動(dòng)物源性食品中拉沙洛西鈉檢測(cè)方法綜述

【摘要】本文對(duì)動(dòng)物源性食品中拉沙洛西鈉檢測(cè)方法進(jìn)行研究，對(duì)酶聯(lián)免疫吸附法、高效液相色譜法、超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法等檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行了闡述，重點(diǎn)分析了這三種方法的優(yōu)勢(shì)和劣勢(shì)，并對(duì)超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)行了重點(diǎn)介紹，同時(shí)也對(duì)拉沙洛西鈉的發(fā)展前景進(jìn)行了展望，為我國(guó)食品安全檢測(cè)拉沙洛西鈉的殘留量提供檢測(cè)技術(shù)方面的參考。

【關(guān)鍵詞】拉沙洛西鈉；抗生素；食品安全

【DOI編碼】10.3969/j.issn.1674-4977.2024.06.008

Review of Detection Methods for Lasalocid Sodium in Food of Animal Origin

GUO Siqi， FU Chuling， GUO Guoxian， LAN Yumeng， GU Meng， SUN Weiwei， Cao Mengna

（Liaoning Inspection， Examination&Certification〔Liaoning Institute forAgro-product Veterinary Drugs and Feed Control〕， Liaoning Key Laboratory of Livestock Product Safety， Shenyang 110036， China）

Abstract： This paper establishes the current research on the detection methods of lasalocid sodium， including ELISA， HPLC， UPLCMS/MS and so on for the relevant introduction， focusing on the analysis of the advantages and shortcomings of the above three methods； the UPLC-MS/MS detection technology is also highlighted， and the development prospect of lasalocid sodium is also prospected to provide a reference in detection technology for the detection of lasalocid sodium residue for food safety in China.

Keywords： lasalocid sodium； antibiotics； food safety

1拉沙洛西鈉的概況

拉沙洛西鈉是一種雙價(jià)聚醚類抗寄生蟲藥，它的中文別名為拉沙洛A鈉、拉沙里菌素鈉。該藥具有極強(qiáng)的抗寄生病毒能力，可以有效抑制雞柔嫩球蟲、毒害球蟲、巨型球蟲等艾美耳球蟲的生長(zhǎng)。其藥效相較于莫能菌素和鹽霉素更為顯著，主要應(yīng)用于畜禽抗生素的治療和預(yù)防肉綿羊或雞的球蟲病。拉沙洛西鈉的藥理學(xué)特性與莫能菌素相似，因而在獸藥研發(fā)中得到了廣泛應(yīng)用。此外，拉沙洛西鈉也被用作飼料添加劑。它能改善飼料的營(yíng)養(yǎng)比例，調(diào)控瘤胃發(fā)酵類型，從而提高動(dòng)物的整體營(yíng)養(yǎng)狀況并促進(jìn)其生長(zhǎng)。然而，超過最大給藥劑量使用拉沙洛西鈉不僅可能導(dǎo)致藥物殘留問題，還可能通過食物鏈影響人類健康。目前，許多國(guó)家已通過法律法規(guī)嚴(yán)格限制動(dòng)物源性食品中拉沙洛西鈉的使用，我國(guó)也規(guī)定了其在動(dòng)物源性食品中的最高殘留限量，具體見表1。因此，合理使用拉沙洛西鈉，在確保其功效的同時(shí)，還需防范獸藥殘留的風(fēng)險(xiǎn)。

1.1拉沙洛西鈉理化性質(zhì)

拉沙洛西鈉是由瑞士羅氏公司在1951年開發(fā)的，最初用作肉牛的促生長(zhǎng)劑。該藥物與其他聚醚類抗生素的區(qū)別在于其結(jié)構(gòu)中含有一個(gè)芳香環(huán)。此外，拉沙洛西鈉能分別與一價(jià)陽(yáng)離子、二價(jià)陽(yáng)離子結(jié)合，干擾球蟲體內(nèi)正常的離子平衡和轉(zhuǎn)運(yùn)，從而抑制球蟲的生長(zhǎng)。拉沙洛西鈉為白色至棕色粉末，具有獨(dú)特的臭味，熔點(diǎn)在191～192℃。它微溶于水，但可以與甲醇和乙腈等大部分有機(jī)溶劑混合。它的分子式是C34H58O8Na，分子量為612.78。

1.2拉沙洛西鈉的藥理作用

拉沙洛西鈉是一種特殊的聚醚類抗生素，可以有效抑制畜禽體內(nèi)的球蟲病，并且具有廣泛的治療作用。它能夠有效地對(duì)抗革蘭氏陽(yáng)性菌以及多種厭氧菌，對(duì)于防治這些細(xì)菌感染具有顯著效果。此外，它還對(duì)禽艾美爾球蟲有較強(qiáng)的抑制作用，對(duì)防治禽類寄生蟲病具有重要作用。然而，需要注意的是，拉沙洛西鈉對(duì)革蘭氏陰性菌并無抗菌活性，因而在治療某些革蘭氏陰性菌感染時(shí)，可能需要聯(lián)合使用其他藥物。

2拉沙洛西鈉的檢測(cè)方法

2.1酶聯(lián)免疫吸附法

酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）是以聚苯乙烯微量化學(xué)反應(yīng)板作為吸附劑，通過特異性反應(yīng)實(shí)現(xiàn)對(duì)已知抗原和抗體檢測(cè)的方法。該技術(shù)能夠提供準(zhǔn)確的定量或定性測(cè)定結(jié)果，常用于診斷動(dòng)物的疾病和檢測(cè)小分子化合物。

CHEN等[1]在單鏈抗體片段（scFvs）的基礎(chǔ)上首次構(gòu)建了抗拉沙洛西鈉的完整雙特異性單鏈抗體（scDb）。利用scDb建立的ic-ELISA法，可以檢測(cè)雞肉中的拉沙洛西鈉，IC50為3.5 ng/mL。該方法的靈敏度和特異性均優(yōu)于單鏈抗體片段親本抗體。WATANABE等[2]也報(bào)道了雞的肝臟和肌肉中拉沙洛西鈉的殘留量，檢測(cè)方法同上述相似。

ELISA方法中前處理相對(duì)簡(jiǎn)單，同時(shí)使用的儀器不昂貴，但是該方法僅能作為快速定性分析處理，不能用于定量分析，因而只適用于初篩。

2.2高效液相色譜檢測(cè)方法

在動(dòng)物源性食品檢測(cè)中，高效液相色譜檢測(cè)方法（HPLC）屬于常見的獸藥殘留檢測(cè)方法之一。HPLC是以溶液為流動(dòng)相，利用高壓輸液系統(tǒng)，推動(dòng)含有各類極性成分的單一溶液或混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相通過色譜柱。在色譜柱中，各組分依據(jù)在固定相中的停留時(shí)間差異得以分離。經(jīng)過色譜柱的分離，各成分依次流出，并由檢測(cè)儀進(jìn)行監(jiān)控，進(jìn)而完成對(duì)試樣的解析。

張素霞等[3]利用反相高效液相色譜-熒光檢測(cè)技術(shù)對(duì)雞肝組織中拉沙洛西鈉的含量進(jìn)行了準(zhǔn)確的檢測(cè)，以磷酸鹽緩沖液-乙腈-甲醇（25∶40∶35，體積比）混合液作為流動(dòng)相，實(shí)現(xiàn)對(duì)物質(zhì)的有效分離。前處理方式：用甲醇作為提取液進(jìn)行提取，并用硅膠柱凈化，過膜上機(jī)。該方法平均回收率為82.1%，方法的檢測(cè)限為0.02 mg/kg。

雖然動(dòng)物源性食品中拉沙洛西鈉的前處理過程簡(jiǎn)單，回收率也較高，但是日常檢測(cè)的食品具有多樣性，這給動(dòng)物源性食品中拉沙洛西鈉的檢測(cè)造成了一定的難度。同時(shí)，在定性分析時(shí)，存在基質(zhì)干擾，無法對(duì)樣品中的成分進(jìn)行準(zhǔn)確判定，影響結(jié)果判斷。另外，在檢測(cè)過程中對(duì)選用的色譜柱極性或流動(dòng)相的極性也有一定的要求，這些輔助定性要求也是影響結(jié)果判斷的重要條件。查閱文獻(xiàn)對(duì)比ELISA法和HPLC法得出，ELISA法測(cè)得的結(jié)果不足以定量，只能用于初篩，而HPLC法對(duì)熒光檢測(cè)器靈敏度要求高，同時(shí)在定性分析時(shí)會(huì)受到基質(zhì)干擾。與超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)方法相比，超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)方法應(yīng)用更為廣泛，其前處理操作簡(jiǎn)單、速度快，檢測(cè)結(jié)果更準(zhǔn)確。

2.3超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)法

超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（UPLC-MS/MS）是作為一種集高效率、快速分離、多組分定性定量分析于一體的檢測(cè)技術(shù)。它在處理高沸點(diǎn)、不揮發(fā)、熱不穩(wěn)定樣品時(shí)展現(xiàn)出卓越的分離和鑒定能力，已成為近年來藥品殘留分析領(lǐng)域的主要檢測(cè)手段。

奚照壽等[4]用UPLC-MS/MS測(cè)定雞肌肉中拉沙洛西鈉的殘留量，先用乙酸、乙腈以及乙酸乙酯的混合物加以提取，然后使用乙腈飽和的正己烷除去油，再通過C18固相萃取柱加以凈化，過膜上機(jī)。利用電噴霧離子源正離子模式，結(jié)合多種反應(yīng)監(jiān)測(cè)技術(shù)，使用外標(biāo)定量。通過實(shí)驗(yàn)得出的檢測(cè)限為0.35μg/kg，定量限為0.96μg/kg，線性范圍為0.96～100.0μg/kg（r=0.99947）。薄海波等[5]采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定牛奶和奶粉中的拉沙洛西鈉含量，使用了乙腈提取樣品，然后通過HLB固相萃取柱對(duì)其進(jìn)一步凈化，經(jīng)UPLC-MSMS進(jìn)行分析。該方法的檢出限為0.2μg/L，線性范圍為0.5～ 100.0μg/L（r>0.99），回收率范圍為74.0%～98.5%，精密度為4.8%～17.2%。梁春來等[6]通過使用甲醇提取雞組織中的拉沙洛西鈉殘留量，并通過硅膠柱凈化和多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）正離子掃描技術(shù)進(jìn)行質(zhì)譜檢測(cè)。該方法的定量限為0.1～1.0μg/kg，回收率為71.6%～99.1%。

張駿等[7]首先使用6 mL正己烷對(duì)硅膠柱實(shí)施預(yù)處理，再將備用的提取液過柱，隨后用15 mL的二氯甲烷-正己烷（1∶1，體積比）淋洗，再使用10 mL二氯甲烷-甲醇（8∶2，體積比）洗脫，最終把洗脫液匯集到離心管里，并在40℃下用氮?dú)獯蹈?，最后通過1 mL乙腈的復(fù)溶，經(jīng)過濾膜后上機(jī)分析動(dòng)物源食品中拉沙洛西鈉的殘留量，最終得到的結(jié)果檢出限為0.005mg/kg，平均加標(biāo)回收率為83.8%～99.2%。Jing Ha等[8]采用石墨化炭黑固相萃取技術(shù)進(jìn)行凈化處理。研究表明，拉沙洛西鈉的聚醚類抗生素的回收率為68.2%～114.3%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差范圍為4.5%～12.1%。藍(lán)麗丹等[9]在實(shí)驗(yàn)過程中證明了硅膠柱、C18固相萃取柱、石墨化炭黑固相萃取柱、中性氧化鋁柱以及正己烷液-液萃取法對(duì)拉沙洛西鈉的凈化有著顯著的作用。結(jié)果表明，采取液-液萃取法凈化拉沙洛西鈉可以獲得更優(yōu)異的凈化結(jié)果。具體檢出限為0.05～0.2μg/kg，而且凈化后的拉沙洛西鈉的回收率為88.0%～108.7%，均在線性范圍內(nèi)。QuEChERS方法已成為一種新興的、高效的樣本預(yù)處理方法，它通過添加干燥劑、雜質(zhì)吸附劑等物料，能夠顯著減少樣本、有機(jī)溶劑以及容器的消耗，而且提高了工作效率，從而極大地改善了實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性。

綜上所述，采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定動(dòng)物性食品中拉沙洛西鈉殘留量時(shí)，樣品的前處理采用了不同的提取液，但是方法的回收率、準(zhǔn)確度和線性良好；凈化方式分別采用了硅膠固相萃取柱、石墨化炭黑固相萃取小柱、液液萃取和QuEChERS等，其回收率、準(zhǔn)確度都不偏離；多反應(yīng)監(jiān)測(cè)采用電噴霧離子源正離子模式進(jìn)行檢測(cè)，不僅能滿足實(shí)驗(yàn)室殘留分析檢測(cè)要求，還能達(dá)到快速、精準(zhǔn)、定量分析的目的。

查閱國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，選用BEH C18柱（100 mm×2.1 mm，1.7μm），在柱溫50℃下分析拉沙洛西鈉的響應(yīng)值更好。這種色譜柱完全符合質(zhì)譜檢測(cè)的要求，不僅對(duì)拉沙洛西鈉具有良好的保留性能，還具有良好的分離效果和對(duì)稱的色譜峰形。流動(dòng)相的選擇與組成在化合物分離中起到了關(guān)鍵作用。文獻(xiàn)調(diào)研表明，使用0.1%甲酸溶液和甲醇或者乙腈溶液作為流動(dòng)相時(shí)，乙腈會(huì)導(dǎo)致色譜峰形變寬，而甲醇會(huì)出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)的尖銳峰形。通過優(yōu)化流動(dòng)相的梯度洗脫比例，不僅可以提高響應(yīng)值和分離度，還能實(shí)現(xiàn)快速分離檢測(cè)。在色譜柱和流動(dòng)相選擇對(duì)的情況下，不僅顯著提高了分析速度，還減少了有機(jī)溶劑的消耗，降低了實(shí)驗(yàn)分析的成本。

3結(jié)束語(yǔ)

在上述拉沙洛西鈉三種殘留檢測(cè)方法中，UPLC-MS/MS法具有出眾的精密度、可靠性以及穩(wěn)定性，它比ELISA法更加精準(zhǔn)。鑒于UPLC-MS/MS法具有較強(qiáng)的靈敏度、精密度以及特異性，它已經(jīng)成為檢測(cè)動(dòng)物源性食品中拉沙洛西鈉殘留量的首要方法。另外，QuEChERS和固相萃取小柱凈化方法因其操作簡(jiǎn)便、快速、高效、穩(wěn)定性好，在拉沙洛西鈉殘留檢測(cè)的前處理中展現(xiàn)出良好的應(yīng)用前景。

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【作者簡(jiǎn)介】

郭思琦，女，1994年出生，學(xué)士，研究方向?yàn)楂F藥殘留檢測(cè)。

（編輯：李鈺雙）