鹿胎粉對(duì)雌性小鼠免疫功能肝臟抗氧化功能的影響

王麗梅， 何紹港， 龍析宇， 路 通， 周海盟， 何玉華， 孫學(xué)釗

(1. 吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院 反芻動(dòng)物精準(zhǔn)營(yíng)養(yǎng)及智慧養(yǎng)殖科技創(chuàng)新中心， 吉林左家132109 ; 2.吉林省反芻動(dòng)物精準(zhǔn)營(yíng)養(yǎng)與智慧生態(tài)養(yǎng)殖跨區(qū)域合作科技創(chuàng)新中心， 吉林左家132109)

鹿胎是從懷孕母鹿腹中取出的整個(gè)子宮，里面包括成形小鹿，連同胎衣、羊水，以酒浸，整形，烘烤，風(fēng)干即為鹿胎[1]。將鹿胎以煎煮，焙炒，粉碎，加紅糖熬制，即為鹿胎膏。鹿胎是非常珍貴的藥材，鹿胎中所含的營(yíng)養(yǎng)成分較多，富含蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸、雌激素、維生素、礦物質(zhì)等，所含有的賴氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、蘇氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、纈氨酸，而且氨基酸成分與人胎盤相近[2]，能夠補(bǔ)氣、補(bǔ)血，具有調(diào)理內(nèi)分泌的功效，對(duì)婦女經(jīng)期紊亂、宮冷難孕等癥有很好的療效[1]。

本試驗(yàn)將不同水平的鹿胎蛋白對(duì)小鼠進(jìn)行灌服，觀測(cè)其對(duì)小鼠的生長(zhǎng)性能、生殖器官指數(shù)、血清性激素水平、抗炎因子的影響，探討梅花鹿胎盤在小鼠上應(yīng)用的效果，為梅花鹿胎盤產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)奠定基礎(chǔ)，為梅花鹿胎盤的藥用功能提供更加精準(zhǔn)的數(shù)據(jù)支持。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 梅花鹿鹿胎干粉，購(gòu)自吉林吉春制藥股份有限公司。IgG、IgA、IgM試劑盒，購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及飼養(yǎng)管理 選擇100只體重為(20±2) g 的4周齡清潔級(jí)昆明雌性小鼠，購(gòu)自江蘇省協(xié)同醫(yī)藥生物工程有限責(zé)任公司。飼養(yǎng)室溫度為25 ℃，濕度為30%～45%，自由采食和飲水。

1.3 試驗(yàn)儀器 懸掛式小鼠籠(HL-XG，合力科創(chuàng))、小鼠籠架(HL-XG，合力科創(chuàng))、小鼠用耳標(biāo)、耳號(hào)鉗(ST101，美國(guó) CLARKBIO)、手術(shù)剪(9.5 cm直頭，上海紅尊醫(yī)療器械有限公司)、采血管(10 mL，泰州民健醫(yī)療器械有限公司)、手術(shù)刀、移液器等實(shí)驗(yàn)室常用器械。

1.4 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 將100只小鼠隨機(jī)分成A、B、C、D、E共5組，每組20 只，A組作為對(duì)照組，B、C、D、E為試驗(yàn)組，用鹿胎粉對(duì)小鼠灌服，劑量分別為0 mg/(kg·bw)、20 mg/(kg·bw)、40 mg/(kg·bw)、80 mg/(kg·bw)、 160 mg/(kg·bw)，連續(xù)灌服21 d。

1.5 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.5.1 血清生化指標(biāo) 試驗(yàn)結(jié)束的最后1天早上6：00，每組隨機(jī)取4只小鼠進(jìn)行摘眼球釆血，采完之后將采血管在4 ℃冰箱中過(guò)夜，于第2天3 000 r/min離心5 min，然后用移液器吸取血清裝在1.5 mL的離心管中，于-20 ℃的條件下保存。

免疫球蛋白的測(cè)定：IgG、IgA、IgM的測(cè)定用試劑盒(免疫透射比濁法)，操作步驟完全按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.5.2 器官指數(shù) 試驗(yàn)結(jié)束的最后1天早上8：00頸椎脫臼處死小鼠，然后馬上解剖并釆集胸腺、脾臟、肝臟，剔除其上面的結(jié)締組織及脂肪組織后稱量重量，分別計(jì)算各個(gè)器官的指數(shù)。

器官指數(shù)(mg/g)=器官重/體重

1.5.3 肝臟抗氧化功能 取小鼠的肝臟，按文獻(xiàn)方法測(cè)定超氧化物歧化酶(SOD)活性、過(guò)氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量[3]。

1.6 數(shù)據(jù)分析 所得數(shù)據(jù)采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤來(lái)表示，數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析用 SPSS 20.0 軟件處理。

2 結(jié)果

2.1 鹿胎粉對(duì)小鼠免疫器官指數(shù)的影響 從表1可知，灌服鹿胎粉后，胸腺指數(shù)升高，D組、E組與其他各組相比差異顯著(P<0.05)；胸臟指數(shù)先升高后降低，C組最高且與其他各組相比差異顯著(P<0.05)；肝臟指數(shù)無(wú)顯著變化。

表1 鹿胎粉對(duì)小鼠免疫器官指數(shù)的影響Table 1 Effect of deer fetal powder on immune organ index of mice (mg/g)

2.2 鹿胎粉對(duì)小鼠血清免疫球蛋白的影響 從表2可知，灌服鹿胎粉后血清中的IgG、IgA、IgM含量呈現(xiàn)升高的趨勢(shì)，但差異不顯著(P>0.05)。

2.3 鹿胎粉對(duì)小鼠肝臟抗氧化功能的影響 從表3可知，小鼠肝臟中SOD、CAT、GSH-Px的活性逐漸升高，E組最高，與其對(duì)照組相比差異顯著(P<0.05)；MDA的含量逐漸降低，D組、E組最低，與其他各組相比差異顯著(P<0.05)。

表2 鹿胎粉對(duì)小鼠血清免疫球蛋白的影響Table 2 Effect of fetal powder on serum immunoglobulin of mice (g/L)

表3 鹿胎粉對(duì)小鼠肝臟抗氧化功能的影響Table 3 Effect of deer fetal powder on antioxidant function of mouse liver

3 討論

3.1 鹿胎粉對(duì)小鼠免疫功能的影響 胸腺和脾臟是動(dòng)物體的免疫器官，其指數(shù)的高低體現(xiàn)了動(dòng)物機(jī)體免疫機(jī)能的強(qiáng)弱[4]。IgG、IgA、IgM是主要的免疫球蛋白，血清中IgG、IgA、IgM的水平反應(yīng)動(dòng)物機(jī)體的免疫力和抵抗疾病的能力[5]。本試驗(yàn)灌服鹿胎粉后，胸腺指數(shù)升高，D組、E組與A組、B組、C組相比差異顯著(P<0.05)；脾臟指數(shù)升高，C組最高且與其余各組相比差異顯著(P<0.05)；肝臟指數(shù)無(wú)顯著變化。血清中的IgG、IgA、IgM含量呈現(xiàn)升高的趨勢(shì)，但差異不顯著(P>0.05)。

趙國(guó)財(cái)?shù)萚6]給老年雌性大鼠的飲用水中添加鹿胎制劑，結(jié)果表明，鹿胎制劑能夠提高老年雌性大鼠血清中的總蛋白含量，提高了其免疫功能。魏力等[7-8]的研究表明，鹿胎制劑對(duì)足趾腫脹炎性模型大鼠、腹腔滲出性炎性模型小鼠具有一定的抗炎作用；鹿胎膠囊與軟膠囊可有效緩解小鼠炎性疼痛與痛經(jīng)性疼痛反應(yīng)，且不影響投藥小鼠子宮組織的病理學(xué)改變。冷愛(ài)晶等[9]用鹿胎顆粒治療痛經(jīng)84例的結(jié)果表明，以鹿胎為主要原料的鹿胎顆?？梢栽鰪?qiáng)體質(zhì)，對(duì)內(nèi)分泌具有調(diào)節(jié)功能，并且可增強(qiáng)機(jī)體的免疫力。

3.2 鹿胎粉對(duì)小鼠抗氧化功能的影響 MDA是膜脂過(guò)氧化過(guò)程中最重要的產(chǎn)物之一，它的產(chǎn)生可以加劇膜的損傷，所以在抗性生理和衰老生理的研究方面，MDA的含量是一個(gè)非常重要的指標(biāo)[10]。SOD可以清除生物體在新陳代謝過(guò)程中產(chǎn)生的過(guò)氧化的產(chǎn)物[11]。對(duì)人體不斷地補(bǔ)充SOD具有抗衰老的特殊效果。CAT的作用是使過(guò)氧化氫還原成水。GSH-Px是機(jī)體內(nèi)廣泛存在的一種重要的催化過(guò)氧化氫分解的酶。

以鹿胎為核心成分的制劑具有抗衰老、抗氧化、活血化瘀等功效[1]。我國(guó)應(yīng)用鹿胎作為中藥治療疾病已有很長(zhǎng)歷史[12]。本試驗(yàn)的結(jié)果顯示，小鼠肝臟中SOD、CAT、GSH-Px的活性逐漸升高，E組最高，與其對(duì)照組相比差異顯著(P<0.05)；MDA的含量逐漸降低，D組、E組最低，與其他各組相比差異顯著(P<0.05)。

孫蘭等[13]的研究結(jié)果表明，以馬鹿胎為主的沖擊可以清除雄果蠅血清的過(guò)氧化物自由基，能夠延緩衰老。孫德珍等[14]的研究表明，鹿胎口服液也具有抗氧化的作用。金巖等[15]用鹿胎膏治療圍絕經(jīng)期失眠癥32 例的結(jié)果表明，鹿胎膏對(duì)失眠有一定的治療效果。鄒興淮等[16]的研究表明，鹿胎及胎盤制劑通過(guò)降低老年雄性大鼠腦和肝臟中單胺氧化酶活性對(duì)老年雄性大鼠具有延緩衰老的作用。