HPLC法測定注射用帕瑞昔布鈉與5%葡萄糖注射液配伍后5-羥甲基糠醛的含量

張 俊，李湘萍，杜加秋

（瀚暉制藥有限公司，浙江 杭州 310016）

5-羥甲基糠醛是葡萄糖等單糖化合物在高溫或弱酸等條件下脫水產(chǎn)生的一個醛類化合物，該化合物對人體橫紋肌和內(nèi)臟有損害，且可發(fā)生聚合導(dǎo)致葡萄糖注射液變色[1]。注射用帕瑞昔布鈉說明書中建議的配伍溶劑包含5%葡萄糖注射液，為了確保用藥安全，需控制配伍溶液中5-羥甲基糠醛的含量[2-3]。本研究探討HPLC法測定注射用帕瑞昔布鈉與5%葡萄糖注射液配伍后5-羥甲基糠醛的含量，并模擬臨床用藥對配伍后的溶液放置一定的時間后5-羥甲基糠醛的含量進行測定，報道如下。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

高效液相色譜儀[廠家：戴安、島津]；電子分析天平和pH計[廠家：梅特勒]。

1.2 試藥

5-羥甲基糠醛（廠家：中國食品藥品檢定研究院，批號：111626-201912，含量99.2%）；帕瑞昔布鈉雜質(zhì)A、B、C、D、E，注射用帕瑞昔布鈉（規(guī)格：40mg；批號：6190401、6190403）均由浙江海正藥業(yè)股份有限公司提供；5%葡萄糖注射液（廠家：湖南科倫制藥有限公司；批號：E18100601-1）；注射器（廠家：玉升醫(yī)療器械；批號：20200226）；輸液管（廠家：湖南省綠洲惠康發(fā)展有限公司；批號：20190601）。甲醇和磷酸為色譜級，磷酸二氫鉀為分析純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 對照品溶液的配制

精密稱取5-羥甲基糠醛對照品適量，用稀釋劑（甲醇：水=50:50）溶解并稀釋制成1μg/ml的溶液，作為對照品溶液。

2.2 供試品溶液的配制

取注射用帕瑞昔布鈉適量，加5%的葡萄糖復(fù)溶；用稀釋劑（甲醇：水=50:50）配制成含葡萄糖約5mg/ml的溶液作為供試品溶液。

2.3 色譜條件

苯基鍵和硅膠柱（型號：YMC Pack Pheny 1；柱長：4.6mm×250mm；直徑：5μm）；緩沖鹽：0.01mol/L磷酸二氫鉀水溶液，用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0±0.1。流動相A：甲醇-緩沖鹽=50:50；流動相B：甲醇-緩沖鹽=70:30；梯度洗脫，洗脫程序見表1；檢測波長284nm；流速：1.0ml/min；進樣體積：10μl；柱溫40℃；。供試品溶液的高效液相色譜檢測圖見圖1。

表1 梯度洗脫表

圖1 供試品溶液的高效液相色譜檢測圖

2.4 5-羥甲基糠醛限度的確認(rèn)

根據(jù)《中國藥典》2020年版二部中與葡萄糖相關(guān)的制劑中5-羥甲基糠醛的最嚴(yán)限度，制定本品與葡萄糖配伍溶液中5-羥甲基糠醛限度為不得過葡萄糖標(biāo)示量的0.02%[4]，并按此限度開展分析方法驗證。

2.5 準(zhǔn)確度

分別按照5%葡萄糖注射液中5-羥甲基糠醛限度含量的20%、50%、100%、150%制備準(zhǔn)確度溶液，每個水平3份，每份溶液按照“2.3”項下色譜條件測定并計算回收率，結(jié)果顯示各濃度下的平均回收率分別為108%、104%、102%、102%。方法的回收率良好。

2.6 重復(fù)性試驗

按照“2.2”項下平行配制6份供試品并進樣，按外標(biāo)法計算，結(jié)果6份供試品溶液中，5-羥甲基糠醛含量的平均值為0.006%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD%）為0.0%，表明本方法重復(fù)性良好。

2.7 專屬性

精密量取“2.1”項下的對照品溶液和“2.2”項下的供試品溶液適量，按照“2.3”項下色譜條件分別進樣稀釋劑、對照品溶液、帕瑞昔布鈉雜質(zhì)A、B、C、D、E定位溶液及供試品溶液，結(jié)果空白溶液對5-羥甲基糠醛含量測定無干擾，各雜質(zhì)與5-羥甲基糠醛的分離度均大于1.5。

2.8 定量限與檢測限

精密量取“2.1”項下的對照品溶液，逐級稀釋并檢測，當(dāng)濃度為0.0079μg/ml時，信噪比在10～20之間，對應(yīng)含量為1.6×10-4%，為定量限。當(dāng)濃度為0.0024μg/ml時，信噪比在3～5之間，對應(yīng)含量為4.8×10-5 %，為檢測限。

2.9 線性與范圍

取5-羥甲基糠醛適量，用稀釋劑依次稀釋成定量限、50%、100%、150%、200%限度濃度的溶液，按“2.3”項下色譜條件進行測定，將濃度和峰面積進行線性回歸分析，得線性回歸方程：y = 1.3237 x - 0.0004，相關(guān)系數(shù)r為1.0000，故5-羥甲基糠醛在0.0079μg/ml～1.5820μg/ml濃度范圍內(nèi)，具有良好的線性關(guān)系。

2.10 配伍溶液中5-羥甲基糠醛含量測定結(jié)果

取兩批注射用帕瑞昔布鈉（批號：6190401、6190402），分別按“2.2”項下的方法用5%的葡萄糖溶液復(fù)溶，依次在放置0、6、12、18、24和30h后，稀釋至成含葡萄糖約5mg/ml的溶液，按“2.3”項下的色譜條件進行測定并計算5-羥甲基糠醛的含量，結(jié)果在30h內(nèi)，5-羥甲基糠醛的含量均為0.006%，均未超過葡萄糖標(biāo)示量的0.02%，且未發(fā)生明顯變化，說明配伍溶液的穩(wěn)定性良好。

3 討 論

注射用帕瑞昔布鈉說明書中建議的配伍溶劑包含5%葡萄糖注射液，為了確保用藥安全，需控制配伍溶液中5-羥甲基糠醛的含量。本研究采用高效液相色譜法檢測配伍溶液中的5-羥甲基糠醛，方法驗證結(jié)果顯示，該方法準(zhǔn)確度高、專屬性強、靈敏度高，適用于注射用帕瑞昔布鈉與葡萄糖注射液配伍后的5-羥甲基糠醛的檢測。

將注射用帕瑞昔布鈉與葡萄糖注射液配伍后的溶液放置0、6、12、18、24和30小時后進行檢測，5-羥甲基糠醛的含量沒有隨放置時間的延長而發(fā)生變化，一直保持在初始水平，遠(yuǎn)低于限度要求。故注射用帕瑞昔布鈉與5%葡萄糖注射液配伍穩(wěn)定性良好，5-羥甲基糠醛低于限度的要求。