阿克蘇地區(qū)禽流感抗體的檢測(cè)與分析

伍麥爾·麥海提，徐遠(yuǎn)遠(yuǎn)，阿迪萊·卡哈曼，布帕提買木·麥麥提，張秋林，陳薈旭，孫鵬亮，李蓮瑞★

（1.塔里木大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院 843300；2.新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)塔里木動(dòng)物疫病診斷與防控工程實(shí)驗(yàn)室 843300）

禽流感 （avian influenza） 是由禽流感A 型病毒 （avian influenza virus）引起，在各種家禽和野生鳥類中感染的高度接觸性傳染病[1]。 根據(jù)毒性大小，禽流感還可分低致病性和非致病性禽流感[2]。 其中能引起高致病性禽流感的主要為H5 和H7 亞型毒株[3]。H5 和H7 血清型可以引起高致病性禽流感，以高發(fā)病率，高死亡率為主要特征，并且這兩種血清型的病毒能夠在禽與禽，禽與人，人與人之間快速傳播，不管是禽類還是人類被傳染后都存在高燒持續(xù)不退的癥狀，甚至比較嚴(yán)重可能會(huì)就此喪命[4]。 因此，家禽進(jìn)行禽流感抗體的檢測(cè)對(duì)預(yù)防禽流感的暴發(fā)至關(guān)重要。

本實(shí)驗(yàn)為了準(zhǔn)確掌握阿克蘇地區(qū)H5 和H7 亞型禽流感強(qiáng)制免疫效果，取阿克蘇地區(qū)八個(gè)縣一個(gè)市的屠宰場(chǎng)、交易市場(chǎng)、散養(yǎng)農(nóng)戶以及規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)家禽血清并檢測(cè)其抗體水平。 通過這一環(huán)節(jié)，始終掌握禽流感的最新動(dòng)態(tài)，將預(yù)防放在首位，對(duì)免疫狀況較差的禽類進(jìn)行補(bǔ)免， 為后續(xù)免疫程序提供精準(zhǔn)的指導(dǎo)與計(jì)劃，從而更好的預(yù)防和控制禽流感的暴發(fā)供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 樣品采集 2020 年，從阿克蘇地區(qū)8 縣1 市的規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)、屠宰場(chǎng)、交易市場(chǎng)和散養(yǎng)戶的家禽中采集血清。 在取樣過程中，采集者應(yīng)清楚并完整的記錄從哪采集的家禽、家禽的免疫情況、各個(gè)地方家禽血清采集的數(shù)量，以便為后期免疫提供準(zhǔn)確方向。

1.1.2 主要試劑 H5、H7 亞型禽流感病毒的標(biāo)準(zhǔn)抗原、陰性和陽性血清均購(gòu)自哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司； 在無菌條件下，健康的公雞血液用肝素進(jìn)行抗凝，1%的紅細(xì)胞懸液按常規(guī)制備和儲(chǔ)存，以備后續(xù)使用。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 血凝（HA）試驗(yàn)（微量法） 在微量反應(yīng)板的第1～12 孔均加入0.025mL PBS，換滴頭。吸取0.025mL 抗原，加入第1 孔混勻。 從第一孔吸取0.025mL 抗原液加入第2 孔。 混勻后吸取0.025mL 加入第3 孔，如此進(jìn)行對(duì)比稀釋至第11 孔，從第11 孔吸取0.025mL 棄之，換滴頭。每孔再加入0.025mL PBS。每孔均加入0.025mL 體積分?jǐn)?shù)為1%雞紅細(xì)胞懸液。 振蕩混勻， 在室溫（20℃～25℃）下靜置40min 后觀察結(jié)果（如果環(huán)境溫度太高，可置4℃環(huán)境下）。 對(duì)照孔紅細(xì)胞將成明顯的鈕扣狀沉到孔底。

結(jié)果判定:將板傾斜，觀察紅細(xì)胞有無淚滴狀流淌。 完全血凝（不流淌）的抗原最高稀釋倍數(shù)代表1 個(gè)血凝單位（HAU）。 本試驗(yàn)的一個(gè)血凝單位為1∶256。

1.2.2 血凝抑制（HI）試驗(yàn)（微量法） 根據(jù)2.1 試驗(yàn)結(jié)果配制4HAU 的抗原，以完全血凝的抗原最高稀釋倍數(shù)作為終點(diǎn)，終點(diǎn)稀釋倍數(shù)除以4 即為含4HAU 的抗原的稀釋倍數(shù)。 例如，如果血凝的終點(diǎn)滴定為1∶256，則4HUA 抗原的稀釋倍數(shù)應(yīng)是1∶64（256除以4）。 在微量反應(yīng)板的第1～11 孔加入0.025mL PBS，第12 孔加入0.05mL PBS。吸取0.025mL 血清加入第1 孔。充分混勻后吸取0.025mL 加入第2 孔，依次對(duì)倍稀釋至第10 孔，從第10 孔吸取0.025mL 棄 之。 1 ～11 孔 均 加 入 含4HAU 混 合 的 抗 原 液0.025mL，室溫約20℃靜置至少30min。每孔加入0.025mL 體積分?jǐn)?shù)為1%的雞紅細(xì)胞懸液混勻，輕輕混勻，靜置約40min（室溫約20℃，若環(huán)境溫度太高可治4℃條件下進(jìn)行），對(duì)照紅細(xì)胞將呈現(xiàn)鈕扣狀沉于孔底。

結(jié)果判定:以完全抑制4 個(gè)HAU 抗原的血清最高稀釋倍數(shù)作為HI 滴度。 如果HI≤3log2，抗體為陰性。HI≥4log2 為抗體陽性，符合抗體標(biāo)準(zhǔn)。

3 結(jié)果與分析

3.1 2020 年春季規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)禽流感免疫抗體水平

表1 2020 年春季規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)禽流感免疫抗體水平監(jiān)測(cè)情況

從表1 的檢驗(yàn)結(jié)果顯示，2020 年采自春季阿克蘇地區(qū)規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)中的家禽血清， 在H5 亞型禽流感免疫抗體檢測(cè)中，除了阿克蘇市H5 亞型禽流感免疫抗體合格率為90%以外，其他八個(gè)縣H5 亞型禽流感免疫抗體合格率均為100%，免疫效果較好；在H7 亞型禽流感免疫抗體檢測(cè)中，沙雅縣的H7 亞型禽流感免疫抗體合格率極低（55%）。其次，新和縣的H7 亞型禽流感免疫抗體合格率為95%，阿克蘇市是90%，其他縣H7 亞型禽流感抗體免疫良好。

3.2 2020 年春季屠宰場(chǎng)禽流感免疫抗體水平

表2 2020 年春季屠宰場(chǎng)禽流感免疫抗體水平監(jiān)測(cè)情況

從表2 的檢測(cè)結(jié)果顯示，2020 年春季采自阿克蘇地區(qū)屠宰場(chǎng)中的家禽血清，在H5 亞型禽流感免疫抗體檢測(cè)中，除了溫宿縣H5 亞型禽流感免疫抗體合格率為90%以外，其他七個(gè)縣一個(gè)市H5 亞型禽流感免疫抗體合格率均為100%，免疫效果較好；在H7 亞型禽流感免疫抗體檢測(cè)中， 沙雅縣和新和縣的H7 亞型禽流感免疫抗體合格率較低，分別為40%和75%。 溫宿縣與阿瓦提縣的H7 亞型禽流感免疫抗體合格率為95%，低于其他H7 亞型禽流感免疫抗體合格率100%的縣市。

3.3 2020 年春季散養(yǎng)戶禽流感免疫抗體水平

表3 2020 年春季散養(yǎng)戶禽流感免疫抗體水平監(jiān)測(cè)情況

從表3 的檢測(cè)結(jié)果顯示，2020 年春季采自阿克蘇地區(qū)散養(yǎng)戶的家禽血清，在H5 亞型禽流感免疫抗體檢測(cè)中，除了阿瓦提略低外，總體的免疫效果還是比較良好的；在H7 亞型禽流感免疫抗體檢測(cè)中，沙雅（60%）、新和（70%）、阿瓦提（75%）偏低，有待于進(jìn)一步補(bǔ)免，其他縣市免疫效果良好。

3.4 2020 年春季交易市場(chǎng)禽流感免疫抗體水平

表4 2020 年春季交易市場(chǎng)禽流感免疫抗體水平監(jiān)測(cè)情況

從表4 的檢測(cè)結(jié)果顯示，2020 年春季采自阿克蘇地區(qū)交易市場(chǎng)的家禽血清，在H5 亞型禽流感免疫抗體檢測(cè)中，新和縣的H5 亞型禽流感免疫情況還有待加強(qiáng)， 阿瓦提的H5 亞型禽流感出現(xiàn)了很明顯的免疫不合格問題，應(yīng)提醒注意防患；在H7 亞型禽流感免疫抗體檢測(cè)中，沙雅縣和阿瓦提縣免疫效果仍然不佳，拜城縣的免疫情況也需加強(qiáng)。

3.5 2020 年春季H5 亞型禽流感免疫抗體水平

表5 2020 年春季H5 亞型禽流感免疫抗體監(jiān)測(cè)情況匯總

從表5 的檢測(cè)結(jié)果顯示，2020 年春季采自阿克蘇地區(qū)的家禽血清，總體來看，H5 亞型禽流感免疫抗體獲得情況良好。 但有個(gè)別縣免疫效果沒有達(dá)到100%，新和縣、阿克蘇市、溫宿縣、阿瓦提縣免疫過程可能進(jìn)行的不完善，需要進(jìn)一步加強(qiáng)免疫。

3.6 2020 年春季H7 亞型禽流感免疫抗體水平

表6 2020 年春季H7 亞型禽流感免疫抗體監(jiān)測(cè)情況匯總

從表6 的檢測(cè)結(jié)果顯示，2020 年春季采自阿克蘇地區(qū)的家禽血清，H7 亞型禽流感免疫抗體的獲得情況較差。 其中，沙雅縣對(duì)于H7 亞型禽流感的免疫抗體獲得情況極差，需及時(shí)進(jìn)行補(bǔ)免措施。 結(jié)合表5 分析，庫(kù)車、烏什以及柯坪縣對(duì)禽流感的防控很好；沙雅、阿瓦提縣需要防范禽流感的潛在威脅。

4 討論

本次監(jiān)測(cè)結(jié)果顯示， 阿克蘇地區(qū)8 個(gè)縣和1 個(gè)市的禽流感整體免疫效果較好， 少數(shù)縣H7 亞型禽流感的免疫效果仍需加強(qiáng)，應(yīng)盡早加強(qiáng)免疫，以抵抗野生毒株的感染。 本試驗(yàn)結(jié)果表明，不同飼養(yǎng)條件下的免疫效果具有些許差異。 禽流感抗體水平在規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)是最高的。 造成這種現(xiàn)象的原因可能是規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)的衛(wèi)生環(huán)境干凈整潔，通風(fēng)系統(tǒng)良好，管理水平高，免疫程序合理，因此，規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)的禽流感抗體水平最高；屠宰場(chǎng)的禽流感抗體水平較好， 出現(xiàn)這種現(xiàn)象原因可能是屠宰場(chǎng)中一般是肉用雞以及淘汰蛋雞，肉雞養(yǎng)殖周期比較短，因此免疫數(shù)量較少，可能存在禽流感病毒；散養(yǎng)戶的禽流感抗體水平普遍較低，形成這種現(xiàn)象的原因可能是散戶飼養(yǎng)數(shù)量少， 對(duì)免疫接種的重要性沒有得到很深的認(rèn)識(shí)；交易市場(chǎng)的禽流感抗體水平也一般，形成這種現(xiàn)象的原因可能是交易市場(chǎng)主要從事為規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)和散養(yǎng)戶銷售飼養(yǎng)的家禽，造成抗體水平不平均，流動(dòng)性高，禽流感傳播的可能性高。 因此，需要做好禽流感的免疫工作以知道及時(shí)進(jìn)行調(diào)查處理。 除此之外，在免疫中需要注意以下方面，疫苗應(yīng)妥善保存，防止應(yīng)保存不當(dāng)而降低免疫原性；選擇合適的天氣條件，按疫苗接種規(guī)定使用培養(yǎng)箱；避免免疫時(shí)的繁重工作，以避免防疫人員在追求速度的時(shí)忽略質(zhì)量，降低免疫效果；注射用針頭避免倒刺，以防止注射部位感染，影響免疫應(yīng)答[5]。

5 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)為了監(jiān)測(cè)阿克蘇地區(qū)禽流感免疫抗體水平， 通過采集阿克蘇地區(qū)的家禽血清， 采用血凝和血凝抑制法檢測(cè)禽流感免疫抗體。結(jié)果顯示，目前，阿克蘇地區(qū)H5 亞型禽流感免疫抗體合格率良好，可以再更一步完善和提高；但是，部分縣對(duì)于H7 亞型禽流感的接種情況較差，易造成禽流感暴發(fā)的潛在可能性。 在這項(xiàng)研究中，通過抗體水平檢測(cè)，及時(shí)反饋各養(yǎng)雞場(chǎng)，并指導(dǎo)補(bǔ)免加強(qiáng)和后期監(jiān)測(cè)， 可以使得免疫不格的雞場(chǎng)的抗體陽性率有大幅度提升，起到了良好的預(yù)警作用和指導(dǎo)作用[6]。