微柱凝膠技術(shù)在新生兒ABO-溶血病檢測(cè)中的應(yīng)用價(jià)值

付清文

【摘要】目的：分析微柱凝膠技術(shù)在新生兒溶血病檢測(cè)中的應(yīng)用價(jià)值。方法：選取本院接收的疑似新生兒溶血病患兒檢測(cè)樣本100例，抽取入院患兒血液標(biāo)本，分別采用微柱凝膠技術(shù)、傳統(tǒng)試管法檢測(cè)，比較檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果：微柱凝膠技術(shù)檢出陽性率98.84%高于傳統(tǒng)試管法檢出陽性率74.42%，具顯著性差異（P<0.05）;微柱凝膠技術(shù)敏感性、特異性分別為97.65%、85.71%，均高于傳統(tǒng)試管法檢測(cè)的61.18%、20.0%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：對(duì)新生兒溶血病采取微柱凝膠技術(shù)檢測(cè)，可提高檢測(cè)結(jié)果的穩(wěn)定性及準(zhǔn)確性，臨床價(jià)值高，值得推廣。

【關(guān)鍵詞】微柱凝膠技術(shù);新生兒溶血病;傳統(tǒng)試管法;血型檢測(cè)

[中圖分類號(hào)]R722.18 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A[ 文章編號(hào) ]2096-5249（2021）21-0189-02

新生兒溶血病是因母嬰血型不合導(dǎo)致，常見類型為ABO 溶血，一般母親血型為 O 型，患兒血型為A 型或 B 型，母體內(nèi)IgG血型抗體通過胎盤進(jìn)入胎兒體內(nèi)，造成同種免疫性溶血[1]。新生兒溶血病患兒體內(nèi)存在母親抗體，無法按照常規(guī)方式輸血，不當(dāng)輸血?jiǎng)t會(huì)加重溶血反應(yīng)[2]。因此對(duì)新生兒溶血病，需早期診斷，為臨床輸血治療提供參考依據(jù)。既往是采用試管抗人球蛋白試驗(yàn)，但檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)、操作復(fù)雜，造成檢測(cè)結(jié)果偏差，影響疾病治療[3]。微柱凝膠技術(shù)是現(xiàn)今檢測(cè)新生兒溶血病的新型技術(shù)，檢測(cè)快、操作簡(jiǎn)單，筆者特對(duì)新生兒溶血病采取微柱凝膠技術(shù)檢測(cè)。

1 資料與方法

1.1一般資料選取我院在2019年 10月至2020年 10月接收的疑似為新生兒溶血病患兒100例，患兒出現(xiàn)黃疸或進(jìn)行性黃疸加重;男嬰52例，女嬰48例;日齡1～12d，平均（4.83±1.35）d;母親均為O 型血，Rh 陽性;排除存在凝血機(jī)制異常、血液疾病、全身感染者。

1.2方法檢測(cè)儀器與檢測(cè)試劑：TD-2Y 型微柱凝膠卡式專用離心機(jī)（中山生科試劑儀器有限公司生產(chǎn)）、FYQ 免疫微柱孵育器（長(zhǎng)春博研科學(xué)儀器有限責(zé)任公司生產(chǎn)）、久保田 ka-2200免疫血液學(xué)專用離心機(jī)、37℃水浴箱、56℃水浴箱、抗 A 抗 B 血清和ABO 標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞均購(gòu)自上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司。（1）微柱凝膠技術(shù)：用EDTA 管抽取患兒血液樣本2mL 后，離心2min，3500r/min，分離血清及紅細(xì)胞;將微柱凝膠檢測(cè)卡進(jìn)行離心1min，3000r/min。直接抗人球蛋白試驗(yàn)：取一滴紅細(xì)胞配成1% 懸液加入50μL 于檢測(cè)卡，置離心機(jī)1800r/min 1min，2500r/min 1min，取出，判定結(jié)果;游離試驗(yàn)：將ABO 標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞加入微柱凝膠檢測(cè)卡三孔中各10μL，分別標(biāo)明A、B、O 細(xì)胞，每孔加患兒血清40μL，37℃孵育器孵育15min，置離心機(jī)1800r/min 1min，2500r/min 1min，取出，判定結(jié)果;放散試驗(yàn)：取壓積紅細(xì)胞400 至500μL 用生理鹽水洗滌6次（約1：8稀釋洗），每次低速離心2min，2000r/min，棄去上清液;取同體積的壓積紅細(xì)胞（300μL） 和生理鹽水（300μL）混勻，置于56℃水浴箱孵育10min，期間不斷搖動(dòng)，然后離心3min，2000r/min，取上清液即為放散液;將 ABO 標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞加入微柱凝膠檢測(cè)卡，各孔分別加入10μL，分別標(biāo)明A、B、O 細(xì)胞，每孔加放散液40μL，37℃孵育器孵育15min，置離心機(jī)1800r/min 1min，2500r/min 1min，取出，判定結(jié)果。（2）傳統(tǒng)試管法：抽取患兒靜脈血3mL 作為血液樣本，離心，分離血清及紅細(xì)胞，使用生理鹽水清洗紅細(xì)胞，連續(xù)清洗6次，配制成5%懸液。于1滴懸液內(nèi)加入2滴廣譜抗人球蛋白試劑，離心，觀察結(jié)果。取兩組三支分別標(biāo)明A、B、O 細(xì)胞的試管，分別加入患兒血清及放散液，在對(duì)應(yīng)試管內(nèi)加入標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞;放置37℃水浴箱，孵育30min，用生理鹽水洗滌3次，加入抗人球蛋白試劑離心，觀察結(jié)果。

1.3觀察指標(biāo)觀察新生兒溶血癥三項(xiàng)試驗(yàn)陽性的檢測(cè)率，分析微柱凝膠技術(shù)、傳統(tǒng)試管法檢測(cè)敏感性及特異性，敏感性= 真陽性/（真陽+假陰性），特異性=真陰/（真陰+假陽性）=d/（b+d）;參照《兒科急診科學(xué)》第4版[4]中新生兒溶血病診斷標(biāo)準(zhǔn)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采取 SPSS23.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件包處理研究數(shù)據(jù)。數(shù)值變量資料經(jīng)（ x ±s）表示，采取 t 檢驗(yàn);無序分類資料經(jīng)百分比率（%）表示，采取χ2檢驗(yàn); P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

（1）新生兒溶血病檢出率100例疑似新生兒溶血病患兒，共有86例確診為新生兒溶血病，其中ABO 溶血80例，占93.02%;微柱凝膠技術(shù)檢出陽性率85例，占98.84%;傳統(tǒng)試管法檢出陽性率64例，占74.42%;差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=20.076， P=0.000）。（2）微柱凝膠技術(shù)、傳統(tǒng)試管法檢測(cè)敏感性及特異性分析微柱凝膠技術(shù)敏感性、特異性分別為97.65%、85.71%，均高于傳統(tǒng)試管法檢測(cè)的61.18%、20.0%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

3 討論

新生兒溶血病是新生兒時(shí)期常見疾病，常見貧血、黃疸等癥狀，病情進(jìn)展可繼發(fā)膽紅素腦病，危及新生兒正常成長(zhǎng)發(fā)育。當(dāng)胎兒遺傳了母體不存在的抗原，該抗原刺激母體產(chǎn)生抗體，而母體 IgG 抗體通過胎盤進(jìn)入胎兒體內(nèi)，抗原抗體不相容，引起胎兒免疫反應(yīng)，導(dǎo)致紅細(xì)胞破壞，誘發(fā)新生兒溶血病。一般新生兒溶血病與血型關(guān)系密切，母體妊娠20周后，主要是由 IgG 抗 A/B 抗體進(jìn)入胎兒體內(nèi)，一般溶血反應(yīng)程度是與母體內(nèi)免疫抗體進(jìn)入胎兒體內(nèi)量的水平相關(guān)[5]。臨床治療新生兒溶血病時(shí)，多選擇輸血方案，但在輸血時(shí)，需考慮患兒體內(nèi)是否存在游離抗體，以免不合理的同型輸血，加重溶血反應(yīng)。因此早期診斷、及時(shí)治療，為臨床輸血治療提供參考依據(jù)。

傳統(tǒng)試管法是檢測(cè)新生兒溶血病患兒血型血清學(xué)三項(xiàng)試驗(yàn)的主要技術(shù)，但傳統(tǒng)試管法操作環(huán)節(jié)多，操作時(shí)間長(zhǎng)，重復(fù)水平低，靈敏度差，容易出現(xiàn)漏診[6]。微柱凝膠技術(shù)首次應(yīng)用時(shí)間為上世紀(jì)90年代，具特異度高、靈敏度高、標(biāo)本量少等優(yōu)勢(shì)。對(duì)新生兒溶血病患兒采取微柱凝膠技術(shù)，選取符合相應(yīng)的稀釋液，合理配制為一定濃度的紅細(xì)胞懸液，隨后開展微管柱灌注。通過離心機(jī)離心，在微柱中凝膠顆粒的分子篩作用下，使單個(gè)紅細(xì)胞經(jīng)過其間，對(duì)已形成凝膠的紅細(xì)胞無法通過，形成不同的凝集反應(yīng)。采用微柱凝膠技術(shù)檢測(cè)新生兒溶血病，檢測(cè)結(jié)果觀察無需使用顯微鏡?？稍谥币曄掠^察檢查結(jié)果，檢測(cè)陽性為紅細(xì)胞于凝膠上層分散或中間分散，陰性為紅細(xì)胞于凝膠底部;通過微柱凝膠技術(shù)檢測(cè)結(jié)果穩(wěn)定，重復(fù)性好[7]。本組研究中，微柱凝膠技術(shù)檢出陽性率98.84%高于傳統(tǒng)試管法檢出陽性率74.42%，具顯著性差異（P<0.05）。研究發(fā)現(xiàn)，與傳統(tǒng)試管法檢測(cè)相比，微柱凝膠技術(shù)檢測(cè)新生兒溶血病，可準(zhǔn)確鑒定患兒血型，降低血型漏檢率，其原因?yàn)樾律鷥貉涂乖l(fā)育較低，容易出現(xiàn)弱A 型或弱 B 型，導(dǎo)致血型漏檢或誤報(bào)，若血型漏檢或誤報(bào)，會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤輸血，進(jìn)而加重溶血反應(yīng)，因此微柱凝膠技術(shù)可作為檢測(cè)新生兒血型的常規(guī)技術(shù)。本組研究發(fā)現(xiàn)，微柱凝膠技術(shù)對(duì)新生兒溶血病采用的三項(xiàng)試驗(yàn)檢測(cè)，其敏感性均高于試管法檢測(cè)，微柱凝膠技術(shù)可提高新生兒溶血病檢出率，具較高應(yīng)用價(jià)值。

直接抗人球蛋白檢測(cè)、游離抗體試驗(yàn)及抗體放散試驗(yàn)三項(xiàng)試驗(yàn)是檢測(cè)新生兒溶血病的常用試驗(yàn)方法，而三項(xiàng)試驗(yàn)方法存在一定差異性，一般是抗人球蛋白試劑檢測(cè)結(jié)果較弱，多是因ABO 系統(tǒng)的新生兒溶血病，患兒體內(nèi)抗原尚未發(fā)育完善，抗原位點(diǎn)較少，在進(jìn)行直接抗人球蛋白試驗(yàn)時(shí)，使體內(nèi)抗原抗體復(fù)合物難以與抗人球蛋白試劑產(chǎn)生凝集，造成抗人球蛋白試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果假陰性，但與其他兩種試驗(yàn)方法相比并無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。因此在檢測(cè)新生兒溶血病時(shí)，無法單純依賴一項(xiàng)試驗(yàn)方法，需結(jié)合三項(xiàng)試驗(yàn)法，以此提高新生兒溶血病檢出率。對(duì)婦產(chǎn)科醫(yī)生而言，應(yīng)進(jìn)行當(dāng)前女性優(yōu)生優(yōu)育宣教，開展產(chǎn)前夫妻血型鑒定;尤其是對(duì)O 型孕婦，丈夫非 O 型，進(jìn)行IgG 抗 A、抗 B 效價(jià)測(cè)定并開展孕婦免疫性抗體篩查，尤其是對(duì)死胎、流產(chǎn)、早產(chǎn)等孕婦，更應(yīng)加強(qiáng)產(chǎn)前檢查，以此減少新生兒溶血病的發(fā)生，并為早期新生兒溶血病診斷及干預(yù)提供有價(jià)值參考依據(jù)。

綜上所述，與傳統(tǒng)試管法相比，對(duì)新生兒溶血病采取微柱凝膠技術(shù)檢測(cè)，具有檢測(cè)結(jié)果的穩(wěn)定性好及準(zhǔn)確性高，可提高新生兒溶血病檢出陽性率，臨床價(jià)值高，值得推廣應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)

[1]? 王彬. 丙種球蛋白聯(lián)合雙面藍(lán)光照射治療新生兒ABO 溶血效果觀察

[J].中國(guó)民康醫(yī)學(xué) ， 2018， 30（20）：49-51.

[2] 楊璐 ， 王彥 ， 陳麟鳳 ， 等. ABO 血型新生兒溶血病患兒紅細(xì)胞致敏抗體熱放散效果與紅細(xì)胞量的關(guān)系[J].標(biāo)記免疫分析與臨床 ， 2017， 24（9）：973-975.

[3] 李洪兵 ， 冉柏林 ， 王純 ， 等. 黔江區(qū)某三甲醫(yī)院新生兒溶血病實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果分析[J].河北醫(yī)學(xué) ， 2018， 24（11）：177-180.

[4]? 趙祥文. 兒科急診醫(yī)學(xué)[M].4 版. 北京： 人民衛(wèi)生出版社 ， 2015：248-253. [5] 楊冬梅 ， 李志堅(jiān). ABO 新生兒溶血病引起高膽紅素血癥患兒溶血三項(xiàng)試驗(yàn)的相關(guān)性研究[J].中國(guó)藥物與臨床 ， 2017， 17（6）：911-913.

[6] 譚兵 ， 李青 ， 楊婷 ， 等. 2種方法檢測(cè)孕婦免疫球蛋白 G 抗-A（B）效價(jià)的對(duì)比研究[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床 ， 2017， 14（4）：492-494.

[7]? 田曉妍. 微柱凝膠技術(shù)對(duì) ABO 新生兒溶血病患兒輸血前檢驗(yàn)效果的影響分析[J].臨床檢驗(yàn)雜志（ 電子版）， 2017， 6（3）：441-442.