睡菜環(huán)烯醚萜苷類成分及其α-葡萄糖苷酶抑制活性

陳靜文，林 芳，金 冠，何芷蕓，張志麒，劉呈雄，陳劍鋒，鄒 坤，程 凡*

(1.三峽大學(xué)生物與制藥學(xué)院天然產(chǎn)物研究與利用湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(三峽大學(xué))，湖北 宜昌 443002；2.神農(nóng)架國(guó)家公園管理局，湖北 神農(nóng)架林區(qū) 442400)

睡菜(MenyanthestrifoliateL.)為龍膽科睡菜屬多年生挺水植物，以全草入藥，具“食之令人思睡”的功效，故又稱“醉草、瞑菜”.睡菜在我國(guó)民間被認(rèn)為藥食兩用的藥用草本，有養(yǎng)心安神、健脾消食、清熱利尿的作用.睡菜中主要的化學(xué)成分包括萜類(包括環(huán)烯醚萜類、三萜類等)、生物堿類、木脂素類、黃酮類等[1-5].睡菜為龍膽科單屬種植物，其藥用價(jià)值及化學(xué)成分研究具有重要價(jià)值.環(huán)烯醚萜苷類化合物在睡菜草本中含量豐富，報(bào)道相較其余成分類型較多，然而睡菜中具體的環(huán)烯醚萜苷類成分仍不明確，有待發(fā)現(xiàn)的價(jià)值.本課題對(duì)睡菜全草進(jìn)行分離純化，共得到6個(gè)化合物，分別鑒定為7-epiexaltoside(1)、6″，7″-dihydro-7-epiexaltoside(2)、獐牙菜苷(3)、斷馬錢子苷半縮醛內(nèi)酯(4)、表斷馬錢子苷半縮醛內(nèi)酯(5)、馬錢子苷(6)，均為環(huán)烯醚萜苷成分.其中，化合物2～5為首次從該植物中分離得到.糖尿病是一種危害性極大且目前無(wú)特效藥的代謝性疾病，以持續(xù)高血糖為主要特征，并以其各類并發(fā)癥的危害性嚴(yán)重影響現(xiàn)代人們的生活.何麗華等[6]的研究指出山茱萸中環(huán)烯醚萜苷成分降血糖作用類似于α-葡萄糖苷酶抑制劑阿卡波糖的作用.抑制α-葡萄糖苷酶活性是目前糖尿病降血糖研究的熱點(diǎn)機(jī)制，為了解睡菜中環(huán)烯醚萜苷類成分對(duì)糖尿病的作用，本文首次對(duì)睡菜中分離得到的6個(gè)環(huán)烯醚萜苷成分進(jìn)行α-葡萄糖苷酶活性的體外篩選，均表現(xiàn)出良好的α-葡萄糖苷酶活性抑制效果，其中化合物3的抑制效果最佳.

1 材料與方法

1.1 儀器

C18反相色譜硅膠(YMC公司)；薄層色譜硅膠GF254(青島海洋化工有限公司)；正相色譜硅膠(煙臺(tái)化工研究所)；AB-8大孔吸附樹(shù)脂(天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所)；Dionex Ultimate 3000型高效液相色譜儀(美國(guó)戴安公司)；Sephadex LH-20(美國(guó)GE公司)；Cosmosil MS-II RP-C18色譜柱(250×10 mm，10 μm半制備型；250×4.6 mm，5 μm分析型，日本Cosmosil公司)；Waters 2489型高效液相色譜儀(美國(guó)Waters公司)；AmozonSL+1200液相色譜-雙重漏斗傳輸離子阱質(zhì)譜儀(德國(guó)布魯克·道爾頓公司)；Bruker AV 400核磁共振波譜儀(瑞士布魯克公司)；低溫冷凍干燥機(jī)(美國(guó)Labconco公司，型號(hào)：021125535E)；BioTek ELx800全自動(dòng)酶標(biāo)儀(美國(guó)寶特公司)；電子天平(上海民橋精密儀器有限公司，型號(hào)：FA2004).

1.2 材料與試劑

實(shí)驗(yàn)用睡菜采自湖北省神農(nóng)架，采摘時(shí)間為2016年8月，經(jīng)由三峽大學(xué)王玉兵博士(生物與制藥學(xué)院)鑒定：該植物為龍膽科睡菜屬睡菜(MenyanthestrifoliateL.)，標(biāo)本保存于三峽大學(xué)生物與制藥學(xué)院.

α-葡萄糖苷酶(酵母)、阿卡波糖(美國(guó)Sigma-Aldrich公司)、4-硝基酚-α-D-吡喃葡糖苷(PNPG，美國(guó)Sigma-Aldrich公司).色譜純甲醇(TEDIA公司)、色譜純乙腈(TEDIA公司)，其他試劑均為分析純.

1.3 提取與分離

睡菜全草粉碎后置于48 ℃干燥箱中烘干2 h，干重2.3 kg，以95%乙醇浸泡，加熱(78 ℃)回流提取2 h，收集濾液，此操作重復(fù)3次.濾液混合，經(jīng)減壓加熱后，濃縮干燥得到252 g睡菜浸膏，加水混懸均勻，依次用石油醚(PE)、乙酸乙酯(EA)、正丁醇(BA)分級(jí)萃取，萃取液分別收集進(jìn)行減壓濃縮干燥.取BA部位(85 g)，以蒸餾水對(duì)其進(jìn)行混懸，以AB-8大孔吸附樹(shù)脂柱色譜進(jìn)行分離，依次以蒸餾水，30%、60%、90%乙醇水溶液進(jìn)行洗脫，得到4個(gè)洗脫餾分(Fr.B1～Fr.B4).取Fr.B3餾分(18 g)，通過(guò)C18反相硅膠柱色譜進(jìn)行分離，以甲醇-水洗脫(梯度為甲醇∶水=1∶9～1∶0)，經(jīng)HPLC分析后，合并得到6個(gè)餾分(Fr.B3-1～Fr.B3-6).Fr.3-3餾分(2.0 g)經(jīng)Sephadex LH-20葡聚糖凝膠柱色譜分離，甲醇-水洗脫(梯度為甲醇∶水=1∶1)，再以半制備HPLC(乙腈∶水=26∶74)純化，得到化合物1(12.4 mg)，化合物2(14.7 mg)，化合物4(10.7 mg)，化合物6(22.4 mg).Fr.B3-5餾分(2.0 g)經(jīng)Sephadex LH-20葡聚糖凝膠柱色譜分離，甲醇-水洗脫(梯度為甲醇∶水=1∶1)，再以半制備HPLC(乙腈∶水=31∶69)純化，得到化合5(18.8 mg).取Fr.B2餾分(29 g)，以C18反相硅膠色譜柱進(jìn)行分離，以甲醇-水洗脫(梯度為甲醇∶水=1∶9～1∶0)，經(jīng)HPLC分析，合并得到9個(gè)餾分(Fr.B2-1～Fr.B2-9).Fr.B2-4流分(4.3 g)經(jīng)Sephadex LH-20葡聚糖凝膠柱色譜分離，甲醇-水洗脫(梯度為甲醇∶水=1∶1)，再以半制備HPLC(乙腈∶水=19∶81)純化，得到化合物3(18.2 mg).

1.4 α-葡萄糖苷酶活性篩選實(shí)驗(yàn)

根據(jù)文獻(xiàn)[7]的方法，以PNPG為底物，阿卡波糖為陽(yáng)性對(duì)照，在96微孔板上進(jìn)行活性檢測(cè).過(guò)程為：1)空板中加 PBS緩沖液(pH=6.8)60 μL；2)加入α-葡萄糖苷酶溶液(濃度為0.8 U·mL-1)20 μL ；3)加入樣品溶液(適當(dāng)濃度)60 μL，37 ℃恒溫環(huán)境孵育15 min；4)加入 PNPG(濃度為5 mmoL·L-1)20 μL，置于37 ℃恒溫環(huán)境下反應(yīng)15 min；5)加入Na2CO3溶液(濃度為0.2 moL·L-1)80 μL終止反應(yīng)；6)測(cè)定吸光度(A)值(波長(zhǎng)選定405 nm).同時(shí)設(shè)樣品組(待測(cè)化合物+PBS+PNPG+酶)，樣品空白組(待測(cè)化合物+PBS+酶)，酶活性組(PBS+PNPG+酶)，酶空白組(PBS+酶).抑制率的計(jì)算公式：

α-葡萄糖苷酶抑制率(%)=1-[(A樣品組-A樣品空白組)·(A酶活性組-A酶空白組)-1]×100%.

每組各重復(fù)3次，用軟件Origin 9.1計(jì)算IC50值.

2 結(jié)果與分析

2.1 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色無(wú)定形粉末.ESI-MSm/z：563 [M+Na]+，分子式C26H36O12.Molish反應(yīng)呈陽(yáng)性，推測(cè)化合物為苷類化合物；香草醛顯色劑加熱，化合物顯紅色.1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)譜與文獻(xiàn)[8]比對(duì)，可以將化合物分為3個(gè)部分，苷元部分有3個(gè)烯烴質(zhì)子信號(hào)δH 7.62(1H，d，J=2.4 Hz)、δH 5.48(1H，m)、δH 5.38～5.28(2H，m)；取代基部分看到2個(gè)烯烴質(zhì)子信號(hào)δH 6.80(1H，td，J=7.4，1.6 Hz)、δH 5.45(1H，m)；以及糖的質(zhì)子信號(hào).13C-NMR(100 MHz，DMSO-d6)譜中苷元部分有1個(gè)羰基碳信號(hào)δC(165.2)；4個(gè)烯烴碳信號(hào)δC(153.3)、δC(103.1)、δC(132.0)、δC(120.9).取代基部分1個(gè)羰基碳信號(hào)δC(162.9)；4個(gè)烯烴碳信號(hào)δC(126.6)、δC(144.3)、δC(134.8)、δC(125.8)；2個(gè)甲基碳信號(hào)δC(12.1)、δC(16.2)；糖部分1個(gè)端基碳信號(hào)δC(98.6).推測(cè)化合物為母核為裂環(huán)環(huán)烯醚萜，帶香葉基的苷類化合物，與文獻(xiàn)[9]報(bào)道對(duì)比，數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物1為7-epiexaltoside.其具體的1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)如下，1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δH：7.66(1H，d，J=2.5 Hz，H-3)，6.85(1H，m，H-3″)，6.62(1H，t，J=1.9 Hz，H-7)，5.55(1H，s，H-1)，5.53(1H，m，H-8)，5.41(1H，m，H-7″)，5.38-5.29(2H，m，H-10)，4.73(1H，J=7.7 Hz，H-1′)，4.06(2H，d，J=6.6 Hz，H-8″)，3.47～3.35(1H，m，H-5)，2.76(1H，m，H-9)，2.38(2H，m，H-4″)，2.17(2H，t，J=7.4 Hz，H-5″)，1.86～1.98(2H，m，H-6)，1.86(3H，s，H-9″)，1.71(3H，s，H-10″).13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δC：98.9(C-1)，155.3(C-3)，104.4(C-4)，23.2(C-5)，29.3(C-6)，93.8(C-7)，133.1(C-8)，43.5(C-9)，121.2(C-10)，167.2(C-11)，101.1(C-1′)，74.8(C-2′)，78.3(C-3′)，71.4(C-4′)，78.4(C-5′)，62.6(C-6′)，166.2(C-1″)，128.4(C-2″)，145.5(C-3″)，28.2(C-4″)，38.9(C-5″)，137.4(C-6″)，125.8(C-7″)，59.4(C-8″)，12.3(C-9″)，16.2(C-10″).

化合物2：白色無(wú)定形粉末.ESI-MSm/z：563 [M+Na]+，分子式C26H36O12.Molish反應(yīng)呈陽(yáng)性，推測(cè)化合物為苷類化合物；香草醛顯色劑加熱，化合物顯紅色.1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)譜與文獻(xiàn)[9]比對(duì)，可以將化合物分為3個(gè)部分，發(fā)現(xiàn)苷元部分有3個(gè)烯烴質(zhì)子信號(hào)δH 7.62(1H，d，J=2.4 Hz)、δH 5.48(1H，m)、δH 5.27～5.39(2H，m)；取代基部分看到1個(gè)烯烴質(zhì)子信號(hào)δH 6.81(1H，td，J=7.6，1.6 Hz)、δH 5.48(1H，m)；以及糖的質(zhì)子信號(hào).13C-NMR(100 MHz，DMSO-d6)譜中苷元部分有1個(gè)羰基碳信號(hào)δC(165.2)；4個(gè)烯烴碳信號(hào)δC(153.3)、δC(103.1)、δC(132.0)、δC(120.9).取代基部分1個(gè)羰基碳信號(hào)δC(162.9)；2個(gè)烯烴碳信號(hào)δC(126.3)、δC(145.0)；2個(gè)甲基碳信號(hào)δC(12.1)、δC(19.3)；糖部分1個(gè)端基碳信號(hào)δC(98.6).推測(cè)化合物為母核為裂環(huán)環(huán)烯醚萜，帶香葉基的苷類化合物，與文獻(xiàn)[10]報(bào)道對(duì)比，數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物2為6″，7″-dihydro-7-epiexaltoside.其1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)如下，1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δH：7.65(1H，d，J=2.3 Hz，H-3)，6.85(1H，m，H-3″)，6.61(1H，t，J=2.1，H-7)，5.56(1H，d，J=1.7 Hz，H-1)，5.49(1H，m，H-8)，5.39～5.27(2H，m，H-10)，4.71(1H，J=7.8 Hz，H-1′)，3.61(2H，m，H-8″)，3.44～3.35(1H，m，H-5)，2.75(1H，m，H-9)，1.98～1.88(2H，m，H-6)，2.23(2H，m，H-4″)，1.84(3H，s，H-9″)，1.61～1.49(2H，m，H-7″)，1.59～1.44(2H，m，H-5″)，1.41(1H，m，H-6″)，0.93(3H，d，J=6.7 Hz，H-10″).13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δC：99.2(C-1)，155.3(C-3)，104.5(C-4)，27.2(C-5)，30.8(C-6)，93.8(C-7)，133.0(C-8)，43.5(C-9)，121.6(C-10)，167.2(C-11)，100.6(C-1′)，74.6(C-2′)，78.4(C-3′)，71.4(C-4′)，78.2(C-5′)，62.6(C-6′)，166.2(C-1″)，127.8(C-2″)，146.1(C-3″)，27.3(C-4″)，40.5(C-5″)，23.2(C-6″)，36.7(C-7″)，61.1(C-8″)，12.2(C-9″)，19.8(C-10″).

化合物3：白色無(wú)定形粉末.ESI-MSm/z：381 [M+Na]+，分子式C16H22O9.Molish反應(yīng)呈陽(yáng)性，推測(cè)化合物為苷類化合物；香草醛顯色劑加熱，化合物顯紅色.1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)譜與文獻(xiàn)[11]比對(duì)，可以看到苷元3個(gè)烯烴質(zhì)子信號(hào)δH 7.49(1H，d，J=2.5 Hz)、δH 5.48(1H，m)、δH 5.25(1H，dd，J=10.1，2.3 Hz，H-10a)，δH 5.32(1H，dd，J=17.2，2.2 Hz，H-10b)；13C-NMR(100 MHz，DMSO-d6)譜中可以看到一個(gè)端基碳信號(hào)δC(98.5)；1個(gè)羰基碳信號(hào)δC(165.1)；4個(gè)烯烴碳信號(hào)δC(151.9)、δC(105.3)、δC(132.8)、δC(120.8).推測(cè)化合物為裂環(huán)環(huán)烯醚萜苷類化合物，與文獻(xiàn)[11]報(bào)道對(duì)比，數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物3為獐牙菜苷.其1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)如下，1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δH：7.59(1H，d，J=2.5 Hz，H-3)，5.60-5.50(1H，m，H-8)，5.54(1H，d，J=1.8 Hz，H-1)，5.32(1H，dd，J=14.2，1.7 Hz，H-10b)，5.25(1H，dd，J=8.6，1.8 Hz，H-10a)，4.69(1H，d，J=7.8 Hz，H-1′)，4.48～4.32(2H，m，H-7)，2.69(1H，ddd，J=9.4，5.4，1.5 Hz，H-9)，1.80～1.65(2H，m，H-6).13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δC：98.2(C-1)，153.9(C-3)，106.3(C-4)，28.2(C-5)，25.7(C-6)，69.4(C-7)，132.8(C-8)，44.0(C-9)，120.8(C-10)，168.1(C-11)，99.5(C-1′)，74.6(C-2′)，78.8(C-3′)，71.5(C-4′)，77.8(C-5′)，62.5(C-6′).

化合物4：白色無(wú)定形粉末.ESI-MSm/z：389 [M+H]+，分子式C17H24O10.Molish反應(yīng)呈陽(yáng)性，推測(cè)化合物為苷類化合物；香草醛顯色劑加熱，化合物顯紅色.1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)中可以看到苷元3個(gè)烯烴質(zhì)子信號(hào)δH 7.55(1H，d，J=2.0 Hz)、δH 5.46(1H，m)、δH 5.28(1H，dd，J=10.1，2.3 Hz，H-10a)、δH 5.36(1H，dd，J=17.2，2.0 Hz，H-10b)；1個(gè)甲氧基質(zhì)子信號(hào)δH 3.46(3H，s).13C-NMR(101 MHz，DMSO-d6)中可以看到1個(gè)端基碳信號(hào)δC(98.9)；1個(gè)甲氧基碳信號(hào)δC(56.5)；4個(gè)烯烴碳信號(hào)δC(152.2)、δC(104.3)、δC(133.6)、δC(121.4).推測(cè)化合物為裂環(huán)環(huán)烯醚萜苷類化合物，與文獻(xiàn)[12]報(bào)道對(duì)比，數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物4為斷馬錢子苷半縮醛內(nèi)酯.其1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)如下，1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δH：7.57(1H，d，J=2.4 Hz，H-3)，5.55(2H，d，J=1.2 Hz，H-1)，5.46(1H，m，H-8)，5.32(1H，s，H-7)，5.30(1H，m，H-10a)，5.26(1H，m，H-10b)，4.65(1H，d，J=7.8 Hz，H-1′)，3.55(3H，s，—OCH3)，3.15(1H，m，H-5)，2.64(1H，m，H-9)，1.95(1H，m，H-6a)，1.45(1H，m，H-6b).13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δC：98.1(C-1)，154.1(C-3)，105.2(C-4)，25.0(C-5)，31.8(C-6)，105.6(C-7)，133.0(C-8)，43.8(C-9)，121.4(C-10)，167.6(C-11)，99.9(C-1′)，74.7(C-2′)，77.8(C-3′)，71.5(C-4′)，78.5(C-5′)，62.6(C-6′)，57.2(—OCH3).

化合物5：白色無(wú)定形粉末.ESI-MSm/z：389 [M+H]+，分子式C17H24O10.Molish反應(yīng)呈陽(yáng)性，推測(cè)化合物為苷類化合物；香草醛顯色劑加熱，化合物顯紅色.1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)中可以看到苷元3個(gè)烯烴質(zhì)子信號(hào)δH 7.55(1H，d，J=2.0 Hz)、δH 5.46(1H，m)、δH 5.28(1H，dd，J=10.1，2.3 Hz，H-10a)、δH 5.36(1H，dd，J=17.2，2.0 Hz，H-10b)；1個(gè)甲氧基質(zhì)子信號(hào)δH 3.46(3H，s).13C-NMR(101 MHz，DMSO-d6)中可以看到1個(gè)端基碳信號(hào)δC(98.9)；1個(gè)甲氧基碳信號(hào)δC(56.5)；4個(gè)烯烴碳信號(hào)δC(152.2)、δC(104.3)、δC(133.6)、δC(121.4).推測(cè)化合物為裂環(huán)環(huán)烯醚萜苷類化合物，與文獻(xiàn)[12]報(bào)道對(duì)比，數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物5為表斷馬錢子苷半縮醛內(nèi)酯.其1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)如下，1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δH：5.46(1H，s，H-1)，7.53(1H，d，J=2.0 Hz，H-3)，3.00(1H，m，H-5)，1.59(1H，d，J=12.0 Hz，H-6a)，1.83(1H，d，J=13.2Hz，H-6b)，5.31(1H，dd，J=9.6，2.0 Hz，H-7)，5.46(1H，m，H-8)，2.63(1H，dd，J=6.0，1.6 Hz，H-9)，5.28(1H，dd，J=10.1，2.3 Hz，H-10a)，5.36(1H，dd，J=17.2，2.0 Hz，H-10b)，3.46(3H，s，-OCH3).13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δC：98.6(C-1)，154.4(C-3)，105.2(C-4)，23.0(C-5)，30.3(C-6)，103.5(C-7)，133.6(C-8)，42.9(C-9)，121.2(C-10)，167.4(C-11)，100.2(C-1′)，74.6(C-2′)，78.2(C-3′)，71.5(C-4′)，78.3(C-5′)，62.5(C-6′)，57.1(—OCH3).

化合物6：白色無(wú)定形粉末.ESI-MSm/z：389 [M+H]+，分子式C17H26O10.Molish反應(yīng)呈陽(yáng)性，推測(cè)化合物為苷類化合物.10%濃硫酸—乙醇溶液，加熱顯紫紅色.1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)中可以看到1個(gè)烯烴質(zhì)子信號(hào)δH 7.37(1H，d，J=1.0 Hz)；1個(gè)甲基質(zhì)子信號(hào)δH 1.00(3H，s)；1個(gè)甲氧基質(zhì)子信號(hào)3.64(3H，s).13C-NMR(101 MHz，DMSO)中可以看到2個(gè)烯烴碳信號(hào)δC(112.1)、δC(150.6)；1個(gè)甲基碳信號(hào)δC(13.5)；1個(gè)甲氧基碳信號(hào)δC(51.0)；1個(gè)糖端基碳信號(hào)δC(98.6).與文獻(xiàn)[11]報(bào)道對(duì)比，數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物6為馬錢子苷.其1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)如下，1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δH：7.37(1H，d，J=1.1 Hz，H-3)，5.28(1H，d，J=4.5 Hz，H-1)，4.62(1H，d，J=7.8 Hz，H-1′)，4.01(1H，m，H-7)，3.66(3H，s，-OCH3)，3.10(1H，m，H-5)，2.21(1H，m，H-6b)，2.01(1H，m，H-9)，1.88(1H，m，H-8)，1.60(1H，m，H-6a)，1.10(3H，s，H-10).13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δC：97.5(C-1)，151.8(C-3)，114.1(C-4)，31.9(C-5)，42.8(C-6)，75.2(C-7)，42.6(C-8)，46.7(C-9)，13.5(C-10)，167.0(C-11)，100.1(C-1′)，74.6(C-2′)，78.3(C-3′)，71.5(C-4′)，78.5(C-5′)，62.6(C-6′)，51.7(—OCH3).

化合物1～6化學(xué)結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖1.

2.2 α-葡萄糖苷酶活性篩選結(jié)果

篩選結(jié)果如表1所示.化合物1～6均可具有抑制α-葡萄糖苷酶活性的作用，其中化合物3對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制表現(xiàn)最為顯著，接近于阿卡波糖.

表1 各化合物對(duì)α-葡萄糖苷酶的影響Tab.1 The influences of α-Glucosidase

3 討論

龍膽科植物富含環(huán)烯醚萜苷類成分[12]，睡菜作為龍膽科植物，同樣富含環(huán)烯醚萜苷類成分.本研究對(duì)睡菜正丁醇部位進(jìn)行針對(duì)性分離純化，得到6個(gè)環(huán)烯醚萜苷類化合物.環(huán)烯醚萜苷類成分具有降血糖、抗炎、免疫抑制等多種藥理活性[13].糖尿病是由高血糖引起的慢性代謝紊亂疾病，控制血糖是治療糖尿病的基礎(chǔ)，以天然產(chǎn)物抑制α-葡萄糖苷酶活性是調(diào)節(jié)碳水化合物代謝和高血糖的新型口服策略[14]，也是目前研究天然藥物降血糖治療的熱點(diǎn)方向，常用的α-葡萄糖苷酶抑制劑主要有阿卡波糖和伏格列波糖等.已有研究顯示山茱萸、玄參等天然藥用植物中環(huán)烯醚萜苷類化合物進(jìn)行糖尿病相關(guān)研究，指出天然藥物在防治糖尿病及其并發(fā)癥方面具有安全、有效、毒副作用小、多靶點(diǎn)、多效應(yīng)、多功能性等優(yōu)勢(shì)，環(huán)烯醚萜苷類成分對(duì)糖尿病極其并發(fā)癥的調(diào)節(jié)機(jī)制有抑制α-葡萄糖苷酶降低糖尿病血糖水平、減弱胰島β細(xì)胞損傷或改變受損的β細(xì)胞、抑制氧化應(yīng)激減輕腎臟病理性改變等[6，15-16].本實(shí)驗(yàn)對(duì)睡菜正丁醇部位進(jìn)行化學(xué)成分研究，得到6個(gè)環(huán)烯醚萜苷類化合物.為了驗(yàn)證這6個(gè)環(huán)烯醚萜苷類化合物是否具有降血糖作用，對(duì)其分別進(jìn)行了α-葡萄糖苷酶抑制活性篩選，我們對(duì)酶促反應(yīng)可能的影響因素如溫度、pH、酶濃度、終止劑濃度、水解時(shí)間等進(jìn)行嚴(yán)格把控排除外界因素干擾以保證實(shí)驗(yàn)的可靠性，最終活性篩選結(jié)果表明6個(gè)環(huán)烯醚萜苷類化合物對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制作用雖皆不及阿卡波糖，但均表現(xiàn)抑制效果.其中化合物3的抑制作用最為顯著，其IC50值為6.63±0.38，效果最為接近阿卡波糖.化合物1、2對(duì)α-葡萄糖苷酶相較化合物3效果較弱，化合物4、5、6則抑制效果更弱.上述均提示睡菜中提取的環(huán)烯醚萜苷類成分具有降血糖作用，對(duì)糖尿病具有一定的干預(yù)效果，其機(jī)制可能與抑制α-葡萄糖苷酶活性，減緩體內(nèi)糖類水解，維持體內(nèi)血糖水平有關(guān).本實(shí)驗(yàn)為研究環(huán)烯醚萜苷類成分的α-葡萄糖苷酶抑制活性提供了科學(xué)參考，同時(shí)也提供了防治糖尿病及并發(fā)癥的天然藥物研究素材，也為完善睡菜藥理活性方面提供了糖尿病研究基礎(chǔ).

圖1 睡菜中化合物的結(jié)構(gòu)式Fig.1 Chemical constituents from Menyanthes trifoliate L．