結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)在風(fēng)濕性疾病潛伏性結(jié)核篩檢中的應(yīng)用

宮肇玉，李丹，孫錫芹，康歡

（吉林市人民醫(yī)院，吉林 吉林 130021）

0 引言

結(jié)核病作為臨床上常見(jiàn)的慢性傳染病，主要是由結(jié)核分枝桿菌引起的，常見(jiàn)于接受免疫抑制治療、免疫力低下的人群中，風(fēng)濕性疾病患者常伴隨免疫系統(tǒng)障礙，且在生物制劑大范圍應(yīng)用的背景下，風(fēng)濕性疾病患者出現(xiàn)活動(dòng)性結(jié)核的風(fēng)險(xiǎn)與日俱增，所以臨床需要加強(qiáng)風(fēng)濕性潛伏性結(jié)核的篩檢。一直以來(lái)我國(guó)都采用結(jié)核菌素皮試試驗(yàn)對(duì)潛伏性結(jié)核感染進(jìn)行病情檢測(cè)，但是其檢測(cè)結(jié)果會(huì)受到多種因素的影響，如結(jié)核病史、卡介苗接種、免疫抑制劑應(yīng)用等，在這一醫(yī)學(xué)背景下，結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)應(yīng)運(yùn)而生，在該試驗(yàn)主要是檢測(cè)結(jié)核感染后T淋巴細(xì)胞分泌的INF-α，以此來(lái)診斷患者是否存在結(jié)核感染的情況，相較于結(jié)核菌素皮試試驗(yàn)，結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)不易受到外界干擾，診斷準(zhǔn)確率、敏感度、特異度較高[1]。本文主要以我院2019年內(nèi)收錄的62例疑似風(fēng)濕性疾病潛伏性結(jié)核感染患者作為研究樣本，探究結(jié)核感染T細(xì)胞試驗(yàn)的臨床篩檢價(jià)值，以供有關(guān)人士參考，現(xiàn)將報(bào)道數(shù)據(jù)整理如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料。本文病例樣本均來(lái)源于我院2019年1月至12月疑似風(fēng)濕性疾病潛伏性感染患者，入選標(biāo)準(zhǔn)為患者符合風(fēng)濕性疾病的診斷標(biāo)準(zhǔn)，且開(kāi)展免疫制劑治療，存在BCG接種史，在收錄患者資料數(shù)據(jù)時(shí)，排除重大器質(zhì)性病變、資料數(shù)據(jù)不完整、中途退出研究試驗(yàn)、不愿加入到此次研究項(xiàng)目的病例樣本。62例患者中男35例，女27例，年齡29～69歲，平均（44.87±2.31）歲，此次研究試驗(yàn)的進(jìn)行獲得了倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法。本文所有受檢者均接受結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)，試劑盒的提供廠家為上海復(fù)星醫(yī)藥股份有限公司，其具體的檢測(cè)流程如下，首先需要用抗凝管采集受檢者的外周靜脈血液，抗凝試劑主要為肝素，之后開(kāi)展密度梯度離心操作，將外周血單個(gè)核細(xì)胞實(shí)施分離，在被抗特異性的細(xì)胞因子干擾素的抗體中將陽(yáng)性對(duì)照物血凝素加入到微量板的孔內(nèi)，其中將細(xì)胞培養(yǎng)液作為陰性對(duì)照[2]。其次，在孔內(nèi)滴入外周血單個(gè)核細(xì)胞，濃度主要為2×105，將其放在含有二氧化碳?xì)怏w的培養(yǎng)箱中進(jìn)行孵育，培養(yǎng)箱的溫度數(shù)值維持在37℃，孵育時(shí)間維持在16～20 h。再次，臨床需要開(kāi)展PBS的洗脫處理，之后向其內(nèi)部加入堿性磷酸酶，作用于抗γ干擾素抗體中予以標(biāo)記，這時(shí)應(yīng)該將培養(yǎng)箱的溫度調(diào)整至4℃，孵育時(shí)間為2 h，在PBS顯色后洗脫終止。在判定結(jié)果陰陽(yáng)性時(shí)，需要借助人工放大型來(lái)檢查孔內(nèi)的斑點(diǎn)數(shù)，在陰性對(duì)照孔內(nèi)斑點(diǎn)生成的細(xì)胞數(shù)量在6個(gè)以下，而檢測(cè)孔內(nèi)細(xì)胞數(shù)量＞6個(gè)，可說(shuō)明最終檢測(cè)的標(biāo)本為陽(yáng)性，如果陰性對(duì)照組孔內(nèi)斑點(diǎn)生成的細(xì)胞≥6個(gè)，檢測(cè)孔內(nèi)形成的細(xì)胞數(shù)量是對(duì)照孔的2倍，則說(shuō)明所測(cè)標(biāo)本為陽(yáng)性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。將本文所示的資料數(shù)據(jù)輸入到SPSS.23中進(jìn)行處理，此次指標(biāo)在臨床上計(jì)數(shù)資料表示，開(kāi)展卡方檢驗(yàn)，結(jié)果表現(xiàn)為百分比，組間數(shù)據(jù)是否存在差異以P值予以判定，P＜0.05證明組間數(shù)據(jù)差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 兩組最終檢測(cè)結(jié)果對(duì)比。結(jié)核桿菌T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性的38例，陽(yáng)性率為61.29%，結(jié)核菌素皮試試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性的20例，陽(yáng)性率為32.25%，最終經(jīng)病理診斷，患有結(jié)核病患者一共為40例，結(jié)核桿菌T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)最終檢測(cè)的陽(yáng)性率與金標(biāo)準(zhǔn)相似，組間數(shù)據(jù)以P＞0.05顯示。在敏感性、特異性與陽(yáng)性預(yù)測(cè)值中，結(jié)核桿菌T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)的敏感性、特異性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值分別為95.8%、95%、75.2%。

2.2 BCG接種對(duì)兩組檢測(cè)結(jié)果的影響。選取無(wú)接種史的68例患者作為對(duì)照，接受結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)的患者，接種BCG的陽(yáng)性率為61.29%，未接種BCG陽(yáng)性率為35/62（56.45%），接種BCG患者與未接種BCG患者相比無(wú)明顯差異（P＞0.05）。

2.3 免疫抑制治療對(duì)兩組檢測(cè)結(jié)果的影響。選擇未接受免疫治療的68例患者作為對(duì)照，結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)不易受到免疫抑制治療的影響，接受免疫抑制治療與未接受免疫抑制治療的兩組受檢者不存在顯著差異（P＞0.05）。

3 討論

潛伏性結(jié)核一直以來(lái)是臨床診治難點(diǎn)，該疾病主要是指患者的體內(nèi)存在結(jié)核桿菌，但是在臨床上尚未出現(xiàn)特異性癥狀。結(jié)核病人的痰液中常檢測(cè)出結(jié)核病菌，通過(guò)打噴嚏、咳嗽會(huì)將結(jié)核桿菌排出體外，使得一些密切接觸者出現(xiàn)感染，而潛伏期感染由于痰液中通常不會(huì)帶有結(jié)核菌，且不具有臨床癥狀，所以不會(huì)引發(fā)感染，但是潛伏性結(jié)核菌患者在持續(xù)感染下會(huì)發(fā)病，對(duì)患者的機(jī)體健康造成損害，所以臨床需要加強(qiáng)疾病的診斷，以便治療方案的科學(xué)制定。

風(fēng)濕性疾病是中老年患者常見(jiàn)的臨床疾病，主要以關(guān)節(jié)痛、畏寒作為主要臨床癥狀，會(huì)對(duì)患者骨、關(guān)節(jié)、肌肉、筋膜、血管、神經(jīng)造成影響，多數(shù)風(fēng)濕病患者屬于自身免疫性疾病，在免疫系統(tǒng)異常的情況下，更易感染結(jié)核病，所以當(dāng)前應(yīng)將風(fēng)濕性患者作為潛伏性結(jié)核重點(diǎn)篩檢對(duì)象[3]。以往我國(guó)在進(jìn)行風(fēng)濕性疾病潛伏性結(jié)核篩檢中主要采用結(jié)核菌素皮試試驗(yàn)，但是其檢測(cè)結(jié)果受到多種因素的影響，出現(xiàn)漏診、誤診的情況，所以當(dāng)前提倡采用結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)，該試驗(yàn)中是以結(jié)核特異的混合抗原A、抗原B刺激結(jié)核桿菌感染外周血單核細(xì)胞內(nèi)的結(jié)核特異性活化T淋巴細(xì)胞分泌的γ干擾素，之后采用ELISPOT方法開(kāi)展檢測(cè)，通過(guò)統(tǒng)計(jì)結(jié)核桿菌反應(yīng)效應(yīng)中的T細(xì)胞數(shù)量，輔助診斷患者是否存在結(jié)核桿菌感染，相較于結(jié)核菌素皮試試驗(yàn)的診斷靈敏度與特異度更高，但是要注意結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)不屬于金標(biāo)準(zhǔn)，其屬于定性檢測(cè)，敏感性以及特異性的數(shù)值分別分布在95.3%～98.8%、94.1%～100%[4]，雖然的結(jié)核感染T淋巴細(xì)胞斑點(diǎn)實(shí)驗(yàn)的特異性較高，但是在進(jìn)行臨床診斷時(shí)具有較高的成本，所以我國(guó)為了進(jìn)一步推廣結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)，需要適當(dāng)降低其篩檢成本。

依據(jù)檢測(cè)結(jié)果，針對(duì)確診的結(jié)核病患者需要制定相應(yīng)的治療方案，其中藥物治療是改善患者病情的重要手段，臨床一線采用的抗結(jié)核藥物有利福平、異煙肼、乙胺丁醇、鏈霉素等[5]，這些藥物可以有效清除患者機(jī)體內(nèi)的結(jié)核桿菌，為了起到疾病治愈的效果，需要在病情確診后進(jìn)行及時(shí)用藥，為了提高藥物的治療效果，可以聯(lián)合應(yīng)用兩種以上的治療藥物，通過(guò)藥物協(xié)同作用提高臨床療效，并且要詳細(xì)告知患者用藥方法與用藥量，通過(guò)堅(jiān)持治療來(lái)達(dá)到疾病的治愈效果。除臨床治療之外，患者需要定期前往醫(yī)院進(jìn)行復(fù)查，如果在用藥期間出現(xiàn)消化道反應(yīng)、視力減退等不適癥狀，需要立即前往醫(yī)院進(jìn)行就醫(yī)，依據(jù)醫(yī)生的醫(yī)囑逐漸縮減用藥量[4]。除此之外，患者在日常生活中應(yīng)該正確看待結(jié)核病，快速適應(yīng)自身病人的角色，以此來(lái)消除患者負(fù)面心理，主動(dòng)配合患者予以治療，平時(shí)要注意休息，在病情有所緩解后應(yīng)該加強(qiáng)體育鍛煉，增強(qiáng)身體抵抗力與免疫力，在飲食方面應(yīng)該進(jìn)行合理膳食，確保營(yíng)養(yǎng)的均衡性，平時(shí)最好以蛋白質(zhì)食物為主，增加豬肉、牛肉、羊肉、雞蛋的攝入量，并且要向機(jī)體內(nèi)補(bǔ)充新鮮的果蔬與堅(jiān)果，確保患者機(jī)體有充足的營(yíng)養(yǎng)作為供應(yīng)，加快疾病的康復(fù)[6-7]。

綜上所述，風(fēng)濕性疾病潛伏性結(jié)核篩檢中采用結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)的陽(yáng)性率、特異度、靈敏度明顯較高，且不易受到BCG接種與免疫抑制劑治療的影響，可以有效降低疾病漏診、誤診的風(fēng)險(xiǎn)，為臨床治療方案的制定提供科學(xué)的參考意見(jiàn)，因此結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)值得臨床進(jìn)一步應(yīng)用與推廣。雖然此次研究取得了預(yù)期研究結(jié)果，但是存在病例樣本數(shù)少、研究時(shí)間短等缺陷，文章結(jié)果存在偶然性，所以期待在后續(xù)研究中增加樣本量，開(kāi)展長(zhǎng)時(shí)間的樣本研究，加大文正證明力度，凸顯結(jié)合感染T淋巴細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)在風(fēng)濕性疾病潛伏性結(jié)核篩檢中的應(yīng)用價(jià)值。