淺談高效液相色譜法測定食品中著色劑的注意事項

龍起成

摘要：在實驗室利用高效液相色譜法檢驗著色劑的過程中，通過對試劑、前處理、色譜儀等條件的優(yōu)化，能夠大大提高測量的精確性。

關鍵字：高效液相色譜法、食品檢驗、著色劑

著色劑所為一類常用的添加劑被廣泛的應用于各種食品之中，增加食品感官賣相的同時也需要嚴格的控制添加量，保證實用后不會對人體產生影響。GB5009.35-2016、GB/T 21916-2008、GB/T 9695.6-2008等標準都對常見的食品中著色劑的檢測步驟進行了標準化的闡述，本人通過多年的食品檢測經驗，以GB5009.35-2016為例現(xiàn)總結出以下幾點對不同基質產品的著色劑檢測過程中的注意事項：

第一是要注意的標準適用范圍，GB5009.35-2016適用于飲料、配制酒、硬糖、蜜餞、淀粉軟糖、巧克力豆及著色糖衣制品，所以對于其他基質的食品可以參考標準的思路，但不能作為判定依據(jù)，尤其在出具報告時一定要告知委托檢驗人是檢定報告還是測試報告，避免出現(xiàn)超范圍情況的發(fā)生。

第二是試劑的配制問題。標準中沒有給出試劑配置后的保存期限，可以參考理化檢測對試劑的保存時間，但對于高效液相色譜檢測來說，最理想的方法還是現(xiàn)用現(xiàn)配。尤其是流動相，必須是現(xiàn)用現(xiàn)配，切不可使用存放了多日之后的流動相，高效液相色譜以其精密的檢測而被廣泛應用，其內部管路極其細小，而存放了多日的流動相尤其是水相為主的流動相大部分會產生渾濁甚至沉淀，雜菌滋生，這對精密而細小的儀器管路是致命的，一旦出現(xiàn)堵塞，疏通起來會很繁瑣，同時長期使用即使不出現(xiàn)堵塞，對色譜柱的壽命也會產生影響。而純有機相的流動相相對保存時間可以長一些，但是需要注意的是密封問題，要防止揮發(fā)和粉塵的進入。由于是梯度洗脫，我們無法配制特定濃度的混合流動相進行使用，但是一定要注意的是對于流動相一定要過膜、超聲。這兩部對儀器的保護、數(shù)據(jù)的準確至關重要。尤其如果使用特定比例的有機無機混合溶液作為流動相的時候一定要進行超聲。有機相和無機項混合的時候會產生大量的氣泡，這些氣泡是肉眼無法看到的，只有超聲才能趕出氣泡，在儀器使用過程中不至于因為產生氣泡而影響基線穩(wěn)定和峰型的準確。

第三是標準品的配制和保存。標準品的量取要用大肚吸管，切不可圖省事用移液槍，注意大肚吸管最后半滴的取舍問題。對于保存，一定按照要求貼好標簽存放，在有效期內使用，需要注意的是如果標準品冷藏保存了，在使用時一定要和進樣樣品恢復到相同的溫度進樣，由于進樣一般都是以微升為單位，所以盡量避免溫度差帶來的進樣體積差距。高效液相色譜檢測以外標法定量，所以標準品的準確與否至關重要，對于標準品的配制和保存，一定要加大重視程度，如果起步就錯，后邊的也就無意義了。

第四是樣品的前處理。對于樣品的稱量問題，一些剛剛走進檢測崗位的檢驗員往往會犯的錯誤就是比較隨意或者按以往經驗稱量差不多的樣品量。這里需要提示的是，每個標準中對稱樣量的限定不是隨意的一個數(shù)值，標準中規(guī)定的稱樣量對整個試驗的限定數(shù)值。換句話說用標準中的前處理就需要準確按標準中規(guī)定的樣品量進行提取分析，太多可能超過了本實驗的提取范圍，太少又可能會帶來較大誤差量。所以對于樣品的稱樣量我們一定要嚴格按照標準中的范圍，不同基質按不同的稱樣量進行試驗。樣品的制備在標準中寫的比較詳細，在此不再贅述，需要注意一點就是要盡可能的提取充分，尤其是巧克力豆及著色糖衣，一定要水洗充分，不要在意水洗后溶液的多少，水相在后邊是會過濾舍去的，不必在意多少。著色劑的提取按聚酰胺提取法進行提取，這里需要注意的是在加聚酰胺粉的時候一定要按要求把樣品提取液加熱到60℃左右，因為有的實驗室保溫條件不是很好，過低的溫度會影響聚酰胺粉對著色劑的吸附，可能會等很久才會吸附好，為了提高試驗效率，我們加熱到60℃加入聚酰胺粉會很快完成吸附。之后按標準要求進行洗滌、洗脫。在洗脫時第一次加入乙醇-氨水-水溶液時可以適當多加一些，多攪拌靜止一會兒，不要著急開泵進行抽濾，因為在洗脫時第一次往往需要時間，然后分多次少量的加乙醇-氨水-水溶液，直至G3漏斗中的聚酰胺粉呈現(xiàn)白色即可。水浴加熱濃縮的時候注意溫度，避免溶液沸騰。定容時需要注意的是一定要冷卻至室溫再定容，切不可帶溫進行定容，熱脹會帶來數(shù)值的不準確。

第五是前處理的一些玻璃器皿要及時清洗。尤其是G3漏斗，因其本身特性，最好是使用完就及時沖洗干凈，用稀鹽酸浸泡超聲清洗后干燥保存。

第六是上機分析。在樣品進儀器分析前要充分平衡色譜柱，可以觀察以下色譜圖：

對著色劑這種需要流動相梯度洗脫的檢驗項目，我們一定要在平衡色譜柱的時候按其洗脫梯度進行平衡，充分的沖掉色譜柱中的雜質影響，這樣才能做出干凈漂亮的色譜圖來。最常見的就是如果不能充分平衡色譜柱，那么基線會忽高忽低極其不穩(wěn)。對于柱溫箱溫度國標中有明確的數(shù)值35℃，這里需要注意的是實驗室的溫度，多年的經驗來看，比柱溫箱低5-10℃的恒定溫度更有利于圖譜的穩(wěn)定，也就是說環(huán)境溫度讓儀器柱溫箱持續(xù)做功保持恒溫比較好。

最后提醒一下有的領導可能在定性試驗中要求某幾個樣品混在一起進行檢測，將樣品混合后按標準進行稱量、提取等操作，如果未能檢出相應參數(shù)，就認為這幾個樣品中沒有此物質。這是一個典型的稀釋和濃縮概念混淆不清的例子，我們的檢驗項目都有檢出限，低于檢出限我們認為是未檢出。舉個例子來說有9杯水1杯待測物，假設我們的檢出限為50%，也就是說當待測物和水各一半時是我們檢出的極限濃度，但是如果按照混合樣品9杯水和1杯待測物來說，待測物濃度為10%，這就低于50%的檢出限，我們可能會認為是10個樣品都不含待測物，然而實際上是有待測物的，這就是一個典型的稀釋后沒有濃縮的實驗過程，因此在檢測過程中我們一定要注意這種情況的發(fā)生。這種混合稱量樣品如果非要這么取樣，一定要算好稀釋倍數(shù)，在最后一定要濃縮回來，只有這樣才能保證數(shù)據(jù)的準確。

高效液相色譜法檢測著色劑在眾多的檢測指標之中算是比較簡單易學又非常典型的試驗。其中需要總結的技巧和經驗也很多，需要在日常的工作中不斷發(fā)現(xiàn)總結，對比不同方法的指導思想來思考每一步驟的具體用意，注意每個細節(jié)，必定會讓檢測結果更趨于真實值。

參考文獻

[1]中華人民共和國國家標準，GB5009.35-2016 食品安全國家標準 食品中合成著色劑的測定.