GATA-3、AR在非三陰與三陰性乳腺癌中的表達(dá)及與臨床病理特征的相關(guān)性

夏云 陶珊珊 桂星星 瞿偉 涂劍宏

[摘要] 目的 探討GATA結(jié)合蛋白3（GATA-3）、雄激素受體（AR）在非三陰性與三陰性乳腺癌中的表達(dá)差異及兩者的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系。 方法 收集本院2019年1月至2020年12月確診的200例乳腺癌患者，其中非三陰性（Non-TNBC）100例和三陰性（TNBC）100例，采用免疫組織化學(xué)法檢測患者GATA-3、AR的表達(dá)情況，對比兩者在非三陰性和三陰性乳腺癌中的表達(dá)差異及其與乳腺癌臨床病理特征的相關(guān)性。 結(jié)果 非三陰性和三陰性患者的年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管轉(zhuǎn)移等比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），與組織學(xué)分級呈相關(guān)性（P<0.05）。GATA-3在非三陰性的表達(dá)率為99%，在三陰性患者表達(dá)率為84%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。AR在非三陰性乳腺癌的表達(dá)率為97%，在三陰性表達(dá)率為36%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。 結(jié)論 GATA-3、AR在非三陰性乳腺癌患者的陽性表達(dá)率明顯高于三陰性患者，三陰性乳腺癌患者組織學(xué)分級更高。

[關(guān)鍵詞] GATA-3;AR;非三陰性乳腺癌;三陰性乳腺癌

[中圖分類號] R737.39? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-9701（2021）31-0012-04

[Abstract] Objective To explore the differences in the expression of GATA-binding protein 3 （GATA-3） and androgen receptor （AR） in non-triple-negative and triple-negative breast cancer， and to investigate the correlation between their expressions and clinicopathological features. Methods A total of 200 breast cancer patients， including 100 non-triple negative（Non-TNBC） and 100 triple negative（TNBC） cases， admitted to our hospital from January 2019 to December 2020 were collected， and the expressions of GATA-3 and AR in patients were determined by immunohistochemistry. The differences between their expressions in non-triple negative and triple negative breast and their correlation with clinicopathological features of breast cancer were compared. Results There was no significant differences in age， tumor size， lymph node metastasis， and vasculature metastasis in the non-triple negative and triple negative patients（P>0.05）.It showed the expressions were correlated to histological grade（P<0.05）. The expression rate of GATA-3 in non-triple-negative patients was 99% and the expression rate in triple-negative patients was 84%，with statistically significant difference（P<0.05）.The expression rate of AR in non-triple breast cancer was 97% and the expression rate in triple-negative patients was 36%， with statistically significant difference（P<0.05）. Conclusion The positive expression rates of GATA-3 and AR are significantly higher in non-triple-negative patients than those in triple-negative breast cancer patients， and the histological grade of triple-negative breast cancer patients is higher.

[Key words] GATA-3; AR; Non-triple-negative breast cancer; Triple-negative breast cancer

乳腺癌是一種高度異質(zhì)性腫瘤，在女性惡性腫瘤發(fā)病率中居第一位[1]。其中依據(jù)ER、PR、HER-2、Ki-67的表達(dá)，可被分為4種亞型：Luminal A型、Luminal B型、HER-2過表達(dá)型和三陰性乳腺癌，其中ER-、PR-、HER-2-即為三陰性乳腺癌。Burstein等[2]通過基因組分析，進(jìn)一步將三陰性乳腺癌細(xì)分為腔型雄激素受體型（Luminal androgen receptor，LAR）、間質(zhì)型（Mesenchymal，MES）、基底樣免疫抑制型（Basal-like immune-suppressed，BLIS）、基底樣免疫激活型（Basal-like immune-actived，BLISBLIA）共4個亞型[2]?；诳勾萍に刂委熓侄蔚膹V泛使用，ER及PR在乳腺癌中的作用已被深入研究。但另外一個重要的類固醇激素核受體，即雄激素受體（AR）也在不同分子分型乳腺癌中有不同程度的表達(dá)，但其在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中所起的作用及機(jī)制還未闡明。三陰性乳腺癌具有侵襲性強(qiáng)、無靶向藥物治療、對激素不敏感、預(yù)后差、發(fā)病年齡輕、復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移率高、組織學(xué)分級高等特點(diǎn)，引起臨床與病理的高度關(guān)注與重視，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集南昌市第三醫(yī)院2019年1月至2020年12月診斷的乳腺癌患者，兩位副主任醫(yī)師復(fù)閱切片確認(rèn)診斷無誤。選取腫塊切除標(biāo)本中具有代表性的蠟塊進(jìn)行免疫組化檢測。乳腺癌分子分型采用免疫組織化學(xué)替代分型，選擇非三陰性乳腺癌（Non-TNBC）100例和三陰性乳腺癌（TNBC）100例，患者年齡23～89歲，所有患者臨床資料完整，包括患者的年齡、腫瘤大小、組織學(xué)分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管轉(zhuǎn)移等。所有患者入院前均未進(jìn)行任何形式的治療。

1.2 方法

1.2.1 主要試劑? SP免疫組化試劑盒及DAB顯色試劑盒均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司;鼠抗人GATA-3、兔抗人AR購自河南賽諾特生物技術(shù)有限公司;HER-2抗體購自羅氏診斷公司;ER、PR、Ki-67抗體購自福州邁新生物科技開發(fā)有限公司。HER-2熒光原位雜交試劑盒購自武漢康錄生物技術(shù)股份有限公司。

1.2.2 免疫組織化學(xué)檢測? 手術(shù)切除乳腺癌腫塊組織標(biāo)本，立即固定于10%中性緩沖福爾馬林液內(nèi)6～48 h，石蠟包埋組織，4 μm切片，60℃烤箱中過夜。采用非生物素二步法，結(jié)果采用DAB染色顯色，實(shí)驗用陽性對照片做陽性對照，用PBS代替一抗做陰性對照。

1.2.3 熒光原位雜交（FISH）檢測? 如果HER-2免疫組化檢測結(jié)果為2+，則進(jìn)一步加做FISH，探針購自湖北康錄生物技術(shù)股份有限公司。按說明書進(jìn)行操作，根據(jù)HER-2基因有無擴(kuò)增分別判為HER-2陽性或陰性，然后進(jìn)行分子分型。

1.3 觀察指標(biāo)

GATA-3陽性判讀標(biāo)準(zhǔn)：存在肯定的細(xì)胞核染色即為陽性;AR陽性判讀標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)胞核出現(xiàn)染色陽性，大于10%癌細(xì)胞為陽性[3]。ER、PR的判讀標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)2010年美國臨床腫瘤學(xué)會（ASCO）/美國病理醫(yī)師學(xué)院（CAP）發(fā)布的ER/PR免疫組織化學(xué)檢測指南，將1%作為ER/PR陽性的臨界值[4]。HER-2免疫組化判讀根據(jù)2019版檢測指南[5]，即0：無著色或≤10%的浸潤性癌細(xì)胞呈現(xiàn)不完整的、微弱的細(xì)胞膜染色;1+：>10%的浸潤癌細(xì)胞呈現(xiàn)不完整的、微弱的細(xì)胞膜染色;2+：分兩種情況，第一種為>10%的浸潤性癌細(xì)胞呈現(xiàn)弱-中等強(qiáng)度的完整的細(xì)胞膜染色;第二種為≤10%的浸潤性癌細(xì)胞呈現(xiàn)強(qiáng)而完整的細(xì)胞膜染色;3+：>10%浸潤性腫瘤細(xì)胞呈強(qiáng)、完整且均勻的細(xì)胞膜染色。0和1+都定義為染色陰性，3+定義為染色陽性，如HER-2免疫組化結(jié)果為2+，則加做熒光原位雜交（FISH）檢測，根據(jù)熒光原位雜交結(jié)果判斷為陽性或陰性入組。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

本研究采用SPSS 20.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行處理。發(fā)病年齡、腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級、脈管轉(zhuǎn)移，GATA-3、AR蛋白表達(dá)率等組間差異采用χ2檢驗，當(dāng)不滿足χ2檢驗條件時采用Fisher確切概率法，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 臨床病理學(xué)資料

本研究所納入的患者均為女性，年齡23～89歲。在非三陰性乳腺癌組，組織學(xué)類型分別為浸潤性導(dǎo)管癌88例，浸潤性小葉癌6例，黏液癌3例，浸潤性實(shí)性乳頭狀癌1例，浸潤性微乳頭狀癌2例。在三陰性乳腺癌組，組織學(xué)類型分別為浸潤性導(dǎo)管癌82例，浸潤性小葉癌（多形性）2例，伴髓樣特征的浸潤性癌12例，富糖原透明細(xì)胞癌1例，伴大汗腺分化的浸潤性癌1例，化生性癌2例。

2.2 非三陰性和三陰性乳腺癌患者臨床病理特征比較

在100例非三陰性和100例三陰性乳腺癌患者中，兩組患者的年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管轉(zhuǎn)移比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。兩者之間三陰性乳腺癌組織學(xué)分級更高，兩者比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

2.3 GATA-3、AR在非三陰性和三陰性表達(dá)情況

GATA-3在非三陰性患者的表達(dá)率為99%，在三陰性患者的表達(dá)率為84%，兩者比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。AR在非三陰性患者的表達(dá)率為97%，在三陰性患者的表達(dá)率為36%，兩者比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

3 討論

乳腺癌是高度異質(zhì)性腫瘤，依據(jù)ER、PR、HER-2、Ki-67的表達(dá)可被分為4種亞型：Luminal A型、Luminal B型、HER-2過表達(dá)型和三陰性乳腺癌，其中ER、PR、HER-2均為陰性即三陰性乳腺癌。本研究選取100例非三陰性和100例三陰性乳腺癌患者臨床病理資料統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn)，非三陰和三陰性乳腺癌患者年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管轉(zhuǎn)移比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），與周華平[6]報道不一致，該作者總結(jié)600例非三陰和三陰性乳腺癌患者臨床資料，得出非三陰性患者比三陰性患者腋窩淋巴結(jié)更容易轉(zhuǎn)移（52.9%），三陰性乳腺癌患者腫瘤直徑更大，結(jié)果差異可能是因為本研究樣本量更小導(dǎo)致。本研究中，三陰性乳腺癌患者在組織學(xué)分級更高，是因為三陰性乳腺癌患者很多為伴髓樣特征的浸潤性癌和組織學(xué)Ⅲ級的浸潤性導(dǎo)管癌患者，所以導(dǎo)致組織學(xué)分級更高。

轉(zhuǎn)錄因子GATA（1-6）在調(diào)控細(xì)胞增殖與分化、調(diào)控細(xì)胞運(yùn)動中具有廣泛作用。GATA-3是乳腺上皮中表達(dá)最高的轉(zhuǎn)錄因子，在乳腺上皮細(xì)胞分化中具有關(guān)鍵作用，GATA-3敲除中雌激素受體α（ERα）陽性細(xì)胞顯著減少，是乳腺癌腫瘤分級、雌激素受體狀態(tài)和臨床預(yù)后的一個強(qiáng)有力的獨(dú)立預(yù)測因子。有結(jié)果表明，GATA3與雌激素受體信號通路之間存在廣泛聯(lián)系，因此GATA3陽性更常見于ER陽性乳腺癌，與本研究結(jié)果一致[7-8]。本研究中，GATA-3在非三陰性乳腺中表達(dá)為99%，在三陰性中表達(dá)為84%，兩者之間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，與文獻(xiàn)報道類似。

乳腺腫瘤細(xì)胞分化程度越低，GATA-3陽性表達(dá)率越低，說明GATA-3在乳腺癌分化調(diào)節(jié)中具有重要作用，在促進(jìn)正常乳腺細(xì)胞生長、分化的同時，也促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞分化，與乳腺癌的發(fā)展有密切關(guān)系[9-10]。由于其在乳腺癌中的表達(dá)對腫瘤預(yù)后及預(yù)測均有重要作用，本科已將GATA-3作為乳腺癌的常規(guī)診斷和預(yù)后判斷指標(biāo)。

由于GATA-3表達(dá)是ERα陽性狀態(tài)的重要預(yù)測因子[11-12]，臨床工作中，GATA3陽性患者，如果ER陰性，需要重復(fù)試驗或找到染色陰性的原因以排除實(shí)驗失敗導(dǎo)致假陰性。

AR屬于核受體超家族中的類固醇激素受體，是信號通路組成的關(guān)鍵部分，在調(diào)節(jié)基因表達(dá)中起著至關(guān)重要的作用，是三陰性乳腺癌中可能唯一表達(dá)的核激素受體，能作為三陰性乳腺癌預(yù)后轉(zhuǎn)歸的一個預(yù)測因子。在本研究中，AR在非三陰性乳腺癌中表達(dá)率為97%，在三陰性乳腺癌中表達(dá)為36%，比孫向潔等[3]報道要高，與其他[13-14]報道相似。之所以研究報道數(shù)據(jù)有差異，認(rèn)為可能是實(shí)驗室條件不盡相同，而且對AR、ER、PR等陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)也不一致。本研究中AR采用10%，ER、PR采用1%作為陽性臨界值。

ER陽性乳腺癌中AR的陽性表達(dá)率遠(yuǎn)高于ER陰性乳腺癌，提示AR在這兩類乳腺癌發(fā)生及進(jìn)展中的機(jī)制不同，有研究顯示，在ER+AR+乳腺癌細(xì)胞中，AR結(jié)合配體被激活后，與結(jié)合配體的ER競爭性結(jié)合核內(nèi)雌激素相關(guān)的應(yīng)答元件，抑制ER轉(zhuǎn)錄活性，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。相反，在ER-AR+細(xì)胞中，由轉(zhuǎn)錄因子FOXA1介導(dǎo)AR進(jìn)入核內(nèi)，促進(jìn)下游基因轉(zhuǎn)錄，導(dǎo)致細(xì)胞增殖。

三陰性乳腺癌患者沒有針對性治療方案，治療方式仍然以化療為主。尤其在年輕女性中發(fā)病率更高，而且容易早期轉(zhuǎn)移和化療耐受，目前仍缺乏較好的治療手段。但三陰性乳腺癌是一種異質(zhì)性很強(qiáng)的疾病，其中管腔雄激素受體亞型（LAR）高表達(dá)ARDNA及AR蛋白，對抗雄激素治療敏感，約為三陰性乳腺癌22%[15]。AR的檢測為這些患者提供了新的靶向治療的潛在機(jī)會。盡管目前還沒有關(guān)于AR靶向治療市場時間的相關(guān)研究，但綜合看起來，這些數(shù)據(jù)表明AR狀態(tài)可能對三陰性乳腺癌患者的治療和預(yù)后有重要作用，目前許多藥物性AR抑制劑已被應(yīng)用在三陰性乳腺癌治療中，多項實(shí)驗證明其能夠有效抑制AR陽性的三陰性乳腺癌細(xì)胞增殖、減慢腫瘤生長速度，臨床實(shí)驗也證實(shí)其有效的臨床收益率和良好的藥物耐受性，能顯著提高患者生存期[16]。

血清雄激素水平增加與乳腺癌風(fēng)險之間有顯著相關(guān)性，在參與乳腺癌的發(fā)生、進(jìn)展中，雄激素除了能直接與雌激素協(xié)同作用來刺激乳腺癌細(xì)胞的生長和增殖;另外在ER、PR都呈陰性乳腺癌患者中，能間接地轉(zhuǎn)化為雌激素而發(fā)揮其生物學(xué)作用，特別是絕經(jīng)后女性乳腺癌發(fā)生、進(jìn)展的高危因素。由于AR在各型乳腺癌中表達(dá)差異，以及提示可能為三陰性乳腺癌的潛在治療靶點(diǎn)，提倡每個乳腺癌患者都應(yīng)該進(jìn)行檢測，或至少對三陰性乳腺癌進(jìn)行檢測。

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（收稿日期：2021-03-19）