4 ℃低溫處理的自體脂肪對顳額部填充效果的效果分析

郭榮 邵星星 王穎 羅莎 陳歡 張倩 肖曼娜 王芳 余墨聲

隨著年齡的增長，皮膚會(huì)漸漸衰老并因失去水分而逐漸松弛下垂，甚至引起面部的局部凹陷[1]。移植填充自體脂肪顆粒可重新?lián)碛心贻p的容顏，但在自體脂肪移植過程中，即使多次填充常常因?yàn)樽泽w脂肪的成活率低下填充效果仍不理想。有效提高自體脂肪的成活率，減少并發(fā)癥的發(fā)生是臨床關(guān)注的重點(diǎn)。有研究表明，4 ℃低溫處理的脂肪細(xì)胞在耐受缺氧性損傷以及在移植于裸鼠后成活率方面，都表現(xiàn)出良好的實(shí)驗(yàn)效果[2-4]。我們采用4 ℃低溫處理的自體脂肪顆粒細(xì)胞移植填充額顳部，觀察脂肪顆粒細(xì)胞的填充效果及美容者滿意度。

對象與方法

一、對象

2018年1月～2019年4月，自愿接受額顳部自體脂肪顆粒移植填充的女性美容者100例，年齡21～32歲，均無明顯重要臟器及精神疾病史，亦無明顯顏面部凹陷填充術(shù)禁忌證。采用數(shù)字表法將美容者隨機(jī)分為兩組：常溫組50例，將抽取的自體脂肪用常溫生理鹽水洗滌純化并常溫保存；低溫組50例，將抽取的自體脂肪用4 ℃低溫生理鹽水洗滌純化并低溫保存。兩組美容者在術(shù)后1、3、6 個(gè)月時(shí)面訪。本研究經(jīng)我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

二、方法

1.自體脂肪顆粒獲取及純化：選取美容者大腿內(nèi)側(cè)或外側(cè)處為吸脂區(qū)并根據(jù)擬采集脂肪量標(biāo)記手術(shù)區(qū)域。對吸脂區(qū)進(jìn)行消毒鋪單，靜脈全麻下常規(guī)行局部腫脹麻醉，待局部腫脹麻醉完善后再以20 ml注射器連接針管直徑3.0 mm、側(cè)孔直徑1 mm且2開孔吸脂針對皮下脂肪進(jìn)行人工手動(dòng)吸取脂肪，脂肪吸取量根據(jù)美容者所需移植總量事先評估。常溫組(常溫組)將上述抽取的脂肪與等量的常溫生理鹽水混勻靜置后在普通常溫離心機(jī)以1 000 r/min 離心3分鐘，去除上層的油脂和下層的液體部分，提取的中間層脂肪細(xì)胞再與等量的常溫生理鹽水混勻、離心，再次提取中間層的脂肪細(xì)胞，如此洗滌離心3次后，把收集的脂肪細(xì)胞分裝于10 ml注射器并放置于常溫生理鹽水中保存?zhèn)溆?。低溫組獲取脂肪細(xì)胞的方法和常溫組類似，但洗滌用水為4 ℃生理鹽水及用低溫離心機(jī)(4 ℃)離心，收集的脂肪細(xì)胞放置于4 ℃生理鹽水中低溫保存?zhèn)溆?。上述所有操作均在無菌環(huán)境中進(jìn)行。

2.自體脂肪顆粒移植：對需脂肪移植注射部位標(biāo)記消毒鋪單，所有美容者均在靜脈麻醉下在標(biāo)記區(qū)域較為隱蔽部位(顳部發(fā)際線后面)用20G針頭做穿刺孔，選擇直徑1.4 mm單孔鈍頭注脂針，自上往下、從淺往深采取多注射點(diǎn)、多角度、多層次、少量脂肪注射，在注射時(shí)邊注射邊退針邊塑形，適當(dāng)輕柔按摩注射部位，保證脂肪顆粒能夠均勻分布，不引起局部明顯隆起為標(biāo)準(zhǔn)，以免注射量過大導(dǎo)致面部腫脹變形[5]。術(shù)后24小時(shí)內(nèi)間斷冷敷填充區(qū)，以減輕局部水腫。

3.評價(jià)指標(biāo):(1) 醫(yī)師對修復(fù)的滿意度：非常滿意：美容者的凹陷區(qū)得到矯正，臉部輪廓自然，填充區(qū)飽滿柔和，且無不良反應(yīng)；一般滿意：凹陷區(qū)得到矯正，臉部輪廓和表情較為自然，不良反應(yīng)較少；不滿意：凹陷區(qū)改善不明顯，且發(fā)生嚴(yán)重不良反應(yīng)?？倽M意率=(非常滿意+一般滿意)/例數(shù)×100%[6]。(2)美容者對修復(fù)的滿意度：移植后6個(gè)月，通過問診的形式統(tǒng)計(jì)美容者對面部修復(fù)術(shù)的滿意度。滿意度評分為0～10分，10分為最滿意，0分為最不滿意，評分等于或超過6分為滿意，評分低于6分為不滿意。(3)其他評價(jià)指標(biāo)：記錄美容者額顳部紅腫消退時(shí)間、并發(fā)癥人數(shù)(包括感染、囊腫、硬結(jié)等)以及術(shù)后6個(gè)月累計(jì)2次填充人數(shù)。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

結(jié)果

1.醫(yī)師對修復(fù)的滿意情況:自體脂肪填充后，隨著時(shí)間的延長，醫(yī)師對兩組美容者不同時(shí)間總滿意率逐漸降低。常溫組1、3、6 個(gè)月分別為100%、94%和86%；低溫組分別為100%、98%和94%。但總滿意率兩組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 醫(yī)師對修復(fù)的滿意情況(例，%)

2.美容者對修復(fù)的滿意度評分見表2。術(shù)后6個(gè)月時(shí)常溫組美容者不滿意例數(shù)較術(shù)后1個(gè)月時(shí)多，且多于同時(shí)期低溫組例數(shù)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；低溫組美容者自體脂肪填充后，不滿意人數(shù)均較少，組內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表2 美容者對修復(fù)的滿意度評分(例，%)

3.其他評價(jià)指標(biāo)見表3。常溫組美容者紅腫消退時(shí)間較低溫組長，常溫組要求二次填充的人數(shù)較低溫組多,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，兩組術(shù)后發(fā)生并發(fā)癥人數(shù)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表3 兩組美容者術(shù)后其他評價(jià)指標(biāo)

討論

隨著年齡的不斷增長，面部將逐漸出現(xiàn)萎縮、凹陷、皺紋、松弛等現(xiàn)象，主要是因?yàn)槊娌恐窘M織不斷減少、老化以及深層軟組織結(jié)構(gòu)松弛下垂，皮膚彈力纖維漸漸減少、變粗等引起，自體脂肪填充使美容者面部的皺紋和凹陷部位均得到有效矯正，且移植后面部的形態(tài)和質(zhì)感自然，是改善面部容貌，恢復(fù)皮膚視覺年輕化的一種有效方法[7]。

有研究表明，在添加或不添加冷凍保護(hù)劑的情況下，將脂肪細(xì)胞經(jīng)梯度低溫即使凍存于-80 ℃長達(dá)6個(gè)月，仍有脂肪顆粒細(xì)胞存活，解凍移植于生物體后有新生血管生成，并能達(dá)到較滿意的填充效果[2-4，8]。抽取的脂肪顆粒細(xì)胞在室溫下保存1小時(shí)脂肪細(xì)胞膜破壞率為(33.0±2.5)%，室溫保存5小時(shí)脂肪細(xì)胞膜破壞率已高達(dá)為(70.0±3.5)%，此時(shí)已不再適合用于做自體脂肪移植，但4 ℃保存3小時(shí)脂肪細(xì)胞膜破壞率仍較低[(9.7±1.8)%]，4 ℃保存24小時(shí)脂肪細(xì)胞膜破壞率也僅為(20.0±2.6)%；同時(shí)檢測不同保存溫度及不同保存時(shí)間脂肪細(xì)胞GAPDH的活性說明，室溫下保存3小時(shí)的脂肪細(xì)胞活性值已較低，但4 ℃保存3小時(shí)的脂肪細(xì)胞仍能保持著原有活性，說明在4 ℃低溫下采集的脂肪細(xì)胞其細(xì)胞膜的完整性能保持在更佳狀態(tài)，同時(shí)脂肪細(xì)胞的活性也較高。在ADSCs的提取效率及增殖能力方面，室溫下保存3小時(shí)后脂肪細(xì)胞其細(xì)胞增殖活性值已很低，而4 ℃環(huán)境中保存時(shí)間較短的脂肪細(xì)胞其ADSCs增殖能力較好，即使保存24小時(shí)其所提取的ADSCs在提取效率及增殖能力方面亦能與室溫保存1小時(shí)相似，該實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在4 ℃環(huán)境中采集、處理的體外脂肪顆?？梢员ＷC其在24小時(shí)內(nèi)保持著絕大部分的增殖活性，進(jìn)一步提示在脂肪細(xì)胞采集、處理及轉(zhuǎn)運(yùn)的各個(gè)環(huán)節(jié)中都應(yīng)盡力在低溫下進(jìn)行[9]。

有研究表明，移植前熱缺血時(shí)間長短對移植物的存活時(shí)間以及移植物功能的恢復(fù)有明顯影響[10-11]，縮短移植物熱缺血時(shí)間是移植手術(shù)追求的目標(biāo)之一。移植前對抽取的脂肪細(xì)胞在低溫下進(jìn)行洗滌純化操作，降低熱缺血時(shí)間，降低脂肪細(xì)胞的代謝率和耗氧量，有利于保存細(xì)胞活性，對脂肪細(xì)胞的成活率有顯著的提高，同時(shí)，術(shù)后冰敷也可以降低局部組織水腫和脂肪細(xì)胞的代謝率，從而有利于移植的脂肪細(xì)胞在血供尚未建立的情況下，能適應(yīng)營養(yǎng)匱乏的惡劣環(huán)境，存活的更多。

本研究中，脂肪細(xì)胞被提取后，立即與4 ℃冰鹽水混合，以降低脂肪細(xì)胞的溫度，起到低溫保護(hù)作用，在洗滌純化脂肪細(xì)胞的全程操作過程中亦均在4 ℃低溫中進(jìn)行，脂肪細(xì)胞移植后，額顳部皮膚給予局部冰敷以降低溫度，也有利于脂肪細(xì)胞能緩慢恢復(fù)活力，避免了急速低溫、急速高溫的不良影響。