穿心蓮有效成分的提取工藝研究

郭佳佳，曹智威，杜鴻章，馮亞莉

（鄭州工業(yè)應(yīng)用技術(shù)學(xué)院 藥學(xué)與化學(xué)工程學(xué)院，河南新鄭 451100）

穿心蓮一般指爵床科植物穿心蓮[Andrographis paniculate（Birm. f.）Ness]的干燥地上部分[1]，藥用葉或全草，秋初莖葉茂盛時(shí)采割，曬干。穿心蓮性寒、味苦，歸心、肺、大腸、膀胱經(jīng)，具有清熱解毒、涼血、消腫之功效，被廣泛用于治療多種感染性疾病及毒蛇咬傷[2-3]?，F(xiàn)代藥理研究表明，穿心蓮還具有抗癌、抗病毒、抗腫瘤及治療糖尿病等作用[4-6]。穿心蓮的主要生物活性成分是二萜內(nèi)酯類和黃酮類，其中以穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的藥理作用最為廣泛。因此，穿心蓮內(nèi)酯與脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量是評(píng)價(jià)穿心蓮藥材質(zhì)量的重要指標(biāo)[7]。由于穿心蓮內(nèi)酯在水溶液中易水解、開環(huán)，異構(gòu)化為脫水穿心蓮內(nèi)酯[8]。為更好地開發(fā)和利用穿心蓮藥材，對(duì)該藥材中脫水穿心蓮內(nèi)酯進(jìn)行薄層色譜鑒別、紫外分析及含量測(cè)定的研究，以期為中藥材穿心蓮的質(zhì)量控制提供技術(shù)參考。

1 材料與方法

1.1 主要儀器與試劑

穿心蓮購(gòu)于河北一禾藥業(yè)有限公司，經(jīng)鄭州工業(yè)應(yīng)用技術(shù)學(xué)院謝新年教授鑒定為爵床科植物穿心蓮的干燥地上部分，粉碎后備用。

對(duì)照品脫水穿心蓮內(nèi)酯（批號(hào)0854-200204，純度≥98%），購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；蒸餾水、超純水，自制；甲醇、乙醇，色譜級(jí)，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；其他所用試劑和溶劑均為分析純。

UV-2550型紫外-可見分光光度計(jì)，日本島津公司；HPLC-1260高效液相色譜儀，美國(guó)安捷倫科技有限公司；DAD檢測(cè)器：安捷倫色譜工作站；色譜柱：SB-C18柱；SQP電子天平，賽多利斯科學(xué)儀器公司；超聲波清洗機(jī)，濟(jì)南巴克超聲波科技有限公司；RE-52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器廠；SHSL調(diào)溫電熱套，常州翔天實(shí)驗(yàn)儀器廠；HH-2數(shù)顯恒溫水浴鍋，常州普天儀器制造有限公司；SHZ-D（Ⅲ）循環(huán)水式多用真空泵，天津華鑫儀器廠；LG10-2.4A離心機(jī)，深圳永業(yè)昌機(jī)電有限公司；FW177中藥粉碎機(jī)，天津市泰斯特儀器有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 提取方法

（1）水提法。取干燥穿心蓮粗粉10.00 g，以蒸餾水為溶劑，電熱套煎煮提取2次，溶劑用量為10倍量，時(shí)間為2.0 h，合并煎煮液，靜置30 min，抽濾，將濾液在水浴鍋上（96 ℃）濃縮成流浸膏，于70 ℃條件下干燥成干浸膏，稱重。

（2）水提醇沉法。取干燥穿心蓮粗粉10.00 g，以蒸餾水為溶劑，回流提取2次，溶劑用量為10倍量，時(shí)間為2.0 h，合并煎煮液，靜置30 min，抽濾，濃縮，加入乙醇使醇含量為60%，靜置24 h，抽濾，濾液濃縮成流浸膏，再干燥成干浸膏，稱重。

（3）醇提法。取干燥穿心蓮粗粉10.00 g，以85%乙醇為溶劑，回流提取2次，溶劑用量為10倍量，時(shí)間為2.0 h，合并煎煮液，抽濾，濾液濃縮成流浸膏，再干燥成干浸膏，稱重。

（3）堿提酸沉法。取干燥穿心蓮粗粉10.00 g，分別用0.5%、0.04%、0.01%的碳酸鈉堿水煎煮提取3次。溶劑用量分別為10、6、4倍量，時(shí)間分別為2.0 h、2.0 h、1.5 h，合并提取液，用鹽酸調(diào)pH至中性，再濃縮干燥成干浸膏，稱重。

（4）超聲提取法。取干燥穿心蓮粗粉10.00 g，加85%的乙醇200 mL，浸泡30 min，超聲處理30 min，過濾，殘?jiān)眠m量85%乙醇洗滌3次，洗液并入濾液中，濃縮干燥成干浸膏，稱重。

1.2.2 紫外分光光度法鑒別

標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備[1]：精密稱定脫水穿心蓮內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)品1.00 mg，加甲醇制成濃度為1 mg/mL的溶液，作為脫水穿心蓮內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

不同提取物樣品供試液的制備[8]：精密稱定不同提取物的干浸膏100 mg，用甲醇溶解并定容至100 mL量瓶中，取上清液，過濾，濾液備用。

1.2.3 高效液相法定量分析

（1）色譜條件。色譜柱：ZORBAX SB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；甲醇-水（體積比52∶48）為流動(dòng)相，流速為1 mL/min；柱溫為25 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm；采集時(shí)間40 min。理論塔板數(shù)按脫水穿心蓮內(nèi)酯計(jì)算應(yīng)不低于2 000，在該條件下可使基線分離良好。

（2）線性關(guān)系的測(cè)定。用甲醇分別將對(duì)照品溶液依次稀釋成 1 000 μg/mL、500 μg/mL、250 μg/mL、125 μg/mL和62.5 μg/mL的系列溶液進(jìn)行分析，以脫水穿心蓮內(nèi)酯的濃度為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為Y=0.646 2X+2 599.6，R2=0.997 3，脫水穿心蓮內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖1，脫水穿心蓮內(nèi)酯在濃度為62.5～1 000 μg/mL時(shí)線性關(guān)系良好。

（3）方法學(xué)驗(yàn)證。對(duì)液相色譜定量分析方法進(jìn)行穩(wěn)定性、精密度以及重現(xiàn)性考察。

圖1 脫水穿心蓮內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)曲線

2 結(jié)果與分析

2.1 紫外分析鑒別結(jié)果

由圖2可以看出，不同提取方法的穿心蓮提取物與脫水穿心蓮內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)品圖譜的最大吸收波長(zhǎng)有重疊，說明不同提取方法的干浸膏中均存在脫水穿心蓮內(nèi)酯。

圖2 與脫水穿心蓮內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)比的紫外光譜圖

2.2 穿心蓮內(nèi)酯含量測(cè)定結(jié)果

由表2可看出超聲法所得脫水穿心蓮內(nèi)酯含量最高。

表1 不同提取方法中脫水穿心蓮內(nèi)酯含量

2.3 含量測(cè)定方法學(xué)驗(yàn)證

2.2.1 穩(wěn)定性測(cè)定

取各提取物干浸膏，按樣品溶液制備方法制備樣品供試液，在12 h內(nèi)，每隔1 h進(jìn)樣測(cè)定1次，結(jié)果見表2。

表2 各提取物穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

2.2.2 精密度考察

精密稱取脫水穿心蓮內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)品1 mg，置于1 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度線，超聲溶解，搖勻。按照“1.2.3”色譜條件進(jìn)行測(cè)定，重復(fù)進(jìn)樣8次，結(jié)果見表3。

表3 各提取物精密度考察數(shù)據(jù)

2.2.3 重現(xiàn)性考察

選擇同一批次的樣品，精密稱量樣品0.1 mg，用甲醇定容于容量瓶中，配制成0.1 mg/mL的樣品溶液。按照“1.2.3”色譜條件，對(duì)樣品測(cè)定5次，結(jié)果見表4。

表4 各提取物重現(xiàn)性考察數(shù)據(jù)

3 結(jié)論

采用水提、醇提、水提醇沉、超聲、堿提酸沉法提取穿心蓮中脫水穿心蓮內(nèi)酯，結(jié)果表明超聲法所得脫水穿心蓮內(nèi)酯含量最高為0.853%；堿提酸沉法中，0.01%堿水提取出來的內(nèi)酯含量較高為0.213%；水提法雖成本低，但提取量少，內(nèi)酯成分幾乎損失殆盡，建議不采用。因此，穿心蓮采用以超聲法和0.01%碳酸鈉堿水回流提取工藝較為合理科學(xué)。