過(guò)繼免疫細(xì)胞治療對(duì)原發(fā)性肝癌患者免疫學(xué)指標(biāo)的影響

張丹霞，桂若虎，王曉洋，張永虎

作者單位： 421000 湖南省衡陽(yáng)市中心醫(yī)院消化內(nèi)科

原發(fā)性肝癌早期往往無(wú)顯著的臨床癥狀，患者從發(fā)生顯著的不適情況開(kāi)始至到來(lái)院治療就診大多都已經(jīng)是中晚期，錯(cuò)失了采取手術(shù)切除腫瘤的最佳時(shí)期。對(duì)一些不適合采取手術(shù)進(jìn)行治療的原發(fā)性肝癌患者，大多會(huì)采取介入栓塞治療，該治療措施可有效殺滅腫瘤細(xì)胞，同時(shí)顯著改善患者的臨床癥狀。然而，介入栓塞治療后往往還會(huì)殘留腫瘤細(xì)胞，遠(yuǎn)期治療效果較差[1]。過(guò)繼免疫細(xì)胞治療措施是現(xiàn)階段一種新型的細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)治療措施，對(duì)患者進(jìn)行具備免疫活性細(xì)胞的輸注或激發(fā)患者體內(nèi)的免疫細(xì)胞活性，進(jìn)而提高患者全身免疫功能，強(qiáng)化患者的抗癌治療效果[2]。本研究觀察過(guò)繼免疫細(xì)胞治療對(duì)原發(fā)性肝癌患者免疫學(xué)指標(biāo)的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2019年5月-2020年5月在湖南省衡陽(yáng)市中心醫(yī)院進(jìn)行治療的原發(fā)性肝癌患者72例，采用隨機(jī)數(shù)字表法將患者分為觀察組和對(duì)照組各36例。觀察組男23例，女13例；年齡54～75(61.29±6.33)歲。對(duì)照組男21例，女15例；年齡56～78(62.84±6.57)歲。2組患者的一般資料比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者及家屬知情同意并簽署知情同意書。

1.2 治療方法 對(duì)照組治療期間使用常規(guī)介入治療：常規(guī)消毒鋪巾后采取腹腔動(dòng)脈造影，對(duì)患者進(jìn)行腫瘤供血?jiǎng)用}選擇性插管，灌注抗癌藥物之后采取明膠海綿進(jìn)行栓塞[3]。治療4周后復(fù)查，在必要情況下再次采取介入治療。觀察組患者在常規(guī)介入治療的基礎(chǔ)上采取過(guò)繼免疫細(xì)胞治療。介入手術(shù)前的1～3 d采集外周血。(1)CIK細(xì)胞培養(yǎng)：分離后的患者外周血經(jīng)過(guò)Ficoll淋巴分離液梯度離心得出單個(gè)核細(xì)胞，分離后的淋巴細(xì)胞加入IFN-γ 2 000 U/ml后，24 h后再增加IL-2 1 000 U/ml、CD3McAb 100 ng/ml及IL-1 10 U/ml，每次間隔3天換液1次，同時(shí)補(bǔ)充增加IL-2 500 U/ml。在細(xì)胞培養(yǎng)第9天檢測(cè)CIK表面標(biāo)記的CD3、CD56、CD4、CD8，所得的細(xì)胞經(jīng)臺(tái)盼藍(lán)染色檢測(cè)細(xì)胞活力高于90%，不存在內(nèi)毒素及細(xì)菌后進(jìn)行治療[4]。(2)CIK細(xì)胞回輸：介入治療后2周將制備完成的CIK細(xì)胞懸液對(duì)患者進(jìn)行靜脈滴注，CIK細(xì)胞數(shù)每次(2～8)×108，每天1次，7 d為1個(gè)療程[5]。

1.3 觀察指標(biāo)與方法 治療前后采集2組患者外周靜脈血5 ml，離心后取上清，使用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)及腫瘤壞死因子-α(TNF-α)水平[6]。采取ELISA法檢測(cè)血清磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)、甲胎蛋白(AFP)、胰島素樣生長(zhǎng)因子-1(IGF-1)及可溶性Fas(sFas)水平。采取流式細(xì)胞儀測(cè)定T細(xì)胞亞群水平，主要包括CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+。

2 結(jié) 果

2.1 治療前后血清HIF-1α、VEGF及TNF-α水平比較 治療前，2組患者血清HIF-1α、VEGF及TNF-α水平比較差異無(wú)統(tǒng)

計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；治療后，2組患者血清HIF-1α及TNF-α水平均低于治療前，血清VEGF水平均高于治療前，且觀察組降低/升高更明顯，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見(jiàn)表1。

表1 2組患者治療前后血清HIF-1α、VEGF及TNF-α水平比較

2.2 治療前后血清GPC3、AFP、IGF-1及sFas水平比較 治療前，2組患者血清GPC3、AFP、IGF-1及sFas水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；治療后，2組患者血清GPC3、AFP、IGF-1及sFas水平均低于治療前，且觀察組低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見(jiàn)表2。

表2 2組患者治療前后血清GPC3、AFP、IGF-1及sFas水平比較

2.3 治療前后T細(xì)胞亞群水平比較 治療前，2組患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。治療后，2組患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平均明顯高于治療前，CD8+均明顯低于治療前，且觀察組患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)；治療后，2組患者CD8+水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表3。

表3 2組患者治療前后T細(xì)胞亞群水平比較

3 討 論

眾所周知，我國(guó)已成為全球原發(fā)性肝癌第一大國(guó)，肝癌的發(fā)病率越來(lái)越高，且已經(jīng)對(duì)人們生命健康造成極大威脅[7]。以往的治療往往只關(guān)注腫瘤疾病，還需關(guān)注患者全身免疫狀態(tài)對(duì)患者腫瘤發(fā)展過(guò)程中的影響及患者治療后短期內(nèi)腫瘤增殖轉(zhuǎn)移[8]。過(guò)繼免疫治療主要指抗腫瘤活性免疫細(xì)胞的輸注，激發(fā)患者機(jī)體免疫反應(yīng)進(jìn)而殺傷腫瘤細(xì)胞，有效殺滅化療后體內(nèi)遺留的腫瘤細(xì)胞，具有一定的抗癌效果，同時(shí)有效預(yù)防腫瘤復(fù)發(fā)[9]。除此之外，該治療方式可優(yōu)化患者全身免疫功能，抑制患者腫瘤血管新生，提高惡性腫瘤疾病的治療效果[10]。本研究在常規(guī)方式上增加過(guò)繼免疫細(xì)胞治療，結(jié)果顯示，治療后，2組患者血清HIF-1α及TNF-α水平均低于治療前，血清VEGF水平均高于治療前，且觀察組降低/升高更明顯。治療后，2組血清GPC3、AFP、IGF-1及sFas水平均低于治療前，且觀察組低于對(duì)照組。治療后，2組患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平均明顯高于治療前，CD8+均明顯低于治療前，且觀察組患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平高于對(duì)照組；治療后，2組患者的CD8+水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在腫瘤形成與發(fā)展的過(guò)程中，通過(guò)進(jìn)行可溶性的免疫抑制因子生成可有效阻止CD4+的生成與成熟，從而降低CD4+/CD8+，降低細(xì)胞免疫功能的同時(shí)也明顯降低導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的殺傷作用，抗腫瘤治療后復(fù)發(fā)率較高。而過(guò)繼免疫細(xì)胞治療可有效誘導(dǎo)激活抗腫瘤效應(yīng)細(xì)胞的特異性，從而使其轉(zhuǎn)入宿主的體內(nèi)，從而有效激活特異性抗腫瘤免疫效應(yīng)，建立長(zhǎng)期有效的特異性抗腫瘤免疫效應(yīng)，進(jìn)而有效提升患者的全身細(xì)胞免疫功能，增強(qiáng)患者的抗腫瘤效果。

綜上所述，過(guò)繼免疫細(xì)胞治療原發(fā)性肝癌可降低患者腫瘤細(xì)胞惡性程度，同時(shí)抑制患者腫瘤血管新生，對(duì)患者全身免疫功能進(jìn)行優(yōu)化，值得推廣。