甲狀腺激素免疫學(xué)檢測(cè)研究的新進(jìn)展

肖立嬌（天津市北辰醫(yī)院,天津 300400）

1 概述

RIA技術(shù)的發(fā)展主要分為五代，第一代為Yalow、Berson創(chuàng)建，主要應(yīng)用了競(jìng)爭(zhēng)抑制免疫反應(yīng)原理，使醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)史進(jìn)入了新紀(jì)元；第二代的主要標(biāo)志為游離標(biāo)記抗原分離技術(shù)、抗原-抗體復(fù)合物；第三代的主要標(biāo)志為半抗原制備抗體技術(shù)；第四代的主要標(biāo)志為單克隆技術(shù)、固相載體材料；第五代的主要標(biāo)志為抗體固相化，為全自動(dòng)分析打下了基礎(chǔ)[1]。此外，以RIA理論為基礎(chǔ)，還陸續(xù)出現(xiàn)了電化學(xué)發(fā)光免疫法（ECLIA）、酶聯(lián)免疫分析法（EIA）等檢測(cè)分析技術(shù)，不僅提高了檢測(cè)靈敏度、特異性，且制備簡(jiǎn)易、無污染、有效期長(zhǎng)、自動(dòng)化程度高，在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用[2]。

2 免疫學(xué)檢測(cè)方法分析

2.1 RIA技術(shù) RIA技術(shù)為1959年由Yalow等人建立，成為臨床檢驗(yàn)及定量分析的革命性技術(shù)，為生物醫(yī)學(xué)發(fā)展做出了重要貢獻(xiàn)。RIA主要通過對(duì)抗原或抗體應(yīng)用放射性核素標(biāo)記，并使其與待測(cè)抗原或抗體結(jié)合，檢測(cè)其復(fù)合物。目前，國(guó)內(nèi)部分實(shí)驗(yàn)室仍應(yīng)用RIA試劑盒進(jìn)行游離三碘甲狀腺原氨酸（FT3）、游離甲狀腺素（FT4）、促甲狀腺激素（TSH）等指標(biāo)測(cè)定[3]。該檢測(cè)方法不僅靈敏度、特異性高，且精密度好，對(duì)多種微量蛋白、激素、腫瘤標(biāo)志物均能進(jìn)行準(zhǔn)確檢測(cè)[4-5]。同時(shí)，由于其設(shè)備要求不高、操作簡(jiǎn)單、成本低廉，因此，它是基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)應(yīng)用最多的超微量物質(zhì)檢測(cè)方法，也是部分激素檢測(cè)的“金標(biāo)準(zhǔn)”。但該檢測(cè)方法也存在一定不足，主要表現(xiàn)為自動(dòng)化程度低、試劑盒不易儲(chǔ)存、放射性污染等，因此，該技術(shù)也逐漸被其他新檢測(cè)技術(shù)所取代[6]。

2.2 EIA技術(shù) EIA技術(shù)最早出現(xiàn)于1966年，在酶的高效催化作用下，促使抗原和抗體特異性免疫反應(yīng)，并使用特定的酶標(biāo)記，形成可用于示蹤的免疫酶，通過觀察其顯色程度，對(duì)待測(cè)物進(jìn)行分析。與RIA技術(shù)相比，EIA技術(shù)不僅設(shè)備簡(jiǎn)單，操作安全，同時(shí)也克服了其放射性污染的問題。但該技術(shù)測(cè)量范圍窄、酶穩(wěn)定性不足、不易定量分析、靈敏度偏低，因此限制了其臨床應(yīng)用。直到1971年，有學(xué)者對(duì)EIA技術(shù)進(jìn)行了改進(jìn)，使用酶代替核素標(biāo)記，即酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA），該技術(shù)的特點(diǎn)在于操作簡(jiǎn)單、穩(wěn)定性及安全性好、靈敏度及特異度高、自動(dòng)化程度高[7]。有研究利用ELISA法進(jìn)行抗甲狀腺過氧化物酶抗體的定量分析，結(jié)果顯示靈敏度、特異度較高，適合基層實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用[8]。也有學(xué)者對(duì)比了化學(xué)發(fā)光免疫分析（CLIA）與ELISA在檢測(cè)促甲狀腺素受體抗體方面的價(jià)值，結(jié)果并無明顯差異，但認(rèn)為與ELISA相比，CLIA的重復(fù)性更好，檢測(cè)速度更快，自動(dòng)化程度更高，且檢測(cè)范圍較寬[9]。ELISA雖然設(shè)備要求不高，成本低廉，但操作相對(duì)較為繁瑣，自動(dòng)化程度低于CLIA。

2.3 CLIA技術(shù) CLIA技術(shù)最早出現(xiàn)于1977年，是基于RIA原理形成的檢測(cè)技術(shù)，將高特異性免疫反應(yīng)以及高靈敏化學(xué)發(fā)光有機(jī)結(jié)合。早期CLIA的檢測(cè)特異度與RIA相當(dāng)，但靈敏度偏低，主要是由于光信號(hào)持續(xù)時(shí)間限制，無法滿足檢測(cè)需求。直至90年代，發(fā)光穩(wěn)定劑的應(yīng)用，使發(fā)光信號(hào)持續(xù)時(shí)間延長(zhǎng)，可達(dá)到20-30min，使其臨床應(yīng)用價(jià)值明顯提高。1990年，電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)系統(tǒng)建立，使其正式成為新一代標(biāo)記免疫測(cè)定技術(shù)。有研究對(duì)比了ECLIA、ELISA對(duì)TSH 的檢測(cè)結(jié)果，結(jié)果顯示兩者檢測(cè)的結(jié)果高度相關(guān)，但與ELISA相比，ECLIA的準(zhǔn)確度、精密度、線性范圍更佳。有研究分別應(yīng)用CLIA、RIA檢測(cè)甲狀腺球蛋白含量，結(jié)果顯示與RIA相比，CLIA的特異度、靈敏度、符合率更高，診斷價(jià)值明顯高于RIA[10]。同時(shí)，CLIA技術(shù)還避免了RIA的放射性污染問題，且試劑有效期更長(zhǎng)，是目前超微量檢測(cè)的主要方法。

除此之外，CLIA可應(yīng)用智能化操作程序，具有操作靈活、隨到隨檢、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，使檢測(cè)效果明顯提高。以往有研究在不同孕期、非孕期女性血清甲狀腺激素水平檢測(cè)中應(yīng)用了CLIA技術(shù)，結(jié)果顯示不同孕期、非孕期女性差異明顯，提示其可用于孕期甲狀腺疾病的早期篩查及診斷，對(duì)改善母嬰結(jié)局具有積極意義[11]。

2.4 化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫分析（CLEIA） CLEIA也是一種酶免疫分析法，其反應(yīng)底物為發(fā)光劑，操作方法基本與EIA相同。在發(fā)光系統(tǒng)中，應(yīng)用了螢火蟲等熒光素，使發(fā)光信號(hào)明顯增強(qiáng)，且能夠在一定時(shí)間內(nèi)維持穩(wěn)定，使檢測(cè)的靈敏度、準(zhǔn)確性均明顯提高。同時(shí)，該技術(shù)與同位素標(biāo)記技術(shù)相似，但可能獲得更佳的檢測(cè)結(jié)果，因此，在部分實(shí)驗(yàn)室中已經(jīng)逐步替代了RIA[12-13]。有學(xué)者對(duì)甲狀腺功能亢進(jìn)（甲亢）患者應(yīng)用了CLEIA法檢測(cè)，并與健康人群對(duì)比，結(jié)果顯示甲亢患者的TT3、TT4、TSH 水平均明顯高于健康人群，可用于判斷甲亢病情[14]。

2.5 其他檢測(cè)技術(shù) 除以上檢測(cè)技術(shù)外，時(shí)間分辨熒光免疫測(cè)定法（TRFIA）、ECLIA等也在臨床上得到較多應(yīng)用，其中，TRFIA是一種特殊分析技術(shù)，充分利用了熒光波長(zhǎng)、激發(fā)波長(zhǎng)的差異，提高了檢測(cè)的靈敏性[15]。有學(xué)者認(rèn)為，TRFIA是現(xiàn)階段最靈敏的微量檢測(cè)技術(shù)，具有廣泛的應(yīng)用前景[16]。而ECLIA為新一代免疫標(biāo)記技術(shù)，綜合了免疫分析、磁微粒技術(shù)、生物素-親和素、電化學(xué)發(fā)光等技術(shù)，具有精密度高、回收率高、快速穩(wěn)定等特點(diǎn)，更適合用于現(xiàn)代醫(yī)院的臨床檢測(cè)。

3 結(jié)束語

目前可用于甲狀腺激素檢測(cè)的免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)較多，從早期的RIA技術(shù)、EIA技術(shù)、CLIA技術(shù)，到CLEIA、TRFIA、ECLIA等新型檢測(cè)技術(shù)，其檢測(cè)靈敏度、特異度明顯提高，且自動(dòng)化程度越來越高，在回收率、精密度、線性范圍方面也有顯著進(jìn)步。從整體上看，CLIA、ECLIA仍是目前檢測(cè)甲狀腺激素的較為理想的方法，值得推廣。