自毒物質(zhì)對(duì)羥基苯甲酸降解細(xì)菌ZH2的分離與應(yīng)用

肖蓉 鄧舒 趙菁 張春芬 聶園軍 曹秋芬

摘要：自毒物質(zhì)是造成植物連作障礙的主要因子，研究旨在篩選能夠降解土壤中自毒物質(zhì)的細(xì)菌。采用選擇性分離方法從土壤中篩選自毒物質(zhì)對(duì)羥基苯甲酸降解菌；結(jié)合形態(tài)特征、生理生化特征和16S rRNA測(cè)序鑒定菌種；采用紫外分光光度法測(cè)定菌株降解對(duì)羥基苯甲酸能力，并通過盆栽實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證解毒效果。結(jié)果表明，分離到1株有降解對(duì)羥基苯甲酸能力的菌株，編號(hào)ZH2，經(jīng)鑒定為綠針假單胞菌（Pseudomonas chlororaphis）。在純培養(yǎng)條件下，當(dāng)對(duì)羥基苯甲酸濃度為5 mg/mL時(shí)，ZH2能在培養(yǎng)72 h時(shí)將其降解97%。盆栽條件下，當(dāng)基質(zhì)中對(duì)羥基苯甲酸濃度為10 mg/g時(shí)，ZH2能有效緩解對(duì)羥基苯甲酸對(duì)黃瓜的生長(zhǎng)抑制作用。該研究從土壤中分離到能夠降解對(duì)羥基苯甲酸的綠針假單胞菌，具有應(yīng)用于連作障礙防控的潛在價(jià)值。

關(guān)鍵詞：對(duì)羥基苯甲酸；自毒物質(zhì)；綠針假單胞菌；連作障礙；降解

中圖分類號(hào)：S60文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A論文編號(hào)：cjas2020-0115

An Autotoxicity p-Hydroxybenzoic Acid-degrading Strain ZH2： Isolation and Application

Xiao Rong1， Deng Shu1， Zhao Jing2， Zhang Chunfen1，Nie Yuanjun3， Cao Qiufen2（1Pomology Institute， Shanxi Agricultural University， Taiyuan 030031， Shanxi， China； 2College of Life Sciences， Shanxi Agricultural University， Taiyuan 030031， Shanxi， China； 3College of Economics and Management， Shanxi Agricultural University， Taiyuan 030031， Shanxi， China）

Abstract： Autotoxicity is the main factor causing obstacles to continuous cropping plants. The aim of the study is to screen bacteria from soil which can degrade autotoxicity. A selective screening method was used to screen p-Hydroxybenzoic acid （PHBA） degradation bacterium. Bacterial species were identified by combining the morphological characteristics， physiological and biochemical characteristics and 16S rRNA sequencing results. The ability of the strain to degrade PHBA was determined by ultraviolet spectrophotometry. The effect of detoxification was verified by a pot experiment of cucumber. The results showed that one degradation strain（No. ZH2） was isolated and identified as Pseudomonas chlororaphis. On the condition of pure culture， ZH2 could degrade 97% at 72 h under 5 mg/mL PHBA concentration. In potted conditions， when the concentration of PHBA in the substrate was 10 mg/g， ZH2 could effectively alleviate the growth inhibition of PHBA on cucumber. We report a Pseudomonas chlororaphis strain screened from soil can degrade PHBA， it has the potential value of controlling continuous cropping obstacles.

Keywords： p-Hydroxybenzoic Acid； Autotoxicity； Pseudomonas chlororaphis； Continuous Cropping Obstacle； Degradation

0引言

化感作用（allelopathy）是指植物向環(huán)境釋放某些化學(xué)物質(zhì)而影響自身或其他植物生長(zhǎng)發(fā)育的化學(xué)生態(tài)學(xué)現(xiàn)象。一些化感物質(zhì)能對(duì)下茬同種/科植物生長(zhǎng)產(chǎn)生抑制作用，因此也被稱為自毒物質(zhì)（autotoxicity）[1-2]。大量研究已經(jīng)證實(shí)，對(duì)于大棚常見的蔬菜、瓜果來說，酚酸類物質(zhì)是占比最大的自毒物質(zhì)[3-7]，其中對(duì)羥基苯甲酸（p-Hydroxybenzoic acid，PHBA）在草莓和黃瓜根系分泌物中占比最大，毒性很強(qiáng)[8-10]。

在自然界中存在多種對(duì)酚酸類物質(zhì)有降解作用的菌株，利用它們來降低農(nóng)作環(huán)境中自毒物質(zhì)的含量，是一條安全環(huán)保的途徑。祁國振等[11]從蘋果根際土壤中篩選到5株對(duì)蘋果根際自毒物質(zhì)焦性沒食子酸、鄰苯二甲酸、根皮苷以及對(duì)羥基苯甲酸有降解能力的菌株；黃園勇等[12]從根際土中分離到29株對(duì)蘋果根皮苷有降解功能的放線菌；毛寧[13]也獲得了2株能夠降解土壤中草莓自毒物質(zhì)對(duì)羥基苯甲酸和苯甲酸的放線菌；王曉輝等[14]從秦嶺土及西北極端生境中篩選到24株能夠降解西瓜自毒物質(zhì)阿魏酸的放線菌；另外還有能夠降解西瓜自毒物質(zhì)肉桂酸的微小桿菌（Exiguobacterium sp.）、能夠降解花生根際自毒物苯甲酸的枯草芽孢桿菌（Bacillussubtilis）、吸水鏈霉菌（Streptomyces hygroscopicus）、耐堿納西桿菌（Naxibacter alkalitolerans）[15-16]。盡管前人們已報(bào)道了這么多有降解效果的菌株，但大多數(shù)都還處于室內(nèi)研究狀態(tài)，而且由于大田環(huán)境的復(fù)雜性和多樣性，每株菌有其自己的最適生長(zhǎng)條件，其在實(shí)際使用中的修復(fù)效果也不同，因此繼續(xù)篩選自毒物質(zhì)降解菌仍然十分重要。

本研究從土壤中篩選能夠降解自毒物質(zhì)對(duì)羥基苯甲酸的菌株，通過形態(tài)學(xué)特征、16S rRNA基因序列分析和生理生化特征對(duì)其進(jìn)行鑒定，并對(duì)其在純培養(yǎng)條件下的對(duì)羥基苯甲酸降解效率、溫室盆栽條件下的毒害緩解效果進(jìn)行探究，為將該菌株開發(fā)成重茬土壤生物修復(fù)劑提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

土壤樣品采自山西太原陽曲縣（38°03′33.58″N，112°40′22.51″E）大棚草莓、黃瓜根際和重慶市忠縣某竹林（30°18′5.07″N，108°02′15.61″E）3種生境。供試黃瓜品種名為：‘新四號(hào)’，山東泰安華益種業(yè)有限公司。

對(duì)羥基苯甲酸、硫酸銨、七水硫酸鎂、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鉀、氯化鈣、氯化鈉、蛋白胨、酵母粉均為分析純?cè)噭?，購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒：北京Tiangen公司；PCR引物（27F和 1492R）由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。引物序列為：27F：AGAGTTTGATCCTGGCTCAG和1492R：TACGGCTACCTTGTTACGACTT。盆栽基質(zhì)為莘縣魯源育苗基質(zhì)有限公司市售成品基質(zhì)。

所用儀器：恒溫水浴搖床（HH-2J），金壇市杰瑞爾電器有限公司；光照培養(yǎng)箱（MLR-350），SANYO；掃描電鏡（日本電子，JSM-IT300LA）；紫外/可見分光光度計(jì)，eppendorf。

培養(yǎng)基：無機(jī)鹽基礎(chǔ)培養(yǎng)基：硫酸銨2 g/L，七水硫酸鎂0.2 g/L，磷酸二氫鈉0.5 g/L，磷酸氫二鉀0.5 g/L，氯化鈣0.1 g/L，pH 7.2。在無機(jī)鹽基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加3 mg/mL對(duì)羥基苯甲酸即為選擇性培養(yǎng)基；LB培養(yǎng)基：蛋白胨10 g/L，酵母粉5 g/L，氯化鈉10 g/L，pH 7.2[17]。試驗(yàn)于2017—2019年在山西農(nóng)業(yè)大學(xué)果樹研究所和山西農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院（龍城校區(qū)）進(jìn)行。

1.2方法

1.2.1對(duì)羥基苯甲酸降解菌的選擇性分離稱取5 g新鮮土樣，置于50 mL液體選擇性培養(yǎng)基中，于30℃，180 r/min條件下恒溫?fù)u床振蕩培養(yǎng)。一周后取1 mL培養(yǎng)液用無菌水梯度稀釋，分別取10-6、10-7、10-8濃度的稀釋液0.2 mL均勻涂布在固體選擇性培養(yǎng)基上，30℃，黑暗條件倒置培養(yǎng)。7天后，挑取較大的菌落，在新的固體選擇性培養(yǎng)基平板上劃線培養(yǎng)，以獲得純菌株。純菌株保存在LB固體培養(yǎng)基上，供后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

1.2.2菌株鑒定參考《常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)》[18]方法進(jìn)行生理生化鑒定。菌株的分子鑒定參考[19]。將菌株的16S rRNA序列同時(shí)提交至NCBI和EzBiocloud[20]中進(jìn)行比對(duì)，采用MEGA10.1軟件對(duì)菌株序列及相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)菌株序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹（最大簡(jiǎn)約法，bootstrap值：1000）。按謝家儀[21]所述方法制備樣品，在掃描電鏡下觀察菌株形態(tài)。

1.2.3菌株的對(duì)羥基苯甲酸耐受能力及降解能力用1.1中無機(jī)鹽基礎(chǔ)培養(yǎng)液配制對(duì)羥基苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)液，濃度分別為：0、0.002、0.004、0.006、0.008、0.01 mg/mL，在波長(zhǎng)255 nm下測(cè)定吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。取新鮮過夜培養(yǎng)的菌液，于4℃，5000 r/min條件下離心5 min，棄上清，用無菌水將菌體重懸至OD600為1（菌體數(shù)目約為2×108cfu/mL），將重懸液按2%的體積比接種到25 mL新鮮的含對(duì)羥基苯甲酸無機(jī)鹽基礎(chǔ)培養(yǎng)液中。對(duì)羥基苯甲酸濃度分別為0.1 mg/mL、1 mg/mL和5 mg/mL。接種后于30℃，180 r/min恒溫?fù)u床中震蕩培養(yǎng)。分別于培養(yǎng)4、12、24、36、48、60、72、84、96 h取樣。一部分樣品用于測(cè)定OD600，另一部分樣品用于測(cè)定PHBA殘留量。

將1mL菌液樣品加入到無菌離心管中，10000r/min，室溫條件離心5 min后，取0.2 mL上清液以不加對(duì)羥基苯甲酸的無機(jī)鹽基礎(chǔ)培養(yǎng)液作參比，在波長(zhǎng)255 nm下測(cè)定吸光度。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算培養(yǎng)液中的對(duì)羥基苯甲酸殘留量。按公式（1）計(jì)算降解率。Xt指取樣時(shí)間為t時(shí)的PHBA降解率；C0指初始PHBA含量；Ct指取樣時(shí)間為t時(shí)的PHBA含量。

1.2.4菌株緩解對(duì)羥基苯甲酸對(duì)盆栽黃瓜的毒害先將菌株接種到LB培養(yǎng)基里過夜培養(yǎng)，然后于5000 r/min，4℃條件下離心5 min，收集菌體用無菌水重懸至OD600為1即為拌土用菌液。黃瓜種子于55℃溫水中浸種10 min后置于28～30℃培養(yǎng)箱中保濕催芽，然后播種于育苗缽中培養(yǎng)。待幼苗長(zhǎng)到兩葉一心時(shí)選擇大小一致的幼苗移栽到10×10×8 cm規(guī)格的塑料營(yíng)養(yǎng)缽中，每缽裝滅菌基質(zhì)40 g，基質(zhì)按表1進(jìn)行拌土處理（對(duì)羥基苯甲酸先溶解到20 mL水里再均勻拌到基質(zhì)里）；每盆移栽一株，每處理重復(fù)9盆。將營(yíng)養(yǎng)缽置于光照培養(yǎng)箱（25℃光照18 h，20℃黑暗6 h）。當(dāng)黃瓜進(jìn)入初花期后結(jié)束實(shí)驗(yàn)，每個(gè)處理隨機(jī)選取5棵植株進(jìn)行各指標(biāo)的測(cè)定。用皮尺測(cè)定株高（根基到生長(zhǎng)點(diǎn)的長(zhǎng)度），游標(biāo)卡尺測(cè)定莖粗（子葉基部下胚軸處的直徑），用直尺測(cè)定最大葉片的長(zhǎng)a（葉片基部到葉尖的長(zhǎng)度）和寬b（葉片上部肩寬距離），根據(jù)公式（2）計(jì)算葉面積[22]。

2結(jié)果與分析

2.1對(duì)羥基苯甲酸降解菌的選擇性分離與鑒定

通過選擇性培養(yǎng)基富集培養(yǎng)后從土壤中篩選到1株能以對(duì)羥基苯甲酸為唯一碳源生長(zhǎng)的細(xì)菌，命名為ZH2。該菌株在LB固體培養(yǎng)基上菌落呈圓形，紅色，有光澤，表面濕潤(rùn)，不透明，培養(yǎng)24 h時(shí)直徑1～1.5 mm（圖1A、B），培養(yǎng)48 h可見橙色色素，并很快擴(kuò)散到培養(yǎng)基里（圖1C），培養(yǎng)一周后，菌落發(fā)粘。在掃描電鏡下觀察ZH2細(xì)胞形態(tài)（圖1D），發(fā)現(xiàn)該菌菌體長(zhǎng)約0.3～ 1.0μm，呈桿狀，單個(gè)生長(zhǎng)，一端鈍圓，一端稍尖。ZH2部分生理生化特征見表2。

將ZH2菌16S rRNA序列（GenBank Accession No. MT410466）分別輸入到EZbiocloud和NCBI數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行序列比對(duì)（表3），結(jié)果表明，在2個(gè)數(shù)據(jù)庫中ZH2都?xì)w屬于綠針假單胞菌（Pseudomonas chlororaphis），但在亞種歸屬上存在分歧。從EZbiocloud中獲取相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)菌株序列構(gòu)建ZH2的系統(tǒng)發(fā)育樹（圖2），可見ZH2與P. chlororaphis subsp. Aurantiaca和P. chlororaphis subsp. aureofaciens聚在同一個(gè)分支上，需結(jié)合其他方法確定ZH2的亞種地位。目前，該菌株已經(jīng)在中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏，保藏編號(hào)為CGMCC No：14461。

2.2菌株的對(duì)羥基苯甲酸耐受能力及降解能力

根據(jù)不同濃度對(duì)羥基苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)液對(duì)應(yīng)的吸光度值做出標(biāo)準(zhǔn)曲線，擬合的方程式為：C（A） = 0.0155×A+ 0.0002。R2值為0.9988。

將ZH2培養(yǎng)在以不同濃度對(duì)羥基苯甲酸為唯一碳源的培養(yǎng)基中，其生長(zhǎng)曲線和培養(yǎng)基中對(duì)羥基苯甲酸降解率見圖3?？梢?，在對(duì)羥基苯甲酸濃度很低時(shí)（0.1 mg/mL，圖3A），剛培養(yǎng)4 h，培養(yǎng)基中的對(duì)羥基苯甲酸已經(jīng)被降解了80%，培養(yǎng)12 h時(shí)，對(duì)羥基苯甲酸被降解了97%，初始碳源幾乎消耗殆盡。從生長(zhǎng)曲線來看，OD600值出現(xiàn)增長(zhǎng)，但直到培養(yǎng)96 h時(shí)，OD值最高僅為0.293，說明由于體系中碳源濃度太低，ZH2并未大規(guī)模增殖。

當(dāng)對(duì)羥基苯甲酸濃度增大至1 mg/mL時(shí)（圖3B），ZH2生長(zhǎng)曲線表現(xiàn)出明顯的延緩期、對(duì)數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期。由于碳源相對(duì)充足，體系中ZH2在培養(yǎng)12h后出現(xiàn)明顯增殖，進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，當(dāng)培養(yǎng)至24 h時(shí)，OD值達(dá)到1.247，但隨后OD值開始下降。從降解曲線來看，體系中對(duì)羥基苯甲酸的降解與ZH2菌體的增殖密切相關(guān)。培養(yǎng)12 h前，由于菌體未大量增殖，體系中對(duì)羥基苯甲酸降解率很低。12 h后隨著細(xì)菌的大量增殖，對(duì)羥基苯甲酸降解率快速增大，24 h后降解率達(dá)70%，48 h后降解率達(dá)98%。

當(dāng)對(duì)羥基苯甲酸濃度增大至5 mg/mL時(shí)（圖3C），從生長(zhǎng)曲線可以看出，ZH2的生長(zhǎng)延緩期明顯增長(zhǎng)，最大OD值明顯增大，穩(wěn)定期明顯縮短，衰亡速度明顯增快，說明5 mg/mL對(duì)羥基苯甲酸對(duì)ZH2有一定的抑制作用，ZH2需要更長(zhǎng)時(shí)間的適應(yīng)才能開始正常生長(zhǎng)。但適應(yīng)后，在充足的碳源條件下，ZH2得到充分的增殖（最高OD值達(dá)7.92）。但隨著初始碳源的降解，中間產(chǎn)物積累，其中一些中間產(chǎn)物可能會(huì)對(duì)ZH2產(chǎn)生毒害作用，導(dǎo)致ZH2快速進(jìn)入衰亡期。從降解曲線來看，與圖3B一樣，體系中對(duì)羥基苯甲酸的降解與ZH2菌體的增殖密切相關(guān)。培養(yǎng)36 h前，對(duì)羥基苯甲酸未被降解；培養(yǎng)48 h時(shí)，降解過半；培養(yǎng)72 h時(shí)，降解率達(dá)97%。

2.3菌株緩解對(duì)羥基苯甲酸對(duì)盆栽黃瓜的毒害

對(duì)羥基苯甲酸和ZH2對(duì)黃瓜生長(zhǎng)的影響見圖4，可見，當(dāng)基質(zhì)中含有10 mg/g對(duì)羥基苯甲酸時(shí)，黃瓜苗的生長(zhǎng)受到負(fù)面影響，表現(xiàn)為株高、莖粗、真葉數(shù)量和最大葉片面積都比對(duì)照減小，其中葉面積差異顯著。當(dāng)施加對(duì)羥基苯甲酸的同時(shí)添加ZH2菌液時(shí)，這種負(fù)面影響能夠減小，甚至生長(zhǎng)情況優(yōu)于對(duì)照，表現(xiàn)為株高、莖粗和真葉數(shù)量大于對(duì)照，但最大葉片面積仍小于對(duì)照。說明ZH2菌液不僅能夠緩解對(duì)羥基苯甲酸對(duì)黃瓜苗的毒害作用，而且能夠促進(jìn)黃瓜苗生長(zhǎng)。

3討論與結(jié)論

假單胞菌屬廣泛存在于土壤、水體及植物根際，由于其具有多種功能而被廣泛研究[23-25]。該屬菌株具有對(duì)植株生長(zhǎng)的促進(jìn)作用、對(duì)病原微生物的抑制作用以及對(duì)有機(jī)物的降解作用，是近幾十年來生物土壤處理的重點(diǎn)。在耕地資源有限的前提下，植物根際產(chǎn)生的自毒化感物質(zhì)成為制約農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的重要障礙，尤其是在重茬栽培系統(tǒng)中，自毒物質(zhì)的積累嚴(yán)重影響植物的正常生長(zhǎng)。假單胞菌屬在植物根際自毒物質(zhì)降解方面表現(xiàn)突出。Guzik等[26]從活性污泥中分離到菌株P(guān). putida N6，能夠利用許多種芳香物質(zhì)，包括對(duì)羥基苯甲酸、苯酚、鄰苯二酚、香草酸、苯甲酸[26]。Fujisawa等[27]1968年也曾經(jīng)報(bào)道菌株P(guān). aeruginosa能夠降解對(duì)羥基苯甲酸。Chen等[28]從黃瓜根際土壤中篩選到一株能夠降解對(duì)羥基苯甲酸的P. putida CSYP1。但據(jù)筆者所知，關(guān)于綠針假單胞菌降解這類芳香酸的報(bào)道很少，只有Waechter-Kristensen等[29]1994年報(bào)告從封閉的西紅柿水培體系培養(yǎng)液中分離到能夠降解對(duì)羥基苯甲酸的菌株被鑒定為P. aureofaciens，當(dāng)體系中濃度為50μmol/L時(shí)，72 h內(nèi)對(duì)羥基苯甲酸降解了約40%。本研究分離的ZH2來源于土壤，能夠以對(duì)羥基苯甲酸為唯一碳源生長(zhǎng)，在純培養(yǎng)條件下具有降解對(duì)羥基苯甲酸的功能。當(dāng)體系中對(duì)羥基苯甲酸濃度為5 mg/mL時(shí)，72 h降解了約97%。

本研究中根據(jù)16S測(cè)序及部分生理生化結(jié)果顯示ZH2在種水平上屬于綠針假單胞菌，但在亞種分類上還不夠明確。這是由于綠針假單胞菌的3個(gè)亞種（P. chlororaphis， P. aureofaciens和P. aurantiaca）之間本來就十分相似，關(guān)于它們的分類歷史上曾經(jīng)存在分歧。1989年前，此3株菌被認(rèn)為是不同的種[30]，后來P. aureofaciens被認(rèn)為是P.chlororaphis的亞種，而P. aurantiaca仍然認(rèn)為是不同的種。然而Peix等[31]2007年通過幾乎完整的16S rRNA基因分析、DNA-DNA雜交實(shí)驗(yàn)、脂肪酸分析和表型性狀分析結(jié)果表明，盡管3株菌之間有一些差異，但他們之間有密切的親緣關(guān)系，表型和分子數(shù)據(jù)支持將這3株菌歸類為P. chlororaphis的3個(gè)亞種。因此，ZH2在亞種水平上的分類還需要借助其他手段來確定。

關(guān)于綠針假單胞菌，前人有許多研究，但大多數(shù)文獻(xiàn)報(bào)道均與綠針假單胞菌能產(chǎn)生具有廣泛抗真菌活性的吩嗪類物質(zhì)相關(guān)，能夠產(chǎn)生吩嗪的綠針假單胞菌能夠抑制植物病原微生物，被當(dāng)作生物防治菌株來防治各種植物病害[32-35]。國內(nèi)對(duì)綠針假單胞菌研究較多，其中最突出的是上海交通大學(xué)張雪洪教授課題組。他們從甜椒根際土壤中分離得到一株綠針假單胞菌株GP72，能夠產(chǎn)生吩嗪-1-羧酸（phenazine-1-carboxilic acid， PCA）和2-羥基吩嗪（2-hydroxyphenazine，2-OHPHZ），對(duì)辣椒疫霉、西瓜炭疽病、終極腐霉、水稻紋枯病菌、瓜果腐霉等具有好的拮抗作用。該菌株的應(yīng)用效果得到了國際上的廣泛認(rèn)可，已經(jīng)申請(qǐng)了專利[36-37]。國外方面的研究也證實(shí)綠針假單胞菌能夠抑制植物病害，誘導(dǎo)植物的ISR和過敏反應(yīng)[34-35]，有溶磷功能、能產(chǎn)生鐵載體、HCN和激素類物質(zhì)，能順利定殖到各種植物根際[23，38]，能促進(jìn)多種植物的生長(zhǎng)并提高產(chǎn)量[39]。本研究主要關(guān)注ZH2對(duì)自毒物質(zhì)的降解，還未在ZH2對(duì)植物病害的抑制方面做深入的研究。但Peix指出假單胞菌屬產(chǎn)生的橙色色素往往反映出吩嗪的產(chǎn)生[31，40]，本研究中，ZH2在LB培養(yǎng)基上培養(yǎng)24 h時(shí)即會(huì)產(chǎn)生明顯的橙色、可以擴(kuò)散的非熒光色素，推測(cè)ZH2也會(huì)有廣譜抗菌功能，下一步我們將進(jìn)行ZH2菌株的抗病潛力探索。同時(shí)，ZH2菌株降解對(duì)羥基苯甲酸的最佳條件及在大田的實(shí)際應(yīng)用還需進(jìn)行深入的研究。

綜上所述，本研究從土壤中篩選到能夠降解自毒物質(zhì)對(duì)羥基苯甲酸的綠針假單胞菌ZH2，在純培養(yǎng)條件下，當(dāng)對(duì)羥基苯甲酸濃度為5 mg/mL時(shí)，ZH2能在培養(yǎng)72 h時(shí)將其降解97%。盆栽條件下，當(dāng)基質(zhì)中對(duì)羥基苯甲酸濃度為10 mg/g時(shí)，ZH2能有效緩解對(duì)羥基苯甲酸對(duì)黃瓜的生長(zhǎng)抑制作用。ZH2在重茬障礙生物防治中具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。

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