山羊同期發(fā)情-排卵定時(shí)人工輸精及配套技術(shù)程序

鄭麗艷 王振濤 羅明久

山羊同期發(fā)情-排卵定時(shí)人工輸精及配套技術(shù)程序

鄭麗艷①王振濤②羅明久③*

（①山東省濟(jì)寧市嘉祥縣市場(chǎng)監(jiān)督管理局 272400 ②山東省德州市陵城區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村局 ③山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院 山東 泰安）

山羊同期發(fā)情-排卵和定時(shí)人工輸精技術(shù)是指通過利用外源激素調(diào)控山羊的生殖生理，誘導(dǎo)山羊同時(shí)發(fā)情-排卵，并進(jìn)行定時(shí)人工輸精(FTAI)的一項(xiàng)繁殖技術(shù)。經(jīng)過同期發(fā)情-排卵處理后的山羊，因發(fā)情-排卵時(shí)間較為集中，可以不進(jìn)行發(fā)情觀察或發(fā)情鑒定，在預(yù)定的時(shí)間內(nèi)進(jìn)行人工輸精，而且不降低受胎率。在生產(chǎn)實(shí)踐中，應(yīng)用該技術(shù)程序可減少因安靜發(fā)情、發(fā)情不明顯而造成漏配現(xiàn)象的發(fā)生，而且因能集中配種和產(chǎn)羔，可促進(jìn)人工輸精技術(shù)的推廣應(yīng)用，提高山羊的繁殖和羔羊生產(chǎn)的效率，降低繁殖技術(shù)人員和飼養(yǎng)人員的勞動(dòng)強(qiáng)度，對(duì)提升山羊養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)化水平具有重要意義。

1 本技術(shù)程序適用范圍

本程序適于大部分山羊，但在生產(chǎn)實(shí)踐情況下，山羊的發(fā)情-排卵及定時(shí)人工輸精的結(jié)果也會(huì)受到山羊的生殖生理、飼養(yǎng)管理、體況和地理位置、氣候、光照以及所用激素等多種因素的影響。在奶山羊養(yǎng)殖中，建議慎重應(yīng)用同期發(fā)情-排卵技術(shù)，根據(jù)產(chǎn)奶需求較為均勻地分布奶山羊配種時(shí)間，有利于羊的繁殖和羊奶生產(chǎn)。因此，在應(yīng)用該技術(shù)程序時(shí)，需要根據(jù)當(dāng)?shù)氐膶?shí)際情況，參照技術(shù)程序有所變化。在后續(xù)的研究與應(yīng)用中，我們將依據(jù)不同的飼養(yǎng)地區(qū)、山羊的狀況及其相關(guān)的影響因素，繼續(xù)進(jìn)行探索和完善該技術(shù)操作程序，以促進(jìn)養(yǎng)羊業(yè)的快速和健康發(fā)展。

2 技術(shù)程序

本技術(shù)程序主要分為同期發(fā)情-排卵處理、精液處理、人工輸精和繁殖管理等4個(gè)方面。

2.1 排卵處理

由于影響山羊同期發(fā)情-排卵的因素較多，如（1）季節(jié)、氣候(光照、溫度、濕度、風(fēng)速、風(fēng)力)、飼養(yǎng)環(huán)境(管理方式、群體效應(yīng)、公羊效應(yīng))和地理位置等自然因素；（2）山羊生理狀態(tài)(泌乳、應(yīng)激)、年齡、體況(肥胖、瘦弱)和營(yíng)養(yǎng)等個(gè)體因素；（3）應(yīng)用激素的種類、性質(zhì)、生理效能、劑量和方法等。因此，對(duì)山羊進(jìn)行同期發(fā)情-排卵處理時(shí)，需要根據(jù)生產(chǎn)實(shí)際情況考慮相應(yīng)的影響因素。

2.1.1 山羊的準(zhǔn)備 （1）應(yīng)用激素處理前，需要對(duì)山羊進(jìn)行妊娠檢查，對(duì)于確定未孕的山羊方可應(yīng)用相應(yīng)激素處理。（2）為了提高山羊的發(fā)情-排卵率，采用標(biāo)準(zhǔn)化日糧進(jìn)行飼喂，同時(shí)根據(jù)生產(chǎn)實(shí)際情況進(jìn)行打耳號(hào)、驅(qū)蟲、注射三聯(lián)四防疫苗和傳染性胸膜肺炎疫苗等。（3）為了促使母羊能提早發(fā)情，應(yīng)適當(dāng)縮短母羊哺乳期。對(duì)羔羊進(jìn)行早期斷奶時(shí)，需要應(yīng)用人工哺乳及人工育羔等培育技術(shù)。（4）應(yīng)用公羊效應(yīng)，在母羊群中引入性欲強(qiáng)的腹部佩戴圍裙的公羊，2~3次/d，每次1h左右，既有利于促進(jìn)母羊的卵泡發(fā)育，又可避免公羊?qū)δ秆虻慕慌?。?）選留體質(zhì)健壯、體況評(píng)分優(yōu)秀、遺傳性能穩(wěn)定及后代生產(chǎn)性能良好的公羊作為種羊。同時(shí)，留作種用的公羊也需易于采精及精液品質(zhì)良好。

2.1.2 激素的準(zhǔn)備 （1）為了促進(jìn)卵泡發(fā)育，可注射孕馬血清促性腺激素(eCG)或促性腺激素釋放激素(GnRH)。（2）為了抑制卵泡發(fā)育，可采用含孕激素或其類似物的陰道栓，如海綿栓、CIDR(Controlled Internal Drug Release)或PRID (Progesterone Releasing Intravaginal Device)等。陰道栓處理分為長(zhǎng)期處理(13-18d)和短期處理(5-12d)兩種。長(zhǎng)期處理的發(fā)情同期化程度較高，但受胎率較低。短期處理的發(fā)情同期化程度較低，但受胎率接近或超過正常水平。這可能是由于孕激素影響精子在生殖道內(nèi)的運(yùn)行和活力以及子宮內(nèi)膜的功能所致。（3）為了促進(jìn)卵泡發(fā)育成熟并排卵，可注射GnRH或其類似物(如LHRH-A3，即促排3號(hào))，也可注射人絨毛膜促性腺激素(hCG)。應(yīng)用GnRH誘導(dǎo)排卵，有黃體發(fā)育不全現(xiàn)象發(fā)生，可用hCG或LHRH-A3代替GnRH。（4）為了溶解黃體，可注射前列腺素(PGF2α)或其類似物，如氯前列烯醇、氯前列烯醇鈉和D-氯前列醇烯鈉等。

2.1.3 孕激素陰道栓(孕激素+eCG+PGF2α+LHR H-A3)應(yīng)用技術(shù)程序 （1）在第0d(任意一天)的上午，保定者雙手抓住山羊兩后肢，倒立提起，雙腿夾住肩胛部，腹部朝外。放栓者清洗、消毒外陰部，將涂有潤(rùn)滑劑的陰道栓置入陰道內(nèi)，前端接近子宮頸外口。需要觀察陰道栓是否有脫落的情況，若有脫落，及時(shí)再次置入。（2）為了提高母羊卵泡發(fā)育率及雙羔率，在陰道栓取出前48~24h或同時(shí)注射300IU eCG。（3）在第5~12d或13~18d的上午取出陰道栓，直接拉出即可。為了提高同期發(fā)情率，在取出陰道栓同時(shí)注射PGF2α或其類似物。（4）在陰道栓取出后36h~60h發(fā)情，個(gè)別羊會(huì)在36h內(nèi)或60h后發(fā)情。（5）在第7~14d或15~20d的下午(即陰道栓取出后54~56h)，進(jìn)行FTAI。為了增加排卵率，可在輸精的同時(shí)注射LHRH-A3。（6）在第8~15d或16~21d的上午可再次進(jìn)行人工輸精，以提高受胎率。

2.1.4 PGF2α(2次注射)應(yīng)用技術(shù)程序 （1）在第0d(任意一天)的上午注射PGF2α。（2）在第7~9d或11~12d(間隔6~8d或10~11d)的上午注射PGF2α。（3）在第9~11d或13~14d的下午進(jìn)行FTAI(即最后一次注射PGF2α后54~56h)。為了增加排卵率，可在輸精的同時(shí)注射LHRH-A3。（4）在第10~12d或14~15d的上午可再次進(jìn)行人工輸精，以提高受胎率。

2.1.5 Ovsych(GnRH+PGF2α+GnRH)應(yīng)用技術(shù)程序 （1）在第0d(任意一天)的上午注射GnRH。（2）在第7d的上午注射PGF2α。（3）在第9d的下午注射GnRH或hCG(即注射PGF2α后56h)。（4）在第10d的上午進(jìn)行FTAI。為了增加排卵率，可在輸精的同時(shí)注射LHRH-A3。（5）可間隔12~16h再次進(jìn)行人工輸精，以提高受胎率。

2.1.6 PGF2α+GnRH應(yīng)用技術(shù)程序 （1）在第0d(任意一天)的上午注射PGF2α和GnRH。（2）在第7d的上午注射GnRH。（3）在第14d的上午注射PGF2α。（4）在第16d的下午注射 GnRH或hCG(即最后一次注射PGF2α后56h)。（5）在第17d的上午進(jìn)行FTAI。為了增加排卵率，可在輸精的同時(shí)注射LHRH-A3。（6）可間隔12~16h再次進(jìn)行人工輸精，以提高受胎率。

2.2 精液處理

2.2.1 精液采集 為了保證公羊建立良好的采精條件反射，需要設(shè)置安靜、清潔的采精室，應(yīng)用假陰道法采精。青年羊每周采精2~3d，成年羊每周采精3~4d，采精1~2次/d。

2.2.2 精液品質(zhì)評(píng)定 外觀檢查：精液呈乳白色、云霧狀，精液量為1ml左右。活力測(cè)定：精子活力在0.9以上。密度測(cè)定：精子密度≥20× 108/ml。形態(tài)學(xué)檢查：精子畸形率<14%，精子頂體異常率<14%。

2.2.3 精液稀釋 （1）稀釋液：稀釋液可采用如下幾種配方：①奶粉稀釋液羊奶粉100g，蒸餾水100ml，青霉素10萬(wàn)IU，鏈霉素0.1g。②鮮奶稀釋液取健康牛、羊新鮮奶，水浴(92~95℃) 15min，冷卻后去除奶皮，取100ml，青霉素10萬(wàn)IU，鏈霉素0.1g。③葡萄糖-檸檬酸鈉稀釋液葡萄糖3g，檸檬酸鈉1.4g，加蒸餾水至100ml，青霉素10萬(wàn)IU，鏈霉素0.1g。④葡萄糖-檸檬酸鈉-EDTA稀釋液葡萄糖3g，檸檬酸鈉1.4g，EDTA0.1g，加蒸餾水至100ml，青霉素10萬(wàn)IU，鏈霉素0.1g。⑤乳糖-葡萄糖-檸檬酸鈉稀釋液乳糖4.6g，葡萄糖3.1g，檸檬酸鈉1.6g，加蒸餾水至100ml，青霉素10萬(wàn)IU，鏈霉素0.1g。⑥生理鹽水稀釋液0.9%氯化鈉溶液，青霉素10萬(wàn)IU，鏈霉素0.1g。（2）稀釋方法：山羊新鮮精液中直線前進(jìn)運(yùn)動(dòng)的精子密度可達(dá)20~30億(20~30×108)/ml。將新鮮精液用30℃的稀釋液以1:9進(jìn)行稀釋，將稀釋液緩慢地加入到精液中。如果精子需要卵黃包被，可在稀釋液中加入20%卵黃，制作卵黃包被液，然后將新鮮精液與卵黃包被液以1:1混合，在5min內(nèi)，30℃，200×g離心10min，去上清，取下層精子，應(yīng)用稀釋液以1:9稀釋。精液稀釋后，需要進(jìn)行精子活率和密度評(píng)定，以檢驗(yàn)稀釋效果。

2.2.4 精液保存 稀釋后的精液可用塑料細(xì)管或精液瓶分裝，標(biāo)明種公羊號(hào)、采精時(shí)間和活率等。在5℃保存?zhèn)溆?。在室溫下?5℃溫水中升溫，以備輸精。

2.3 人工輸精

2.3.1 人工輸精方法 （1）常用的人工輸精方法為子宮頸輸精方式。山羊的子宮頸內(nèi)壁上有許多皺褶，頸管細(xì)而彎曲，發(fā)情時(shí)開張程度較小，增加了人工輸精的難度。（2）人工輸精時(shí)，首先保定母羊，方法與放陰道栓相同，然后擦拭、消毒母羊外陰部及尾部，在母羊外陰部及開膣器末端涂上潤(rùn)滑劑，將開膣器插入母羊陰道內(nèi)，確定子宮頸外口位置。將輸精器插入子宮頸外口內(nèi)，深度約1~2cm，緩慢注入精液。完成輸精后，撤出輸精器和開膣器，按摩陰蒂，清洗輸精器械。（3）隨著腹腔鏡技術(shù)的應(yīng)用與推廣，可采用腹腔鏡進(jìn)行人工輸精，將精液注入子宮角內(nèi)，可大幅減少精液的用量，并可獲得更高的受胎率。

2.3.2 輸精時(shí)間和次數(shù) 雖然準(zhǔn)確把握人工輸精時(shí)間是決定山羊受胎率的關(guān)鍵因素，但是采用定時(shí)人工輸精技術(shù)，無(wú)需進(jìn)行發(fā)情鑒定，輸精時(shí)間和次數(shù)依據(jù)同期發(fā)情-排卵技術(shù)程序而定。

2.3.3 輸精量 應(yīng)用稀釋后的精液，每只羊的輸精劑量為0.1~0.2ml，輸入的有效精子數(shù)至少1000萬(wàn)(1×107)個(gè)以上。

2.4 繁殖管理

2.4.1 種公羊采精和母羊輸精記錄 為了總結(jié)經(jīng)驗(yàn)，提高受胎率，需要按時(shí)、準(zhǔn)確做好種公羊采精、精液品質(zhì)評(píng)定及母羊人工輸精記錄。

2.4.2 妊娠診斷 在人工輸精后第30d、60d分別進(jìn)行妊娠診斷。對(duì)于未孕羊，可進(jìn)行再次處理。對(duì)于妊娠羊，需要加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，確保妊娠順利。

2.4.3 受胎率和產(chǎn)羔性能測(cè)定 需要計(jì)算受胎率、產(chǎn)羔率、公母比、羔羊重等指標(biāo)。

2.4.4 飼養(yǎng)管理 無(wú)論是公羊還是母羊，都應(yīng)加強(qiáng)飼養(yǎng)管理。供應(yīng)充足的優(yōu)質(zhì)飼草和飼料，在飼料中需要添加適量的微量元素和多種維生素。保持每天充足的運(yùn)動(dòng)，維持合理體況。對(duì)于妊娠羊，特別需要強(qiáng)化飼養(yǎng)管理，防止流產(chǎn)及圍產(chǎn)期相關(guān)疾病的發(fā)生。

2.4.5 統(tǒng)計(jì)分析 需要對(duì)獲得的相關(guān)數(shù)據(jù)定期進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，不斷完善山羊同期發(fā)情-排卵定時(shí)輸精技術(shù)，促進(jìn)山羊繁殖力的提高。

國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目(2017YFD0501904)。

（2020–06–10）

S827.3

B

1007-1733(2020)09-0022-03