高致病性禽流感診斷技術(shù)及人員防護(hù)技術(shù)規(guī)范（2020年版）

1 診斷技術(shù)規(guī)范

1.1 流行病學(xué)

1.1.1 傳染源 主要為病禽（野鳥）和帶毒禽（野鳥）。病毒可在污染的糞便、水等環(huán)境中存活較長時間。

1.1.2 傳播途徑 主要為接觸傳播和呼吸道傳播。感染禽（野鳥）及其分泌物和排泄物，污染的飼料、水、蛋托（箱）、墊草、種蛋、雞胚和精液等媒介以及氣溶膠，都可傳播禽流感病毒。

1.1.3 易感動物 雞、火雞、鴨、鵝、鵪鶉、雉雞、鷓鴣、鴕鳥、孔雀等多種禽類易感，多種野鳥也可感染發(fā)病。

1.1.4 潛伏期 病毒毒力、家禽免疫情況、品種和抵抗力、飼養(yǎng)管理和營養(yǎng)狀況、環(huán)境衛(wèi)生及應(yīng)激因素等都會影響潛伏期。潛伏期可從數(shù)小時到數(shù)天，最長可達(dá)21 d。世界動物衛(wèi)生組織《陸生動物衛(wèi)生法典》將高致病性禽流感的潛伏期定為21d。

1.1.5 發(fā)病率和病死率 與宿主、感染毒株和禽群免疫狀況等因素密切相關(guān)，最高可達(dá)100%。

1.1.6 季節(jié)性 沒有明顯的季節(jié)性，但冬春多發(fā)。

1.2 臨床表現(xiàn) 飲水量異常變化、采食量下降；精神沉郁，嗜睡，可見扭頸等神經(jīng)癥狀；呼吸困難，有呼吸道癥狀；冠髯發(fā)紺、發(fā)紫，腳鱗或有出血；產(chǎn)蛋突然下降，軟殼蛋、畸形蛋增多；發(fā)病率高，發(fā)病急、死亡快；鴨、鵝等水禽可見腹瀉和神經(jīng)癥狀，有時可見角膜發(fā)紅、充血、有分泌物，甚至失明。

1.3 剖檢變化 氣管彌漫性充血、出血，有少量黏液；肺部有炎性癥狀。腹腔有渾濁的炎性分泌物，腸道可見卡他性炎癥；輸卵管內(nèi)有渾濁的炎性分泌物，卵泡充血、出血、萎縮、破裂，有的可見卵黃性腹膜炎；胰腺邊緣有出血、壞死。心冠及腹部脂肪出血；腺胃肌胃交界處可見帶狀出血，腺胃乳頭可見出血；盲腸扁桃體腫大出血；直腸黏膜及泄殖腔出血。

急性死亡家禽有時無明顯剖檢變化。

1.4 實驗室診斷

1.4.1 樣品的采集、運(yùn)輸和保存 盡量在發(fā)病初期采集具有典型臨床癥狀的禽只樣品。采樣過程中應(yīng)避免交叉污染，并規(guī)范填寫采樣登記表。

1.4.1.1 血清樣品的采集 無菌采集禽類的血液，每只約2 mL，編號并填寫相應(yīng)采樣單。待血液凝固血清析出后，收集血清用于血凝抑制（HI）檢測。

1.4.1.2 病原學(xué)樣品的采集 活禽可采集咽喉和（或）泄殖腔拭子樣品，病死禽可采集氣管、肺和腦等組織樣品。

（1）拭子樣品：取咽喉拭子時將拭子深入喉頭及上顎裂來回刮2～3 次并旋轉(zhuǎn)，取分泌液；取泄殖腔拭子時將拭子深入泄殖腔旋轉(zhuǎn)一圈并沾取少量糞便。將采樣后的拭子分別放入盛有1.2 mL采樣緩沖液的2 mL采樣管中，編號并填寫相應(yīng)采樣單。

（2）組織樣品：發(fā)病禽可無菌采集氣管、肺、腦、腸（包括內(nèi)容物）、肝、脾、腎、心等組織臟器，裝入無菌采樣袋或其他滅菌容器，編號并填寫相應(yīng)采樣單。

1.4.1.3 樣品保存、包裝和運(yùn)輸 樣品采集后置保溫箱中，加入預(yù)冷的冰袋，密封，盡量24 h內(nèi)送到實驗室。樣品的包裝和運(yùn)輸應(yīng)符合農(nóng)業(yè)農(nóng)村部《高致病性動物病原微生物菌（毒）種或者樣本運(yùn)輸包裝規(guī)范》等規(guī)定。

樣品運(yùn)抵后應(yīng)盡快處理。病原學(xué)樣品在4 ℃下存放不得超過4 d，否則應(yīng)在-70 ℃下保存；在樣品保存過程中，應(yīng)避免反復(fù)凍融；盡量避免在-20 ℃下保存。血清學(xué)樣品如在一周內(nèi)能檢測，則保存在4 ℃環(huán)境中，否則應(yīng)在-20 ℃下保存。

1.4.2 血清學(xué)檢測 采用HI 試驗，檢測血清中H5 或H7 亞型禽流感病毒的血凝素抗體。HI 抗體水平≥24，結(jié)果判定為陽性。

1.4.3 病原學(xué)檢測

1.4.3.1 病原學(xué)快速檢測 采用反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）或?qū)崟r熒光定量RT-PCR 等方法。

1.4.3.2 血凝素基因裂解位點(diǎn)序列測定 對血凝素基因裂解位點(diǎn)的核苷酸序列進(jìn)行測定，與高致病性禽流感病毒基因序列比對。

1.4.3.3 病毒分離與鑒定 采用雞胚接種或細(xì)胞培養(yǎng)分離鑒定病毒。從事高致病性禽流感病毒的分離鑒定工作，必須經(jīng)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部批準(zhǔn)。

1.4.3.4 致病性測定 靜脈內(nèi)接種，致病指數(shù)（IVPI）大于1.2；或用0.2 mL 1∶10 稀釋的無菌感染流感病毒的雞胚尿囊液，經(jīng)靜脈注射接種8 只4～8周齡的易感雞，在接種后10 d內(nèi)能致6～7只或8只雞死亡，即死亡率≥75%。

1.5 結(jié)果判定

1.5.1 可疑病例 禽群發(fā)病率、死亡率超出正常范圍，且符合下述標(biāo)準(zhǔn)之一的，判定為可疑病例。

1.5.1.1 臨床判斷標(biāo)準(zhǔn) （1）腳鱗出血；（2）冠髯發(fā)紺，頭部和面部水腫；（3）產(chǎn)蛋突然下降，軟殼蛋、畸形蛋增多；（4）出現(xiàn)神經(jīng)癥狀。

符合上述條件之一的，判定為符合臨床標(biāo)準(zhǔn)。

1.5.1.2 剖檢病變標(biāo)準(zhǔn) （1）消化道、呼吸道黏膜廣泛充血、出血；（2）心冠及腹部脂肪出血；（3）卵泡充血、出血，可見卵黃性腹膜炎；（4）腺胃肌胃交界處可見帶狀出血。

符合上述條件之一的，判定為符合剖檢病變標(biāo)準(zhǔn)。

1.5.2 疑似病例 對臨床可疑病例，經(jīng)市（地）、縣級動物疫病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)實驗室檢測為H5或H7 亞型禽流感病毒核酸陽性的，判定為疑似病例。

1.5.3 確診病例 對疑似病例，省級動物疫病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)經(jīng)RT-PCR或?qū)崟r熒光定量RT-PCR方法復(fù)核陽性，且測序證實含有高致病性禽流感病毒分子特征的病毒核酸或病毒分離鑒定為高致病性禽流感病毒的，可判定為確診病例。

2 人員防護(hù)技術(shù)規(guī)范

2.1 疫情處置人員

2.1.1 進(jìn)入疫情處置相關(guān)場所時，疫情處置人員應(yīng)穿防護(hù)服和膠靴，佩戴橡膠手套、N95 口罩、護(hù)目鏡。

2.1.2 離開疫情處置相關(guān)場所時，應(yīng)在出口處脫掉防護(hù)用品，交工作人員集中處理，并在換衣區(qū)域消毒，回到駐地后要洗浴。

2.2 飼養(yǎng)人員 飼養(yǎng)人員一般不參與疫情處置工作，特殊情況下參與疫情處置工作的，應(yīng)采取適當(dāng)?shù)姆雷o(hù)措施：

2.2.1 與可能感染的家禽及其糞便等污染物品接觸前，必須戴口罩、手套和護(hù)目鏡，穿防護(hù)服和膠靴。

2.2.2 工作完畢后，脫掉防護(hù)用品，交工作人員集中處理，并洗浴。同時，對可能污染的衣物須用70 ℃以上的熱水浸泡5 min 或用消毒劑浸泡，然后再用肥皂水洗滌，于太陽下晾曬。

2.3 健康監(jiān)測

2.3.1 免疫功能低下、60 歲以上、有慢性心臟和肺臟疾病的人員，原則上不應(yīng)參與與家禽接觸的疫情處置工作。

2.3.2 疫情處置人員和家禽飼養(yǎng)人員應(yīng)及時報告健康異常情況。

2.3.3 所有暴露于感染或可能感染禽和場的人員均應(yīng)接受衛(wèi)生健康部門監(jiān)測。

2.3.4 出現(xiàn)呼吸道感染癥狀的人員及其家人應(yīng)盡快接受衛(wèi)生健康部門檢查。