豬輪狀病毒病的診斷技術(shù)

隨著現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，動(dòng)物疫病的檢測的方法也由此得到了相應(yīng)的改進(jìn)與完善。而當(dāng)前針對豬輪狀病毒病的診斷技術(shù)也從傳統(tǒng)的臨床經(jīng)驗(yàn)診斷向病原學(xué)診斷、免疫學(xué)診斷和分子生物學(xué)診斷方面發(fā)展。因此，本文對目前臨床已有的豬輪狀病毒病診斷方法進(jìn)行詳細(xì)的綜述，旨在為豬輪狀病毒病的預(yù)防和控制奠定理論基礎(chǔ)。

1 病原學(xué)診斷

1.1 細(xì)胞培養(yǎng)分離病毒豬輪狀病毒的分離試驗(yàn)采用含病毒的患病豬的糞便或病死豬腸道內(nèi)容物對MA104細(xì)胞等敏感細(xì)胞接種，盲傳后觀察細(xì)胞是否發(fā)生病變，并根據(jù)病變結(jié)果判定豬輪狀病毒的陰陽性[1]。該法可對豬輪狀病毒感染病變細(xì)胞進(jìn)行直觀觀察，但該法不僅存在周期長、操作過程繁瑣、價(jià)格高等缺點(diǎn)，還需要操作人員具有一定的經(jīng)驗(yàn)。

1.2 電鏡觀察診斷法電鏡觀察診斷法主要分為直接電鏡法和免疫電鏡法兩種。直接電鏡法是最早出現(xiàn)的豬輪狀病毒檢測方法，主要用于動(dòng)物糞便的檢查。免疫電鏡法主要通過觀察聚集的病毒抗原復(fù)合物來判斷被特異性抗體俘獲病毒[2]。該法具有操作簡單、高效和直觀性強(qiáng)等特點(diǎn)，但儀器設(shè)備電鏡價(jià)格昂貴，不適宜在基層進(jìn)行大規(guī)模推廣。

2 免疫學(xué)診斷

2.1 免疫熒光技術(shù)將患病豬的糞便或病死豬腸道內(nèi)容物制作成涂片，并用固定液冰丙酮溶液對涂片進(jìn)行固定，然后采用熒光素標(biāo)記的豬輪狀病毒的特異性抗體進(jìn)行染色處理后，應(yīng)用熒光顯微鏡進(jìn)行結(jié)果觀察。該法是目前獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室診斷豬輪狀病毒中應(yīng)用最為廣泛的一種，但在應(yīng)用免疫熒光技術(shù)對熒光顯微鏡鏡下對結(jié)果進(jìn)行判定時(shí)，需要檢測人員具有一定的檢測經(jīng)驗(yàn)，且該法對被檢樣品的要求較高。

2.2 血清中和試驗(yàn)將豬輪狀病毒與特異性抗體的混合物在體外孵育，使病毒與抗體進(jìn)行充分的反應(yīng)后，將混合物接種到相應(yīng)的細(xì)胞或豬體內(nèi)，測定剩余的病毒感染力。該法具有操作簡單、價(jià)格低廉等特點(diǎn)，且沒有特殊設(shè)備的要求，可用于大批量樣品的檢測。但該法在操作中需具有較高的操作要求，以此保證生物安全。

2.3 ELISA試驗(yàn)ELISA試驗(yàn)主要是將酶標(biāo)記綴合物與豬輪狀病毒抗原或抗體結(jié)合形成酶標(biāo)記的免疫復(fù)合物，復(fù)合物上的酶與底物反應(yīng)形成有色產(chǎn)物，應(yīng)用酶標(biāo)儀在一定的波長下對有色產(chǎn)物吸光度進(jìn)行檢測。該法具有操作簡單、靈敏度高和特異性好的特點(diǎn)，但對實(shí)驗(yàn)操作中的移液器精確度要求較高。

2.4 乳膠凝集試驗(yàn)乳膠凝集試驗(yàn)是一種以乳膠粒子作為載體的間接凝集試驗(yàn)。試驗(yàn)抗豬輪狀病毒抗原抗體包被的乳膠顆粒與糞便中豬輪狀病毒抗原發(fā)生抗原抗體反應(yīng)，產(chǎn)生可見的凝集反應(yīng)。該法操作簡單、成本低廉、高效，可廣泛應(yīng)用于豬輪狀病毒的檢測。

3 分子生物學(xué)診斷

3.1 PCR1985年P(guān)CR技術(shù)首次被研發(fā)成功，隨著科技技術(shù)的不斷改進(jìn)和更新，使其在基因診斷技術(shù)得到了全新的發(fā)展，PCR也從一種定性的分析檢測發(fā)展到如今的定量分析；此外，PCR也從傳統(tǒng)的單純擴(kuò)增幾個(gè)kb基因向當(dāng)前幾十個(gè)kbDNA片段長度進(jìn)行擴(kuò)增。

3.2 熒光定量PCR實(shí)時(shí)熒光定量PCR是通過熒光染料或熒光標(biāo)記的特異性探針，對豬輪狀病毒的核酸進(jìn)行標(biāo)記和熒光采集，并結(jié)合了核酸擴(kuò)增、雜交、光譜分析和實(shí)時(shí)檢測技術(shù)，對PCR產(chǎn)物進(jìn)行跟蹤，實(shí)時(shí)在線監(jiān)控反應(yīng)過程，結(jié)合軟件分析，計(jì)算核酸樣品模板的初始濃度[3]。該法具有特異性好、靈敏度高和操作簡單等優(yōu)點(diǎn)，但該法的儀器設(shè)備價(jià)格昂貴，不宜在基層進(jìn)行大規(guī)模推廣。

綜上所述，尋找一種具有特異性好、靈敏度高、價(jià)格低廉、操作簡單和易于推廣等優(yōu)點(diǎn)的診斷技術(shù)是目前動(dòng)物疾病疫病診斷的發(fā)展方向。因此，綜述豬輪狀病毒實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)的研究現(xiàn)狀，不僅為豬輪狀病毒診斷技術(shù)的研究保留客觀的信息資料，還有利于探索出更理想的豬輪狀病毒病診斷技術(shù)提供有益的線索。