拮抗小麥赤霉病內(nèi)生細(xì)菌YB-144的鑒定及其對DON的影響

張立勇,夏明聰,徐 文,王 琦,張 潔,孫潤紅,潘婭梅,陳瑞雪,吳 坤,楊麗榮

(1.河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院,河南 鄭州 450002;2.河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 植物保護研究所，河南省生物農(nóng)藥工程研究中心,河南 鄭州 450002;3.中國農(nóng)業(yè)大學(xué) 植物保護學(xué)院,北京 100193)

小麥赤霉病(Fusariumhead blight,FHB)由禾谷鐮孢菌(Fusariumgraminearum)引起,不僅造成小麥大幅度減產(chǎn)[1],還能產(chǎn)生真菌毒素(Mycotoxin deoxynivalenol),給農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、生態(tài)造成巨大的損失[2]。其中以脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(Deoxynivalenol,DON)毒性最強[3-5],可導(dǎo)致人、畜中毒,還對小麥細(xì)胞、組織及種子的萌發(fā)有毒害作用。多年來DON污染范圍非常廣泛,在病菌致病過程中起到重要的作用,被認(rèn)為是主要的致病因子。因此，DON污染比產(chǎn)量損失更受人們的關(guān)注。由于降水增加、秸稈還田等因素,小麥赤霉病在我國小麥各大主產(chǎn)區(qū)頻繁大面積發(fā)生[6],已成為黃淮麥區(qū)小麥的主要病害,嚴(yán)重影響小麥的產(chǎn)量和品質(zhì)[7-8]。

由于抗性資源匱乏,已鑒定和開發(fā)的抗病資源有限,傳統(tǒng)育種方法未能有效控制小麥赤霉病原菌及其毒素的危害[9]。長期以來,小麥赤霉病的防治以多菌靈、甲基硫菌靈、多酮等化學(xué)殺菌劑為主,導(dǎo)致嚴(yán)重的環(huán)境污染和生態(tài)環(huán)境問題,也在一定程度上誘發(fā)了病原菌的抗藥性和增強產(chǎn)毒量[10]。而生物防治主要是通過微生物間的抗生、競爭、重寄生、溶菌作用及微生物代謝產(chǎn)物誘導(dǎo)植物產(chǎn)生抗病性,從而有效控制鐮刀菌的蔓延,還能有效降低DON[11]。生物防治具有不污染環(huán)境、對人畜比較安全、防治作用持久、產(chǎn)品無殘留、對病原菌殺傷特異性強、易于同其他植物保護措施協(xié)調(diào)配合并能節(jié)約能源等優(yōu)點。所以生物防治是目前最具潛力并具有良好農(nóng)藥替代效果的植物病害安全防治技術(shù)[12]。

內(nèi)生菌能夠參與植物的防衛(wèi)功能,增強植物抗逆性、抗病害的能力,且種類多、分布廣[13],內(nèi)生菌對植物病害的生物防治及開發(fā)應(yīng)用引起了人們的廣泛關(guān)注和重視。小麥赤霉病生物防治中生防菌多是從小麥根際土壤中分離得到,從小麥組織中分離拮抗內(nèi)生菌的報道相對較少[14-15],而且生防菌調(diào)控禾谷鐮孢菌毒素合成相關(guān)報道較為少見。鑒于此,從以上問題著手,以小麥赤霉病為目標(biāo)病原菌,通過分離河南省鄧州市發(fā)病小麥的穗部樣品,平板對峙法篩選得到1株對禾谷鐮孢菌具有強烈抑制作用的貝萊斯芽孢桿菌YB-144菌株,并深入研究其對PH-1孢子、菌絲和DON毒素合成的影響,為持續(xù)開發(fā)利用拮抗菌株YB-144防治小麥赤霉病和有效控制DON毒素合成提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 供試材料

1.1.1 供試植物 2019年,于河南省鄧州市河口村小麥田,采集小麥赤霉病發(fā)病的穗部,用保鮮袋帶回,備用。

1.1.2 供試病原菌 禾谷鐮孢菌菌株P(guān)H-1由西北農(nóng)林科技大學(xué)許金榮教授團隊提供。辣椒炭疽病菌(Colletotrichumcapsici)、小麥紋枯病菌(Rhizoctoniacerealis)、花生果腐病菌(Fusariummoniliforme)、小麥根腐病菌(Bipolarissorokiniana)、棉花枯萎病菌(Fusariumoxysporumfvesinfectum)、黃瓜枯萎病菌(Fusariumoxysporumf.sp.cucumerinum)、芹菜早疫病菌(Alternariasolani)、西瓜枯萎病菌(Fusariumoxysporumf.sp.niveum)、花生白絹病菌(SclerotiumrolfsiiSacc)由河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護研究所分離、保存。

1.1.3 供試培養(yǎng)基 PDA培養(yǎng)基:馬鈴薯200 g、瓊脂20 g、葡萄糖20 g,加無菌水定容到1 000 mL,121 ℃高溫高壓滅菌;PDB培養(yǎng)基:馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g,加無菌水定容到1 000 mL,121 ℃高溫高壓滅菌，備用;LB培養(yǎng)基:胰蛋白胨10 g、NaCl 10 g、酵母浸粉5 g、瓊脂20 g,加無菌水定容到1 000 mL,121 ℃高溫高壓滅菌，備用;NA培養(yǎng)基:胰蛋白胨10 g、牛肉膏5 g、NaCl 5 g、瓊脂20 g,加無菌水定容到1 000 mL,121 ℃高溫高壓滅菌，備用;CMC培養(yǎng)基:羧甲基纖維素鈉15 g、NH4NO31 g、酵母膏1 g、MgSO4·7H2O 0.5 g、KH2PO41 g,加無菌水定容到1 000 mL,121 ℃高溫高壓滅菌，備用;TBI培養(yǎng)基:蔗糖30 g、磷酸鉀1 g、MgSO4·7H2O 0.5 g、氯化鉀0.5 g、七水硫酸鐵10 mg、L-精氨酸871 mg、25 000×微量元素溶液40 μL、植物凝膠0.3 g,加無菌水定容到1 000 mL,121 ℃高溫高壓滅菌，備用。

1.2 試驗方法

1.2.1 小麥內(nèi)生菌的分離純化 以采集到的小麥穗部樣本作為內(nèi)生菌的分離對象,稱取10 g發(fā)病小麥穗部(小穗、穗軸、護穎等),用無菌水沖洗,75%的酒精浸泡2～3 min,再用3%次氯酸鈉表面消毒4～5 min,用無菌水洗2～3次,最后放入已滅菌的研缽中研磨,待研碎后,研缽內(nèi)加入10 mL無菌水,吸取1 mL再依次稀釋10-2,10-3,10-4梯度,吸取100 μL于NA培養(yǎng)基平板上涂布,并以最后一次沖洗的無菌水為對照,驗證表面消毒效果,每個梯度稀釋液及對照各涂3個平板,28 ℃培養(yǎng)2～4 d,根據(jù)菌落顏色和形狀挑取不同的單菌落進(jìn)行多次純化,按照常規(guī)方式試管斜面劃線后4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 小麥赤霉病拮抗內(nèi)生菌的分離篩選 小麥赤霉病菌拮抗內(nèi)生菌的篩選采用平板對峙培養(yǎng)法。用已滅菌的打孔器(6 mm)從活化好的菌株P(guān)H-1平板上打孔,無菌牙簽挑取菌餅將菌絲朝下反接于PDA平板上,于恒溫培養(yǎng)箱28 ℃環(huán)境下倒置培養(yǎng),24 h后待菌絲開始蔓延時,用滅菌牙簽蘸取微量上述保存的內(nèi)生菌單菌落,對稱點接在距離菌餅20 mm處,并設(shè)置對照組(未接內(nèi)生菌的平板),28 ℃恒溫培養(yǎng)5 d,待對照組長滿后,比對試驗組有無抑菌圈出現(xiàn),并測量抑菌圈半徑。為了保證試驗數(shù)據(jù)的可靠性,還需進(jìn)行平板對峙復(fù)篩。選擇抑菌距離在5 mm以上的內(nèi)生菌進(jìn)行復(fù)篩,篩選出拮抗性最強且拮抗性能穩(wěn)定的細(xì)菌,對具有抑菌能力的菌株進(jìn)行試管斜面劃線后4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 小麥赤霉病拮抗內(nèi)生菌的鑒定 依據(jù)菌體形態(tài)特征及生理生化指標(biāo)進(jìn)行鑒定,參照《伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊》(第8版)[16],判斷菌株YB-144的分類地位。按照細(xì)菌基因組DNA快速抽提試劑盒說明書提取菌株YB-144的基因組DNA,并以菌株YB-144的基因組DNA為模板,采用細(xì)菌通用引物27-F(5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′)/1492-R(5′-GGTTACCTTGTTACGACTT-3′)擴增其16S rDNA基因序列。PCR產(chǎn)物由生工生物工程(上海)股份有限公司進(jìn)行測序,測序結(jié)果用Blast軟件與GenBank中的已知序列進(jìn)行比對。采用Mega 4.0軟件對菌株YB-144進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)建。通過上述形態(tài)特征、生理生化指標(biāo)以及分子特征初步判定該菌株分類地位。

1.2.4 菌株YB-144抑菌譜測定 參照1.2.2的方法測定菌株YB-144對辣椒炭疽病菌、小麥紋枯病菌、花生果腐病菌、小麥根腐病菌、棉花枯萎病菌、黃瓜枯萎病菌、芹菜早疫病菌、西瓜枯萎病菌、花生白絹病菌9種植物病原菌的拮抗特性。

1.2.5 菌株YB-144對菌株P(guān)H-1菌絲和孢子形態(tài)的影響 將菌株YB-144與PH-1在PDA平板上進(jìn)行對峙培養(yǎng),以只接種菌株P(guān)H-1的PDA平板為對照組,28 ℃倒置培養(yǎng)4 d。待對照組菌絲長滿培養(yǎng)基后,分別挑取處理組抑菌帶周圍菌絲和對照組菌落邊緣菌絲,用無菌水清洗2～3次,在顯微鏡下觀察菌絲形態(tài)。

將菌株P(guān)H-1接種于PDA平板上,28 ℃、倒置培養(yǎng)3～5 d,待長滿后,用無菌牙簽挑取菌絲接種于裝有CMC培養(yǎng)基搖瓶中,28 ℃、150 r/min培養(yǎng)3～5 d,用已滅菌的擦鏡紙過濾收集孢子液,無菌水漂洗3～4次,加到PDB培養(yǎng)基中,終含量為105個/mL,再將提前搖好的YB-144菌液加到上述含有PH-1孢子液的PDB培養(yǎng)基中,終含量為106個/mL,25 ℃培養(yǎng)15 h,分別在不同時間段觀察孢子萌發(fā)情況,以加等量的PDB液體替代拮抗菌菌液為對照,重復(fù)3次,計算孢子萌發(fā)率。

1.2.6 菌株YB-144對PH-1中DON合成的影響 將菌株P(guān)H-1 接種于PDA平板上,28 ℃倒置培養(yǎng)5 d,按照1.2.5方法誘導(dǎo)孢子,收集孢子液,無菌水漂洗2～3次,加到TBI培養(yǎng)基中,終含量為104個/mL。再將提前搖好的菌株YB-144加到上述含有PH-1孢子液的TBI培養(yǎng)基中,終含量為106個/mL,25 ℃培養(yǎng)3 d用DON毒素測定試劑盒(Beacon公司),并按說明進(jìn)行DON毒素檢測,以單獨在TBI培養(yǎng)基中培養(yǎng)的PH-1為對照,每個處理重復(fù)3次。

上述測定DON含量的同時,收集3 d時的培養(yǎng)物,RNA提取參照Yang等[17]的方法,利用TRIzol試劑,cDNA通過TaKaRa公司的cDNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒(PrimeScriptTM RT reagent Kit)。根據(jù) DON 合成途徑中Tri3、Tri5、Tri8基因CDS 序列設(shè)計引物[18-19],由生工生物工程(上海)合成引物,并以上述cDNA為模板,Tubulin基因作為內(nèi)參基因,利用TaKaRa公司RT-PCR反應(yīng)試劑盒(SYBR?Premix ExTaqTM)進(jìn)行熒光定量PCR?；虻南鄬Ρ磉_(dá)量通過2-ΔΔCt方法計算[20]。

2 結(jié)果與分析

2.1 小麥赤霉病拮抗內(nèi)生菌的篩選

從小麥穗部樣品中共分離得到256株內(nèi)生細(xì)菌,平板對峙結(jié)果表明,共有78株細(xì)菌在PDA培養(yǎng)條件下均表現(xiàn)出對菌株P(guān)H-1的拮抗作用,占所得分離細(xì)菌總數(shù)的30.5%,對得到的78株細(xì)菌進(jìn)行復(fù)篩,平板對峙結(jié)果發(fā)現(xiàn)有8株菌株(YB-144、XH-16、XH-89、XH-25、XH-43、XH-22、XH-1、XH-143)對菌株P(guān)H-1有較好的抑制作用。XH-48復(fù)篩結(jié)果發(fā)現(xiàn)對菌株P(guān)H-1無抑制效果(圖1-A)，其中，菌株YB-144對菌株P(guān)H-1的抑制作用最強，抑菌帶為13.6 mm, 抑制率為71.9%(圖1-B)。菌株XH-16、XH-43、XH-89、XH-25、XH-22、XH-1、XH-143對PH-1也有一定的抑制作用，抑菌帶寬度分別為11.2，10.7，10.4，10.2，9.7，8.3，9.8 mm，因此，選擇菌株YB-144進(jìn)行進(jìn)一步試驗研究。

不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。圖5同。

采用平板對峙法對1.1.2中的9種植物病原真菌的拮抗效果進(jìn)行測定,結(jié)果如表1所示,表現(xiàn)出較為廣譜的抑菌效果,其中對小麥紋枯病菌和小麥根腐病菌的抑制效果最好,抑菌帶寬度分別為10,8 mm,對芹菜早疫病菌、西瓜枯萎病菌、辣椒炭疽病菌、花生果腐病菌、黃瓜枯萎病菌的抑制效果一般,抑菌帶寬度分別6.7,4.1,7.0,5.0,4.5 mm,對花生白絹病菌和棉花枯萎病菌的抑制效果最弱,抑菌帶寬度只有0.6,2.5 mm。表明菌株YB-144有一定的廣譜抑菌性(圖2)。

A.花生果腐病菌;B.辣椒炭疽病菌;C.棉花枯萎病菌;D.小麥紋枯病菌;E.西瓜枯萎病菌。

表1 菌株YB-144對不同病原菌的抑菌作用

2.2 菌株YB-144對菌株P(guān)H-1孢子和菌絲的影響

與對照組相比,在PDA和PDB培養(yǎng)基中,與菌株P(guān)H-1共培養(yǎng)的菌株YB-144均可以顯著抑制PH-1的生長。為了解潛在的作用模式，在顯微鏡下觀察孢子和菌絲形態(tài)，顯微鏡下可看到孢子萌發(fā)率顯著下降，共培養(yǎng)15 h后孢子萌發(fā)抑制率可達(dá)81.67%(表2)，對照組孢子形態(tài)完好，無畸形產(chǎn)生(圖3-A)，處理組孢子變畸形、異常膨大并且還有部分溶解現(xiàn)象(圖3-B)。顯微鏡下對照組PH-1菌絲表面光滑、飽滿(圖3-C)，處理組PH-1菌絲出現(xiàn)異常膨脹、腫脹和部分溶解(圖3-D)，這些結(jié)果表明，菌株YB-144能夠影響菌絲PH-1孢子萌發(fā)和菌絲生長。

表2 菌株YB-144對PH-1孢子萌發(fā)的抑制作用

A,C.對照；B，D.處理。

2.3 菌株YB-144的鑒定

將復(fù)篩效果較好的菌株YB-144接種于LB平板中,于28 ℃下培養(yǎng)1 d,觀察其菌落形態(tài)和顏色。菌株YB-144在LB培養(yǎng)基上生長良好,菌落呈乳白色,未見有色素產(chǎn)生,菌落形態(tài)不規(guī)則,表面有隆起,且形成不規(guī)則的褶皺。培養(yǎng)24 h后產(chǎn)生輕微腥臭氣味,挑起時菌落成一團且有黏液。

如表3所示,菌株YB-144為革蘭氏陽性菌,V-P試驗、過氧化氫酶、淀粉水解、明膠水解等生理生化試驗呈陽性,檸檬酸鹽利用、吲哚試驗、甲基紅試驗等生理生化試驗呈陰性。

表3 菌株YB-144的生理生化特征

將菌株YB-144序列與GenBank數(shù)據(jù)庫中相關(guān)序列進(jìn)行Blast分析, 結(jié)果顯示，有130個與該序列匹配的同源序列,選取同源性較高且具有代表性菌株的16S rDNA 序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹, 如圖4所示,菌株YB-144與貝萊斯芽孢桿菌(FZB42)處于進(jìn)化樹中的同一分支。綜合上述形態(tài)學(xué)、生理生化特征以及菌株YB-144和相關(guān)菌株16S rDNA序列同源性分析結(jié)果, 將菌株YB-144初步鑒定為貝萊斯芽孢桿菌。

圖4 菌株YB-144依據(jù)16S rDNA基因序列的系統(tǒng)發(fā)育樹

2.4 菌株YB-144對菌株P(guān)H-1DON產(chǎn)毒能力及其產(chǎn)毒基因表達(dá)的影響

菌株P(guān)H-1在和YB-144共培養(yǎng)3 d之后,其DON含量要顯著低于菌株P(guān)H-1單獨培養(yǎng)(圖5-A),單獨培養(yǎng)的菌株P(guān)H-1 DON含量達(dá)到118.3 μg/mL,而當(dāng)菌株P(guān)H-1與菌株YB-144共培養(yǎng)之后的DON含量顯著降低,只有39.5 μg/mL，與對照組相比DON含量下降了66.6%。此外,當(dāng)菌株P(guān)H-1與菌株YB-144共培養(yǎng)之后其DON合成相關(guān)基因Tri3、Tri5、Tri8的相對表達(dá)量水平顯著低于PH-1單獨處理(圖5-B),相對表達(dá)量下降幅度最大的是Tri5基因,表現(xiàn)出5.0倍的下調(diào),Tri3、Tri8基因也表現(xiàn)出不同程度的下降,分別表現(xiàn)出1.6,1.2倍的下調(diào)。Tri5是編碼DON合成酶的關(guān)鍵基因,Tri5基因編碼單端孢霉二烯合酶是DON生物合成途徑的第一步反應(yīng),Tri5基因的缺失會減弱小麥赤霉菌的毒性和降低其致病力。這表明,在共培養(yǎng)期間菌株YB-144可以降低這些與DON生物合成相關(guān)基因的表達(dá),而DON生物合成相關(guān)基因表達(dá)的降低可能是菌株P(guān)H-1共培養(yǎng)中DON積累減少的原因。

圖5 菌株YB-144對菌株P(guān)H-1 DON含量(A)和DON合成基因(B)的影響

3 結(jié)論與討論

近年來,微生物農(nóng)藥的特性和發(fā)展趨勢與人類生態(tài)環(huán)境、食品安全和生物多樣性具有良好的相融性,加上現(xiàn)代微生物工業(yè)化生產(chǎn)技術(shù)體系日趨完善,微生物農(nóng)藥的研究開發(fā)引起了廣泛的關(guān)注和重視[21-22]。從各種農(nóng)作物中分離得到多株對禾谷鐮孢等病原真菌具有拮抗作用的菌株,其中以生防細(xì)菌最多,而生防細(xì)菌中又以芽孢桿菌、放線菌和假單胞菌研究的最為深入[23],如枯草芽孢桿菌和解淀粉芽孢桿菌(Bacillusamyloliquefaciens)。1945年,Johnson等[24]最早發(fā)現(xiàn)枯草芽孢桿菌能夠產(chǎn)生抑制禾谷鐮孢菌生長的抗菌物質(zhì)。此后, 萎縮芽孢桿菌(Bacillusatrophaeus)、解淀粉芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌(Bacilluscereus)、地衣芽孢桿菌(Bacilluslicheniformis)和短小芽孢桿菌(Bacilluspumilis)等多種芽孢桿菌均被相繼發(fā)現(xiàn)對禾谷鐮孢具有拮抗作用[25]。由于芽孢桿菌體積大,繁殖速度快,抵抗外界有害因子能力強,廣泛應(yīng)用于田間[26]。本研究以小麥赤霉病發(fā)病較重的河南鄧州市采集的小麥穗部樣品中篩選得到的256個菌株為基礎(chǔ),通過平板對峙法篩選得到1個對菌株P(guān)H-1具有良好的抑制效果的YB-144,通過形態(tài)特征、生理生化特征和分子生物學(xué)鑒定為貝萊斯芽孢桿菌。并且選擇9種病原菌鑒定了其抑菌譜,發(fā)現(xiàn)不僅對禾谷鐮孢菌有良好的抑制效果,對小麥紋枯病菌、根腐病菌等也有良好的拮抗特性。說明菌株YB-144具有廣譜的抑菌效果,可作為生防資源應(yīng)用在多種病害的防治工作中。

除此之外,禾谷鐮孢菌產(chǎn)生的真菌毒素也引起人們的廣泛關(guān)注,鐮孢菌侵染作物后可產(chǎn)生多種真菌毒素,主要為DON和玉米赤霉烯酮(ZEN)。其中DON是糧食作物中危害較嚴(yán)重、最常見的真菌毒素。研究表明,禾谷鐮孢侵染不僅造成作物品質(zhì)和產(chǎn)量的降低,更為嚴(yán)重的是產(chǎn)生DON毒素危害人畜健康。He等[27]通過室內(nèi)篩選得到2 株多黏類芽孢桿菌(Paenibacilluspolymyxa)W1-14-3 和 C1-8-b,2株菌株均分離自麥穗且適應(yīng)麥穗中的生長條件,在溫室試驗中2個菌株均高效抑制赤霉病侵染和毒素的產(chǎn)生,抑制率分別為56.5%，55.4%,對DON 的抑制率分別為84.8%，89.4%,百粒質(zhì)量的增長率分別為56.5%，66.9%。Schisler等[28]分離得到1株枯草芽孢桿菌AS43.3,該菌株在不同小麥品種中均可抑制赤霉病發(fā)病,溫室試驗中抑制率最高達(dá)90%以上。國內(nèi)也有較多相關(guān)報道,劉偉成等[29]從小麥植株上分離篩選到8株拮抗性芽孢桿菌,其中7株是枯草芽孢桿菌,抑菌活性最強的菌株B08對禾谷鐮孢菌的防治效果達(dá)到65%以上,周苗苗等[30]從離體的麥穗上分離得到的1株細(xì)極鏈格孢菌KMN-1,該菌株的發(fā)酵產(chǎn)物對小麥赤霉病的保護和治療作用防治效果分別為78.13%，76.52%,與多菌靈的防效相當(dāng),具有廣泛的應(yīng)用前景。

本研究報道的貝萊斯芽孢桿菌YB-144對小麥赤霉病菌的拮抗特性較好,處理組菌株YB-144與菌株P(guān)H-1共培養(yǎng)15 h之后孢子萌發(fā)抑制率達(dá)到81.67%,與PH-1單獨培養(yǎng)相比明顯降低,抑制孢子的萌發(fā)也可做到赤霉病的早期防治。在菌株YB-144與PH-1共培72 h之后其DON含量和PH-1單獨培養(yǎng)相比顯著下降,只有39.5 μg/mL,而PH-1單獨培養(yǎng)DON含量達(dá)到118.3 μg/mL。表明菌株YB-144能顯著降低禾谷鐮孢菌中DON的積累,并且通過RT-PCR顯示,菌株P(guān)H-1在與YB-144共培養(yǎng)之后,其與DON合成相關(guān)基因Tri3、Tri5、Tri8的相對表達(dá)量與PH-1單獨培養(yǎng)相比也有下降,其中Tri5基因的相對表達(dá)量差別最大,與PH-1單獨培養(yǎng)相比有5.0倍的下調(diào)。芽孢桿菌的生物活性與其次生代謝物有密切聯(lián)系,其中的抗菌肽、脂肽類抗生素以及水解酶類對許多植物病原體有防控作用,芽孢桿菌對植物病原菌的防控作用與其抑菌肽合成基因(bmyB、fenD、ituC、srfA和bacA)有關(guān)[31],胡曉丹等[32]采用硫酸銨法沉淀拮抗菌枯草芽孢桿菌AF0907拮抗蛋白后,用DEAE-52離子交換層析分離純化拮抗蛋白,得到對小麥赤霉病菌具有抑制作用的純蛋白。本研究獲得的拮抗內(nèi)生菌YB-144是否通過分泌上述某些活性物質(zhì)對禾谷鐮孢菌的孢子、菌絲和DON起到抑制作用,也需進(jìn)一步驗證查明。在未來的生防菌研究與應(yīng)用中,這種直接作用、時間短、效果明顯的菌株有較大的發(fā)展?jié)摿Α?/p>