腦梗死病人血清VCAM-1、TRAF6表達(dá)及臨床意義

杜秀民，陳 衛(wèi)

腦梗死是臨床常見(jiàn)的、一種由于腦動(dòng)脈粥樣硬化引起的腦血管性疾病，病人常有言語(yǔ)不清、眼歪口斜、上下肢麻木無(wú)力等臨床表現(xiàn)[1]。近年來(lái)腦梗死研究取得了較大進(jìn)步，但急性發(fā)作期仍有死亡的危險(xiǎn)。因此，尋求新型危險(xiǎn)標(biāo)志物有助于鑒別診斷及診斷腦梗死并提供個(gè)性化治療，并為揭示腦梗死的發(fā)病機(jī)制提供理論基礎(chǔ)。動(dòng)脈粥樣硬化是腦梗死的發(fā)病機(jī)制之一，斑塊生長(zhǎng)過(guò)程中常伴隨新生血管生成，且新生血管具有滲透性高、脆弱等特性，炎性因子易侵襲加重斑塊炎性反應(yīng)。血管細(xì)胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1，VCAM-1)屬于免疫球蛋白超家族，主要表達(dá)于血管內(nèi)皮細(xì)胞，參與炎癥反應(yīng)、免疫應(yīng)答[2]，推測(cè)其可能在腦梗死進(jìn)程中發(fā)揮作用。有研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6(tumor necrosis factor receptor-associated factor 6，TRAF6)在調(diào)控細(xì)胞分化、細(xì)胞功能等方面發(fā)揮重要作用，且TRAF6與下游分子在細(xì)胞內(nèi)作用后引起核因子(NF)-κB活化進(jìn)而誘導(dǎo)免疫與炎癥反應(yīng)[3-4]。目前，關(guān)于VCAM-1、TRAF6在腦梗死中的作用報(bào)道較少，本研究分析腦梗死病人血清VCAM-1、TRAF6表達(dá)水平，探討二者對(duì)腦梗死發(fā)病的診斷價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年6月—2019年6月我院收治的腦梗死病人94例為腦梗死組，根據(jù)卒中量表(CCS)對(duì)神經(jīng)功能缺損進(jìn)行評(píng)分，CCS評(píng)分0～15分為輕度組(29例)，CCS評(píng)分16～30分為中度組(34例)，CCS評(píng)分31～45分為重度組(31例)。參照全國(guó)第4次腦血管病學(xué)術(shù)會(huì)議修訂的診斷標(biāo)準(zhǔn)，腦梗死診斷標(biāo)準(zhǔn)：安靜狀態(tài)下發(fā)??；多數(shù)病人無(wú)明顯嘔吐和頭痛；發(fā)病較緩慢，呈逐漸發(fā)展或階段性進(jìn)行，多與腦動(dòng)脈粥樣硬化有關(guān)，也可見(jiàn)于動(dòng)脈炎、血液病等；病人在發(fā)病1～2周內(nèi)意識(shí)清楚或輕度障礙；存在頸內(nèi)動(dòng)脈系統(tǒng)和椎基底動(dòng)脈系統(tǒng)癥狀和體征；腰椎穿刺腦脊液一般不含血；CT、MRI或血管造影檢查可見(jiàn)腦梗死栓塞部位[5]。納入標(biāo)準(zhǔn)：確診為腦梗死病人；年齡50～80歲；病程<48 h；同意參與本研究，并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并心、肝、腎等臟器疾??；合并惡性腫瘤；合并甲狀腺功能異常；合并自身免疫性疾病；近1個(gè)月內(nèi)服用過(guò)維生素、葉酸、他汀類藥物及抗癲癇類藥物。另選取同期的體檢健康者89名為對(duì)照組。本研究經(jīng)醫(yī)院道德倫理委員會(huì)批準(zhǔn)通過(guò)，且取得病人及家屬知情同意并簽字，符合世界醫(yī)學(xué)協(xié)會(huì)《赫爾辛基宣言》。

1.2 主要試劑與儀器 人血管內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子1(sVCAM-1/CD106)酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)試劑盒(貨號(hào)：EK-H11897)購(gòu)自上海酶研生物科技有限公司；人TRAF6 ELISA試劑盒(貨號(hào)：BH7679)購(gòu)自上海博耀生物科技有限公司；酶標(biāo)儀(型號(hào)：MODEL550)購(gòu)自美國(guó)Bio-Rad公司。

1.3 研究方法

1.3.1 樣品采集及保存 采集所有研究對(duì)象晨起空腹外周靜脈血5 mL，以4 000 r/min離心10 min，取上層血清置入EP管中，置于-20 ℃冰箱中備用。

1.3.2 血清VCAM-1、TRAF6水平 采用ELISA法檢測(cè)各組研究對(duì)象血清VCAM-1、TRAF6水平，檢測(cè)步驟嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。

2 結(jié) 果

2.1 對(duì)照組和腦梗死組一般資料比較 腦梗死組與對(duì)照組性別、年齡、身高及體質(zhì)指數(shù)比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。詳見(jiàn)表1。

表1 對(duì)照組和腦梗死組一般資料比較

2.2 對(duì)照組和腦梗死組血清VCAM-1、TRAF6水平比較 與對(duì)照組比較，腦梗死組血清VCAM-1、TRAF6水平均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。詳見(jiàn)表2。

表2 對(duì)照組和腦梗死組血清VCAM-1、TRAF6水平比較(±s) 單位：μg/mL

2.3 輕度組、中度組、重度組腦梗死病人血清VCAM-1、TRAF6水平比較 重度組腦梗死病人血清VCAM-1、TRAF6水平高于中度組和輕度組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；中度組腦梗死病人血清VCAM-1、TRAF6水平高于輕度組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。詳見(jiàn)表3。

表3 輕度組、中度組、重度組血清VCAM-1、TRAF6水平比較(±s) 單位：μg/mL

2.4 血清VCAM-1、TRAF6水平預(yù)測(cè)腦梗死的臨床價(jià)值 ROC曲線分析結(jié)果顯示：血清VCAM-1水平預(yù)測(cè)

腦梗死臨床價(jià)值的曲線下面積(area under curve，AUC)為0.834[95%CI(0.774，0.893)]，截?cái)嘀禐?3.439 μg/mL，靈敏度為67.0%，特異度為89.9%；血清TRAF6水平預(yù)測(cè)腦梗死臨床價(jià)值的AUC為0.862[95%CI(0.802，0.921)]，截?cái)嘀禐?.060 μg/mL，靈敏度為71.3%，特異度為98.9%。詳見(jiàn)圖1。

圖1 血清VCAM-1、TRAF6預(yù)測(cè)腦梗死的ROC曲線圖

2.5 血清VCAM-1聯(lián)合TRAF6預(yù)測(cè)腦梗死的臨床價(jià)值 ROC曲線分析結(jié)果顯示：血清VCAM-1與TRAF6聯(lián)合診斷腦梗死的AUC為0.906[95%CI(0.859，0.953)]，靈敏度85.1%，特異度為91.0%，聯(lián)合截?cái)嘀涤写M(jìn)一步研究。詳見(jiàn)圖2。

圖2 血清VCAM-1聯(lián)合TRAF6預(yù)測(cè)腦梗死的ROC曲線圖

3 討 論

腦動(dòng)脈主干或皮質(zhì)主動(dòng)脈粥樣硬化導(dǎo)致血管增厚、管腔狹窄閉塞和微血栓形成，從而誘發(fā)腦梗死[6]。腦梗死是多種因素共同作用的結(jié)果，多數(shù)表現(xiàn)為四肢無(wú)力、頭暈、頭痛等[7]。

VCAM-1是位于細(xì)胞膜上的糖蛋白，又稱CD106，受致炎因子刺激其表達(dá)量增加，可介導(dǎo)淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞黏附，在炎癥反應(yīng)、細(xì)胞分化、動(dòng)脈粥樣硬化等多種疾病中發(fā)揮重要作用[8]。有研究表明，VCAM-1可能通過(guò)與單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等炎性細(xì)胞的配體VLA-4結(jié)合，從而介導(dǎo)炎性細(xì)胞黏附，引發(fā)炎癥反應(yīng)，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化形成[9]。王愛(ài)岳[9]研究發(fā)現(xiàn)，缺血性腦卒中病人外周血VCAM-1水平明顯高于健康對(duì)照組，VCAM-1水平與缺血性腦卒中進(jìn)展密切相關(guān)。曹曉雨等[10]研究發(fā)現(xiàn)，缺血性腦卒中組sVCAM-1水平高于非缺血性腦卒中組，sVCAM-1單獨(dú)預(yù)測(cè)短暫性腦缺血發(fā)作后短期發(fā)生缺血性腦卒中的AUC為0.875，截?cái)嘀禐?82.7 μmol/L，靈敏度、特異度分別為84.0%、87.3%，表明缺血性腦卒中病人外周血sVCAM-1高表達(dá)，且具有較好的診斷價(jià)值。吳巖等[11]研究發(fā)現(xiàn)，腦梗死病人發(fā)病24 h時(shí)外周血sVCAM-1水平明顯高于健康對(duì)照組。本研究結(jié)果與吳巖等[11]研究結(jié)果一致，腦梗死組病人血清VCAM-1水平顯著高于對(duì)照組，重度組腦梗死病人血清VCAM-1水平高于中度組和輕度組，中度組腦梗死病人血清VCAM-1水平高于輕度組，表明腦梗死病人血清VCAM-1呈高表達(dá)，且疾病越嚴(yán)重其表達(dá)量越高，提示VCAM-1可能在腦梗死發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，血清VCAM-1水平預(yù)測(cè)腦梗死的診斷價(jià)值A(chǔ)UC為0.834，截?cái)嘀禐?3.439 μg/mL，靈敏度、特異度分別為67.0%、89.9%，提示血清VCAM-1水平對(duì)預(yù)測(cè)腦梗死有一定的診斷價(jià)值。

TRAF6是1996年Ishida等[12]研究CD40信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)時(shí)發(fā)現(xiàn)，由530個(gè)氨基酸組成。有研究表明，TRAF6作為TNFR超家族、白細(xì)胞介素-1受體/Toll樣受體(interleukin-1 receptor/toll like receptor，IL-1R/TLR)超家族的信號(hào)通路轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白，參與多條炎癥反應(yīng)和凋亡信號(hào)通路[13]。TRAF6參與多種腫瘤及惡性疾病的發(fā)生。章國(guó)良等[14]研究發(fā)現(xiàn)，胃癌病人血清TRAF6蛋白的相對(duì)表達(dá)量高于腹腔良性疾病病人。姜華[15]研究發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組兔相比，動(dòng)脈粥樣硬化模型組兔血清TLR4、TRAF6水平升高，使用血府逐瘀湯含藥干預(yù)后可顯著抑制血清TLR4、TRAF6蛋白表達(dá)，改善損傷程度，提示抑制Toll樣受體4及TRAF6表達(dá)，可能減輕動(dòng)脈粥樣硬化損傷。袁平等[16]研究發(fā)現(xiàn)，與假手術(shù)組大鼠相比，缺血組和缺血再灌注組TRAF6表達(dá)明顯升高，大鼠缺血再灌注損傷時(shí)TRAF6可能參與腦細(xì)胞死亡。本研究結(jié)果顯示，腦梗死組病人血清TRAF6水平較對(duì)照組升高；輕度組、中度組、重度組腦梗死病人血清TRAF6水平逐漸升高。提示腦梗死病人血清TRAF6呈高表達(dá)，與腦梗死嚴(yán)重程度有關(guān)，提示TRAF6可能參與腦梗死發(fā)生。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，血清TRAF6水平預(yù)測(cè)腦梗死診斷的AUC為0.862，截?cái)嘀禐?.060 μg/mL，靈敏度、特異度分別為71.3%、98.9%，提示血清TRAF6水平對(duì)預(yù)測(cè)腦梗死有一定的診斷價(jià)值。本研究進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，VCAM-1、TRAF6二者聯(lián)合對(duì)腦梗死診斷的AUC為0.906，靈敏度、特異度分別為85.1%、91.0%，提示二者聯(lián)合較單獨(dú)預(yù)測(cè)有較高的診斷價(jià)值。

綜上所述，腦梗死病人血清VCAM-1、TRAF6呈高表達(dá)，可能參與腦梗死疾病發(fā)展過(guò)程，二者聯(lián)合對(duì)腦梗死有一定的診斷價(jià)值，可能成為預(yù)測(cè)腦梗死的重要指標(biāo)。由于本研究樣本量有限，今后將擴(kuò)大樣本量進(jìn)行深入研究。