desorption of pumpkin pigment

2.2.5 pH值的選擇

實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)南瓜色素在堿性條件變渾濁，有文獻(xiàn)報(bào)道類胡蘿卜素在高堿性環(huán)境中不穩(wěn)定[18]，可見(jiàn)南瓜色素不適用于堿性條件。由圖5（A），酸性和中性條件下，AB-8大孔樹(shù)脂對(duì)南瓜色素的吸附隨著pH值呈現(xiàn)先升后降趨勢(shì)，可能是由于色素內(nèi)含有羧基（-COOH）呈現(xiàn)酸性的原因[19]。不同pH值條件下的吸附效果相差不大，且強(qiáng)酸性條件下色素的得率有所下降，說(shuō)明色素在強(qiáng)酸性條件下被降解。故選取pH值為7。

2.2.6 洗脫劑用量的選擇

由圖5（B），得率隨洗脫劑用量的增加先升高后降低，洗脫劑用量為6 倍洗脫體積（BV）時(shí)，達(dá)到峰值。18 BV以后得率趨于平穩(wěn)，色素基本全部被洗脫出來(lái)，故洗脫劑的最佳用量為18 BV。

綜上，在最佳純化條件下，即選取AB-8樹(shù)脂，樹(shù)脂與溶劑最佳比例為1∶8（g/mL），吸附洗脫劑的最佳用量為18 倍柱體積，此時(shí)南瓜色素的得率為9.5%。在此條件下分離制備南瓜色素，進(jìn)行后續(xù)的抗氧化能力研究。

圖5 pH和洗脫劑用量對(duì)南瓜色素得率影響Figure 5 The effect of pH and the amount of eluent on the yield of pumpkin pigment

2.3 南瓜色素對(duì)C. elegans體內(nèi)總超氧化物歧化酶（T-SOD）與MDA活性的影響

SOD是機(jī)體重要的抗氧化酶，可清除超氧陰離子自由基。由圖6（A），隨著南瓜色素濃度升高，線蟲(chóng)體內(nèi)T-SOD 活性呈現(xiàn)先升后降現(xiàn)象，色素濃度為25 mg/mL 時(shí)，SOD 活性顯著高于空白對(duì)照組（P＜0.05）。在50 mg/mL抗氧化活性大幅降低且僅稍好于對(duì)照，主要原因可能有兩方面的原因，一是濃度過(guò)高會(huì)產(chǎn)生其它生理毒性，反而影響了線蟲(chóng)的正常生理活動(dòng)[20]，二是可能是滲透壓過(guò)高造成的[21]。由圖6（B），與空白對(duì)照組比較，不同濃度的南瓜色素，均可以使線蟲(chóng)體內(nèi)MDA 水平顯著下降（P＜0.05），且與陽(yáng)性對(duì)照VE間無(wú)差異（P＞0.05）。MDA作為脂質(zhì)氧化終產(chǎn)物，其含量越大表明機(jī)體氧化損傷越嚴(yán)重[22]。

圖6 南瓜色素對(duì)C.elegans體內(nèi)總超氧化物歧化酶（T-SOD）與MDA活性的影響Figure 6 The effect of pumpkin pigment on T-SOD and MDA level activity in C.elegans

3 結(jié)論

南瓜色素是一種安全性高，著色力強(qiáng)的天然色素，同時(shí)又是一種非常重要生物抗氧化劑。南瓜色素的提取方法主要有傳統(tǒng)的溶劑提取法（提取南瓜色素較普遍方法，包含固液萃取法、回流法、煎煮法等）、微波輔助提取法、超聲波輔助提取法以及超臨界二氧化碳萃取法等。其中，超聲波輔助提取法具有減少耗時(shí)、效率高、能耗低、可低溫下操作等優(yōu)點(diǎn)近年來(lái)倍受關(guān)注。我們采用超聲波輔助提取南瓜色素時(shí)發(fā)現(xiàn)，隨著超聲時(shí)間延長(zhǎng)、溫度升高，南瓜色素的得率出現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，這主要是因?yàn)槌晻r(shí)間過(guò)長(zhǎng)[3]，溫度過(guò)高[17]，都會(huì)導(dǎo)致南瓜色素被破壞。而隨著浸提時(shí)間的延長(zhǎng)，得率卻呈現(xiàn)先降后升的趨勢(shì)，這可能是由于南瓜色素被氧化造成的。隨著料液比的增大，南瓜色素得率的趨勢(shì)上升后趨向平衡，這主要是因?yàn)閱挝惑w積提取劑中南瓜色素的溶解量已經(jīng)基本飽和[16]。本實(shí)驗(yàn)采用單因素試驗(yàn)和Box-Behnken Design（BBD）的試驗(yàn)設(shè)計(jì)得出95%乙醇為浸提劑、超聲時(shí)間42 min、浸提時(shí)間80 min、料液比1∶66時(shí)，南瓜色素溶出效果最佳，南瓜色素得率達(dá)6.760±0.005 mg/g。

南瓜色素的純化方法主要采用吸附柱層析法，常用的吸附劑主要為大孔吸附樹(shù)脂、氧化鋁等。我們對(duì)不同極性的大孔樹(shù)脂進(jìn)行了篩選，實(shí)驗(yàn)結(jié)果與王瑩[11]等的研究結(jié)果不同，可能是由于使用的南瓜品種不同，其中的南瓜色素的種類與極性不同所致?？紤]南瓜色素（主要為葉黃素類的類胡蘿卜素）的極性特點(diǎn)，我們選取了非極性與弱極性樹(shù)脂進(jìn)行純化。吸附率最高的是AB-8，但解析率不高，文獻(xiàn)中用丙酮作為溶劑，解析率較高；考慮到食用安全性，實(shí)驗(yàn)選擇了乙醇進(jìn)行洗脫。

南瓜色素是一種含有共軛雙鍵系的萜烯基團(tuán)類天然色素，它能夠影響細(xì)胞生長(zhǎng)調(diào)節(jié)，調(diào)節(jié)基因表達(dá)和免疫反應(yīng)。近年來(lái)，對(duì)于花青素等水溶性天然色素的抗氧化性研究較多，而目前對(duì)于南瓜色素的抗氧化能力作用尚不明確，可通過(guò)體內(nèi)體外實(shí)驗(yàn)探討其作用機(jī)制，體外實(shí)驗(yàn)包括羥自由基（·OH）、DPPH 自由基（DPPH·）清除能力等，體內(nèi)實(shí)驗(yàn)可選用秀麗隱桿線蟲(chóng)（C.elegans）、大鼠及小鼠作為模式實(shí)驗(yàn)。其中秀麗隱桿線蟲(chóng)因具有結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、繁殖量大、方便觀察等特點(diǎn)備受關(guān)注，且大多與人體病癥有關(guān)的基因和通路涵蓋在線蟲(chóng)基因組中。在秀麗隱桿線蟲(chóng)上進(jìn)行對(duì)南瓜色素抗氧化性的研究，便于觀察，應(yīng)用線蟲(chóng)模型做的研究結(jié)果也可以外推到人類。本文南瓜色素抗氧化活性體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，隨著南瓜色素濃度升高，線蟲(chóng)體內(nèi)SOD活性呈現(xiàn)先升后降現(xiàn)象，可能原因是濃度過(guò)高會(huì)產(chǎn)生其它生理毒性[20]，反而影響了線蟲(chóng)的正常生理活動(dòng)，或是高濃度產(chǎn)生的高滲透壓所致[21]。而不同濃度的南瓜色素，均可以使線蟲(chóng)體內(nèi)MDA水平顯著下降（P＜0.05），使機(jī)體抗氧化能力提高。

目前對(duì)南瓜色素的高效制備仍在起步階段，抗氧化性研究也多停留在體外試管比色實(shí)驗(yàn)。獲得高得率高純度的南瓜色素，解吸其分子結(jié)構(gòu)、探討其抗氧化應(yīng)激作用的機(jī)制及結(jié)構(gòu)與活性間的構(gòu)效關(guān)系等是目前亟待解決的問(wèn)題。