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    氟苯尼考耐藥性的研究進(jìn)展

    2021-01-05 19:54:00王長(zhǎng)征劉小提
    河南畜牧獸醫(yī) 2021年14期
    關(guān)鍵詞:氟苯尼外排沙門氏菌

    王長(zhǎng)征,劉小提

    (1.河南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院,河南 鄭州 450000;2.溫縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局)

    隨著畜牧業(yè)規(guī)?;陌l(fā)展,疾病日趨復(fù)雜,廣大的從業(yè)人員在處理細(xì)菌性疾病時(shí),喜歡采用抗菌譜廣、效果顯著的氟苯尼考類制劑,導(dǎo)致該類產(chǎn)品耐藥菌株的增加,人們對(duì)氟苯尼考抗藥機(jī)制的研究越來(lái)越多。

    1 研究歷史

    1.1 藥物研究歷史

    1990年,氟苯尼考首次在日本上市。挪威于1993年7月批準(zhǔn)了氟苯尼考可作為用于開發(fā)治療白血鮭病的一種藥物。1995年,法國(guó)、英國(guó)、奧地利、墨西哥及西班牙批準(zhǔn)氟苯尼考用于治療牛呼吸系統(tǒng)細(xì)菌性疾病。在日本和墨西哥還批準(zhǔn)氟苯尼考用作豬的飼料添加劑,預(yù)防和治療豬的細(xì)菌性疾病。1999年,我國(guó)通過(guò)了該藥的審批。

    1.2 耐藥性研究歷史

    1996年Kim等人首次從魚的巴氏桿菌多重耐藥R質(zhì)粒中發(fā)現(xiàn)耐氟苯尼考的基因,并將其定名為pp-flo。基因結(jié)構(gòu)克隆序列測(cè)序的分析結(jié)果顯示,ppfrlo編碼基因在r-r質(zhì)粒內(nèi)成功編碼了對(duì)非磺胺酶抗藥耐藥性在基因組的下游區(qū),序列結(jié)構(gòu)分析結(jié)果顯示該編碼基因就是具有非磺胺酶活性介導(dǎo)的對(duì)氟苯尼考耐藥性的基因47.4%的同源性。隨后,氟苯尼考耐藥抗體基因從新型沙門氏菌、大腸桿菌的同屬和新型葡萄糖鏈球菌中相繼進(jìn)行克隆。氟苯尼考作為抗癲癇藥作用機(jī)理的新研究從此時(shí)期開始。

    2 氟苯尼考耐大腸桿菌的研究進(jìn)展

    鄭朝朝從河北省保定市和周邊地區(qū)雞場(chǎng)、豬場(chǎng)、牛場(chǎng)等分離出60株細(xì)菌,經(jīng)生化試驗(yàn)鑒定為大腸桿菌,其中雞源大腸桿菌23株,豬源大腸桿菌14株,牛源大腸桿菌8株,采用玻板凝聚和試管凝集的方式,對(duì)45株大腸桿菌進(jìn)行O血清型鑒定,雞源大腸桿菌的血清型為O78,O35,豬源大腸桿菌的血清型為O101,牛源大腸桿菌的血清型為O101。按照世界衛(wèi)生組織推薦的kirbybauer菌液涂布方法,對(duì)45個(gè)大腸桿菌進(jìn)行了氟苯尼考、頭孢喹諾和諾氟沙星等11個(gè)抗生素藥物的敏感試驗(yàn),結(jié)果顯示分為:大腸桿菌對(duì)多種抗生素有不同的耐受度,僅對(duì)頭孢喹諾更敏感。氟苯尼考抗藥菌的檢出率為62%、58%、38%。

    馮世文、李軍等人采用體外亞抑菌耐藥誘導(dǎo)方法,將e.colio157:h7誘導(dǎo)為氟苯尼考耐藥菌株,采用連續(xù)的無(wú)抗生素壓力培養(yǎng)或sds方法,消除耐藥菌株中的氟苯尼考抗藥性,使用pcr法檢查氟苯尼考抗藥基因flor,通過(guò)外排泵檢查氟苯尼考抗藥基因flor。抑制劑和氟苯尼考聯(lián)用,檢測(cè)e.colio157:h7是否有對(duì)氟苯尼考主動(dòng)排出作用,經(jīng)過(guò)36代耐藥誘導(dǎo),敏感菌株對(duì)氟苯尼考有高度耐藥性(mic為256mg/ml)。質(zhì)粒檢查結(jié)果表明,耐藥引起的菌株有2個(gè)大小約為35mg的質(zhì)粒。00bp和1200bp,flor基因在質(zhì)粒dna中通過(guò)連續(xù)的傳代培養(yǎng)或sds法進(jìn)行抗藥消除,耐藥引起菌株對(duì)氟苯尼考敏感度提高,但其質(zhì)粒和flor基因并未丟失。結(jié)論基于e.colio157:h7氟苯尼考的敏感菌和其他抗非耐藥性細(xì)菌都是具有控制質(zhì)子動(dòng)力驅(qū)動(dòng)泵的外排機(jī)和泵,以及基于atp泵的水解質(zhì)子依賴的驅(qū)動(dòng)外排機(jī)和泵,都是具有控制質(zhì)子動(dòng)力驅(qū)動(dòng)式泵的外排機(jī)和泵的主動(dòng)泵和外排泵的功能。

    3 氟苯尼考耐沙門氏菌的研究進(jìn)展

    黃凱、陳素娟等多位臨床專家疑似發(fā)現(xiàn)沙門氏菌的多重病料,對(duì)沙門細(xì)菌多重病原pcr亞型進(jìn)行了多種病原陽(yáng)性分離株的鑒定;黃凱采用pckb的方法測(cè)定病原分離株的病原敏感度為23種都是抗菌致病藥;黃凱選擇使用氟苯尼考作為抗致病藥將菌株基因增加到了flor,fexa,費(fèi)克斯和ppcfr三個(gè)基因。結(jié)果表明,共鑒定了61株沙門氏菌,其中包括腸炎沙門氏菌10個(gè),雞白痢沙門氏菌12個(gè),鼠傷寒沙門氏菌38個(gè)。所有的菌株都對(duì)青霉素、紅霉素和萬(wàn)古菌抗藥耐用,90.16%的抗生素耐用率超過(guò)6種和以上的6種。flor基因在鼠傷寒的沙門氏菌氟苯尼考耐藥細(xì)胞中(8/12,66.67%)廣泛存在,但沒(méi)有發(fā)現(xiàn)其他耐藥基因。

    李帆等用微量肉湯稀釋法測(cè)定了215株豬源沙門氏菌對(duì)4種抗菌藥物的敏感性,用PCR方法測(cè)定了多藥外排泵基因oqxA、oqxB和氟苯尼考耐藥基因floR,并用ERIC-PCR方法分析了豬源沙門氏菌菌株之間的相關(guān)性和遺傳關(guān)系。結(jié)果顯示:分離菌株對(duì)喹乙醇、痢菌凈、氟苯尼考和恩諾沙星的耐藥率分別為32.56%、20.93%、92.56%、16.74%;有152株菌同時(shí)攜帶oqxA和oqxB,另有7株菌單獨(dú)攜帶oqxB;有156株菌攜帶floR基因;oqxA或oqxB陽(yáng)性菌株可分為A~Q17個(gè)ERIC型,oqxA和oqxB基因分布于不同的ERIC型菌株中。

    4 氟苯尼考耐葡萄球菌的研究進(jìn)展

    馬木爾阿克木漢等比較新疆焉耆地區(qū)某豬場(chǎng)不同生長(zhǎng)期豬只鼻腔和直腸攜帶葡萄球菌的耐藥情況。通過(guò)微量肉湯法,對(duì)不同部位分離的葡萄球菌進(jìn)行11種抗菌藥物的藥敏試驗(yàn)。結(jié)果分離出332株直腸菌(83.0%,332/400)和137株鼻腔菌(68.5%,137/200)。2月齡仔豬直腸菌對(duì)四環(huán)素、苯唑西林、氧氟沙星、利福平、青霉素5種藥物的耐藥率高于鼻腔菌;鼻腔菌對(duì)氟苯尼考的耐藥率極顯著高于直腸菌(P﹤0.01)。

    曾淑儀等對(duì)廣東省豬場(chǎng)葡萄球菌耐藥狀況和cfr流行狀況進(jìn)行了流行調(diào)查。分別對(duì)廣東省各地區(qū)的豬場(chǎng)和其密切接觸者的肛門拭子、鼻擦子進(jìn)行葡萄球菌分離鑒定,采用PCR和基因檢測(cè)來(lái)鑒定葡萄球菌,并用PCR方法對(duì)葡萄球菌的cfr、fex(a)、erm(a)基因進(jìn)行分別檢測(cè),用瓊脂稀釋方法對(duì)cfr陽(yáng)性菌株的12種抗病毒細(xì)胞進(jìn)行了分析。從豬場(chǎng)收集的樣本中分離了1049個(gè)菌株,檢測(cè)到96個(gè)攜帶cfr基因的菌株,其中有36個(gè)攜帶cfr基因的菌株,分別為2個(gè)人源和34個(gè)豬株,其中20個(gè)金黃葡萄球菌,5個(gè)腐生的葡萄球菌,4個(gè)科氏葡萄球菌,3個(gè)阿爾萊的葡萄球菌,1個(gè)株木糖葡萄球菌和3個(gè)葡萄球菌屬,23個(gè)同時(shí)攜帶著cfr和fex(a)基因。36株cfr陽(yáng)性菌耐藥性分別為83.33%、77.78%、75%、765%,環(huán)丙沙星和利奈唑胺對(duì)四環(huán)素、氨芐西林的耐藥性分別為83.33%、77.78%。

    5 展望

    吳方達(dá)等從寧德地區(qū)6個(gè)豬場(chǎng)分別采集了50份仔豬糞便樣品。從中分離得到氟苯尼考耐藥大腸桿菌17株、沙門氏菌2株、肺炎克雷伯菌5株和鮑曼不動(dòng)桿菌8株,并對(duì)其耐藥基因floR進(jìn)行同源性分析。結(jié)果顯示,寧德地區(qū)豬源大腸桿菌、沙門氏菌、肺炎克雷伯菌和鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)氟苯尼考的耐藥檢出率分別為34%、4%、10%和16%,且所有的分離細(xì)菌都呈現(xiàn)了多重耐藥性。同源性分析發(fā)現(xiàn),不同細(xì)菌間的耐藥基因floR存在高度同源性。這些結(jié)果表明,氟苯尼考耐藥基因floR廣泛存在于不同細(xì)菌間,且可在不同細(xì)菌間進(jìn)行水平傳播。

    氟苯尼考的敏感菌有牛、豬嗜血桿菌、痢疾志賀氏菌、沙門氏菌、大腸桿菌、肺炎球菌、鏈球菌、金黃葡萄球菌、衣原體、鉤端螺旋體、立克次氏體等。本品可通過(guò)脂溶性彌散進(jìn)入細(xì)菌細(xì)胞,主要作用于70s核糖體的50s亞基,抑制轉(zhuǎn)肽酶,使肽的增長(zhǎng)受阻,抑制了肽鏈的形成,從而阻止蛋白質(zhì)的合成,達(dá)到抗菌目的。具有廣泛的抗菌譜,對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌、革蘭氏陰性細(xì)胞和支原體都有很好的抗菌作用,但是對(duì)本品耐藥性的研究目前還很少,相信經(jīng)過(guò)廣大從業(yè)者的努力,不久的將來(lái),一定會(huì)形成完整的科學(xué)流程和標(biāo)準(zhǔn),從而有效地控制氟苯尼考耐藥菌株的發(fā)生和流行。□

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