雞毒支原體病的診斷和防治

劉艷 徐春志 景書(shū)灝 陳紅 袁翠霞 楊峰 張海 楊源/貴州省貴陽(yáng)市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 550000

1 病原與致病機(jī)理

本病的病原體為雞毒支原體(Mycoplasma Gallisepticum,MG)，又稱霉形體，屬于軟皮體綱支原體目支原體科支原體屬，直徑為250～500nm，無(wú)細(xì)胞壁，因而有柔軟的形態(tài)，是目前發(fā)現(xiàn)的最小的原核微生物。由于MG沒(méi)有細(xì)胞壁，MG感染機(jī)體是通過(guò)表面的黏附蛋白吸附于宿主上呼吸道上皮細(xì)胞，通過(guò)細(xì)胞因子和TLRs（Toll-like receptors）介導(dǎo)，使宿主細(xì)胞受損和凋亡，纖毛脫落，繼而引發(fā)宿主的炎癥反應(yīng)，由此感染宿主呼吸道，建立慢性感染；然后通過(guò)血液循環(huán)，累及全身的組織、器官。

2 診斷方法

2.1 MG分離鑒定MG的分離培養(yǎng)較困難，其培養(yǎng)基所需營(yíng)養(yǎng)成分復(fù)雜，目前己研制出了如Frey氏培養(yǎng)基等多種用于MG分離的培養(yǎng)基，其中還需加入20%的馬血清、10%的酵母浸出液以及抑制雜菌的生長(zhǎng)的醋酸鉈和青霉素。當(dāng)接種的固體培養(yǎng)基在顯微鏡下觀察到典型的“煎蛋狀”菌落時(shí)則可初步確定分離到了MG，此時(shí)可利用血清學(xué)或分子學(xué)檢測(cè)來(lái)進(jìn)一步確診。但該方法所需時(shí)間長(zhǎng)，難度大，有較大局限性，很難廣泛應(yīng)用。

2.2 血清學(xué)方法MG的血清學(xué)診斷方法較多，有常見(jiàn)的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)，平板凝集試驗(yàn)(SPA)、血凝抑制(HI)試驗(yàn)等，SPA試驗(yàn)具有快速、敏感等優(yōu)點(diǎn)，缺點(diǎn)是易出現(xiàn)假陽(yáng)性。HI試驗(yàn)在用于診斷雞群MG感染時(shí)特異性好，但MG的最低檢出限較高，因此檢測(cè)結(jié)果可能出現(xiàn)假陰性，通常只作為預(yù)判或輔助診斷。ELISA相較于其他血清學(xué)診斷方法，其特異性、敏感性都更有優(yōu)勢(shì)，應(yīng)用較廣。目前，存在的主要問(wèn)題是制備支原體單克隆抗體的成本較高，因此該類檢測(cè)試劑的價(jià)格通常較高。

2.3 分子生物學(xué)技術(shù)分子生物學(xué)方法有著高效、敏感、特異等眾多優(yōu)點(diǎn)，目前已廣泛應(yīng)用于各類畜禽疾病的診斷。如今，PCR檢測(cè)MG技術(shù)較成熟，結(jié)果可靠性高，已有多種用于雞群MG診斷的PCR方法被報(bào)道，如Gharibi等人設(shè)計(jì)了185bp特異性引物用于檢測(cè)MG，經(jīng)臨床驗(yàn)證方法真實(shí)可行。Raviv Z等設(shè)計(jì)了針對(duì)MGc2基因的檢測(cè)引物，特異性高，與其他類型的支原體不存在交叉反應(yīng)。趙杰等開(kāi)發(fā)了MG的套式PCR檢測(cè)方法，結(jié)果發(fā)現(xiàn)檢測(cè)MG靈敏度高，且與MS無(wú)交叉性。在臨床檢測(cè)MG時(shí)熒光PCR的敏感性比普通PCR更有優(yōu)越性，羅思思等人開(kāi)發(fā)了MG的二重?zé)晒釶CR，可鑒別診斷MG強(qiáng)毒株和弱毒株，檢測(cè)靈敏度可達(dá)10拷貝/μL，檢出率高。大多數(shù)禽支原體還可根據(jù)其獨(dú)特的限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（RFLP）來(lái)區(qū)分，但該方法僅限于鑒定禽支原體的純培養(yǎng)物。

3 防控手段

3.1 疫苗預(yù)防

3.1.1 滅活疫苗滅活疫苗一般無(wú)需特殊保存，在使用時(shí)安全方便。目前MG滅活疫苗有F株、R株、S6株等不同毒株類型，就保護(hù)力而言，F(xiàn)株滅活疫苗效果最好，在使用時(shí)，一般需要多次皮下注射來(lái)加強(qiáng)免疫。TanL等的研究發(fā)現(xiàn)一種MG源的GroEL抗血清對(duì)MG有很好的殺滅作用，因此后續(xù)對(duì)MG滅活疫苗的開(kāi)發(fā)可將該蛋白作為切入點(diǎn)。

3.1.2 弱毒疫苗目前國(guó)內(nèi)養(yǎng)殖戶在對(duì)雞群進(jìn)行CRD預(yù)防是多采用弱毒疫苗，針對(duì)MG的預(yù)防現(xiàn)采用的活疫苗多為F株疫苗，F(xiàn)株疫苗使用廣泛，經(jīng)長(zhǎng)期臨床使用驗(yàn)證其致病力較低，對(duì)雞群有很好的保護(hù)力，有研究證明該疫苗使用還能提高產(chǎn)蛋量。因此，F(xiàn)株疫苗是預(yù)防MG的優(yōu)良候選。但近年有研究發(fā)現(xiàn)F株疫苗有散毒的風(fēng)險(xiǎn)，有的還可經(jīng)蛋垂直傳播給下一代。除F株外，現(xiàn)在還有TS-11、6/85、K株，就安全性而言，這些疫苗株優(yōu)于F株，但在保護(hù)力方面略遜之，其中又以TS-11使用最多，該疫苗株對(duì)產(chǎn)蛋雞的產(chǎn)蛋性能影響有限，因此，可作為產(chǎn)蛋雞預(yù)防MG的首選疫苗。