復(fù)方元胡止痛片的薄層色譜鑒別

劉斯亮，姜范成，康凱

（大連市檢驗(yàn)檢測(cè)認(rèn)證技術(shù)服務(wù)中心，遼寧 大連）

0 引言

復(fù)方元胡止痛片收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中成藥制劑第七冊(cè)，標(biāo)準(zhǔn)號(hào)為WS3-B1386-3。處方由延胡索，醋香附，川楝子，徐長(zhǎng)卿等四味藥材組成，具有疏氣止痛作用，用于肝胃氣痛，胃脘脹痛，胸肋痛，月經(jīng)痛。原部頒標(biāo)準(zhǔn)只有三項(xiàng)化學(xué)鑒別，不能全面控制該藥品的質(zhì)量。為了提高該制劑的質(zhì)量，擬采用薄層色譜對(duì)方中徐長(zhǎng)卿，香附，延胡索進(jìn)行鑒別，為修訂提高制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供科學(xué)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 儀器

BS42000S 型電子天平（Sartorius）；雙槽層析薄層缸；HH-4 型恒溫水浴鍋。

1.2 藥材與試劑

徐長(zhǎng)卿，香附，延胡索；乙醚，乙酸乙酯，甲苯，環(huán)己烷，三氯甲烷，甲醇，丙酮。

2 方法與結(jié)果

2.1 徐長(zhǎng)卿的薄層鑒別[1-3]

取本品7 片，研細(xì)，將其放在有瓶塞的錐形瓶中，在里面加入20ml 乙醚，用瓶塞塞緊，振搖60min，濾過，待濾液揮干后將殘?jiān)尤?ml 的乙酸乙酯，將其進(jìn)行溶解，所得溶液作為供試品溶液。另取徐長(zhǎng)卿對(duì)照藥材lg，同法制成對(duì)照藥材溶液。另取丹皮酚對(duì)照品，加乙酸乙酯制成每lml 含1mg 的溶液，為對(duì)照品溶液。按處方中藥味比例，配置不含徐長(zhǎng)卿的陰性對(duì)照，再同法制成陰性溶液。照薄層色譜法（通則0502)試驗(yàn)，吸取供試品溶液10μl、對(duì)照藥材溶液10μl 和對(duì)照品溶液5μ1，將吸取的溶液分別點(diǎn)放在硅膠G 薄層板上，以環(huán)己烷-三氯甲烷-乙酸乙酯（10:2:0.8)為展開劑，展開，取出，晾干，使用濃度為10% 的硫酸乙醇進(jìn)行噴灑，并在105℃的溫度下進(jìn)行加熱處理，加熱直至斑點(diǎn)出現(xiàn)清晰的顯色。供試品色譜中，與對(duì)照組藥材及對(duì)照品的色譜相應(yīng)的位置上有相同的斑點(diǎn)顏色，陰性溶液無(wú)干擾。

2.2 香附的薄層鑒別[4-6]

取a-香附酮對(duì)照品，加乙酸乙酯制成每lml 含lmg 的溶液，作為對(duì)照品溶液。按處方中藥味比例，配置不含香附的陰性對(duì)照，再同法制成陰性溶液。照薄層色譜法（通則0502）試驗(yàn)，吸取徐長(zhǎng)卿項(xiàng)下的供試品溶液10μ1 和對(duì)照品溶液2μ1，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254 薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯（9:1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性溶液無(wú)干擾。

2.3 延胡索的薄層鑒別[7]

取本品7 片，研細(xì)，置具塞錐形瓶中，加入50ml 的甲醇之后進(jìn)行超聲處理，時(shí)間為30min，濾過，將濾液蒸干處理，在殘?jiān)屑尤?0ml 的水進(jìn)行溶解，并使用濃氨試液對(duì)pH 值進(jìn)行調(diào)試，使其在9-10 之間，之后用乙醚進(jìn)行提取，共提取2 次，每次的提取量為30ml，將乙醚液進(jìn)行收集，并揮干，殘?jiān)屑尤?ml 的甲醇進(jìn)行溶解，得到的溶液作為供試品溶液。取1g延胡索的對(duì)照藥材，采用相同的方法制成對(duì)照藥材溶液。再取延胡索乙素對(duì)照品，加入甲醇進(jìn)行溶解，使得制成的溶液中1ml 含有0.5mg 的溶液，并將其作為對(duì)照品溶液。按處方中藥味比例配置出不含延胡索的陰性對(duì)照組，采用相同的方法制成陰性溶液。照薄層色譜法（通則0502)試驗(yàn)，吸取供試品溶液3μl、對(duì)照藥材溶液3μl 和對(duì)照品溶液2μ1，在同一硅膠G 薄層板上分別點(diǎn)放，薄層板使用1%的氫氧化鈉溶液制備，展開劑為甲苯-丙酮（9:2)，展開，取出，晾干，將其放置在碘缸中一段時(shí)間（5min）再取出，將吸附的碘揮干，置紫外燈365nm 下檢視。供試品色譜中，與對(duì)照品及對(duì)照藥材色譜位置上有相同的顯色斑點(diǎn)，同時(shí)陰性溶液也顯示有相應(yīng)的干擾。

3 討論

復(fù)方元胡止痛片國(guó)家共計(jì)6 家生產(chǎn)企業(yè)生產(chǎn)，處方由延胡索，醋香附，川楝子，徐長(zhǎng)卿等四味藥材組成。本實(shí)驗(yàn)在原有化學(xué)鑒別的基礎(chǔ)上增加了香附、徐長(zhǎng)卿、延胡索的薄層色譜鑒別，通過對(duì)2 批樣品及陰性對(duì)照的檢驗(yàn)，證實(shí)方法專屬性較強(qiáng)、操作簡(jiǎn)單可靠，可作為對(duì)原有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的補(bǔ)償與完善。筆者對(duì)不同廠家（青島海洋，上海譜科，上海盛亞）的薄層板進(jìn)行了考察，結(jié)果表明同等條件下不同廠家薄層板對(duì)分離條件無(wú)影響。

復(fù)方元胡止痛片處方中延胡索、徐長(zhǎng)卿藥材為原粉藥味入料，分別對(duì)兩種藥材進(jìn)行顯微鑒別研究[8]?！吨袊?guó)藥典》2015 年版一部[9]中延胡索顯微特征有糊化淀粉粒、下皮厚壁細(xì)胞、螺紋導(dǎo)管；徐長(zhǎng)卿顯微特征有外皮層細(xì)胞、草酸鈣簇晶、分泌細(xì)胞、內(nèi)皮層細(xì)胞。經(jīng)過顯微鏡鑒別篩選后確定，延胡索的“下皮厚壁細(xì)胞綠黃色，細(xì)胞多角形、類方形或長(zhǎng)方形，壁稍彎曲，木化，有的成連珠狀增厚，紋孔細(xì)密”的特征性顯微鑒別點(diǎn)，鏡檢率極低；徐長(zhǎng)卿的簇晶的顯微特征性鑒別點(diǎn)，鏡檢率高。故草酸鈣簇晶鑒別可以作為復(fù)方元胡止痛片的顯微鑒別項(xiàng)。

筆者對(duì)延胡索進(jìn)行的薄層色譜探索性研究，對(duì)照品和對(duì)照藥材的色譜位置上雖然有相應(yīng)斑點(diǎn)，但陰性樣品有干擾，分析是由于其他藥味對(duì)延胡索有影響。因此本藥中延胡索不適用于薄層色譜鑒別。考慮到準(zhǔn)確性問題，對(duì)延胡索進(jìn)行高效液相色譜分析，可更準(zhǔn)確地測(cè)定其具體含量。