自身免疫性肝炎外周血干擾素γ誘導(dǎo)蛋白16炎癥小體的表達(dá)及臨床價(jià)值

王建英 張偉陽 鐘建平 許文芳 陳將南 金法祥

自身免疫性肝炎（AIH）是機(jī)體對(duì)肝細(xì)胞產(chǎn)生自身抗體及自身反應(yīng)性T細(xì)胞致肝臟炎性病變。免疫炎性反應(yīng)常伴隨著炎癥細(xì)胞和免疫細(xì)胞的浸潤(rùn)，炎癥因子的大量釋放和淋巴細(xì)胞的聚集。干擾素γ誘導(dǎo)蛋白16是干擾素誘導(dǎo)HIN-200家族的一員。近來研究發(fā)現(xiàn)IFI16與多種細(xì)胞活動(dòng)相關(guān)，包括炎癥反應(yīng)、免疫反應(yīng)、細(xì)胞周期調(diào)節(jié)等，當(dāng)病毒、細(xì)菌等外源物質(zhì)侵襲時(shí)，IFI16作為細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)異常雙鏈DNA傳感器首先啟動(dòng)炎病反應(yīng)，傳遞信號(hào)的同時(shí)釋放炎性介質(zhì)促進(jìn)單核巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞到達(dá)受損部位［1］，形成宿主抵御病原微生物感染的第一道防線。其在AIH患者外周血中的表達(dá)及價(jià)值尚不清楚。本文探討IFI16炎癥小體在AIH發(fā)生發(fā)展中的作用，為研究AIH炎癥小體調(diào)控機(jī)制及治療AIH提供一定的理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2016年1月至2019年6月本院就診的AIH患者43例，均經(jīng)肝臟活組織檢查并經(jīng)臨床確診。診斷標(biāo)準(zhǔn)參考2008年國(guó)際免疫性肝炎小組（IAIHG）提出的AIH簡(jiǎn)化診斷積分系統(tǒng)及2010年美國(guó)肝病學(xué)會(huì)（AASLD）更新的有關(guān)AIH的診斷和治療指南［2-3］。排除肝炎病毒感染、藥物性、酒精性和遺傳代謝性肝病等。激素治療前評(píng)分≥15分明確診斷AIH。緩解是指癥狀消失，血清轉(zhuǎn)氨酶、膽紅素、IgG正常，肝組織正?；驘o活動(dòng)性肝硬化［4］。對(duì)照組來源于本院同期健康體檢者，均取得患者同意并簽署知情同意書。

1.2 方法 采取患者及健康對(duì)照組外周靜脈血，離心后收集血清，ELISA法檢測(cè)IFI16和IL-17A的表達(dá)水平，并同時(shí)檢測(cè)炎癥效應(yīng)分子Caspase-1、IL-1β和IL-18水平。其中IL-17A、Caspase-1、IL-1β和IL-18試劑盒購自eBioscience公司，IFI16試劑盒購自于美國(guó)Sigma公司。酶標(biāo)儀為美國(guó)Thermo Multiskan FC。嚴(yán)格按試劑說明書操作。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件。正態(tài)分布計(jì)量資料用（±s）表示，兩組間比較采用student’st檢驗(yàn)，多組間比較采用方差分析，兩兩比較采用LSD法。計(jì)量資料用n（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。相關(guān)性分析采用Pearson檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般資料 43例AIH患者，29例為活動(dòng)期患者，男2例，女27例；平均年齡（45.60±11.29）歲。14例為緩解期患者，男1例，女13例；平均年齡（46.18±11.56）歲。健康對(duì)照組35例，男4例，女31例；平均年齡（47.78±12.26）歲。三組性別、年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=0.94，P=0.65）。

2.2 血清IFI16、IL-17與炎癥效應(yīng)分子在AIH中的表達(dá) 見表2。

表2 IFI16、IL-17A與炎癥效應(yīng)分子在AIH中的表達(dá)（±s）

表2 IFI16、IL-17A與炎癥效應(yīng)分子在AIH中的表達(dá)（±s）

檢測(cè)項(xiàng)目 AIH活動(dòng)期組 AIH緩解期組 健康對(duì)照組 F值 P值IFI16（ng/L） 26.11±12.92 16.24±8.39 15.17±7.65 5.814 0.005 IL-17A（ng/L） 334.47±124.16 218.26±93.15 144.02±61.14 29.96 0.000 Caspase-1（ng/L） 211.06±73.42 164.27±64.12 111.13±50.17 19.26 0.000 IL-18（ng/L） 203.00±83.04 161.76±72.59 153.55±62.15 3.33 0.041 IL-1β（ng/L） 8.77±3.67 6.55±3.60 6.48±3.42 4.18 0.019

2.3 AIH患者血清IFI16與IL-17及炎癥效應(yīng)分子相關(guān)性分析 AIH患者血清中IFI16表達(dá)水平與IL-17、Caspase-1、IL-18和IL-1β水平呈顯著正相關(guān)（r=0.534、0.692、0.521、0.596，P＜0.001），見圖1～4。

圖1 IFI16表達(dá)水平與IL-17的相關(guān)性

圖2 IFI16表達(dá)水平與Caspase-1的相關(guān)性

圖3 IFI16表達(dá)水平與IL-18的相關(guān)性

圖4 IFI16表達(dá)水平與IL-1β的相關(guān)性

3 討論

炎癥小體基本包含三種蛋白，分別是感受器，如NOD樣蛋白家族（NLRs）和AIM2 樣蛋白家族（ALRs），接頭蛋白凋亡相關(guān)斑點(diǎn)樣蛋白（ASC）和效應(yīng)分子半胱天冬蛋白酶前體（pro-caspase-1）。炎癥小體感受感染性和非感染性刺激后活化Caspase-1，剪切IL-1β、IL-18前體，使其成熟并發(fā)揮促炎作用［5］。干擾素γ誘導(dǎo)蛋白16（IFI16）是近年新發(fā)現(xiàn)的一種細(xì)胞核內(nèi)DNA感受分子，其主要位于細(xì)胞核中，識(shí)別進(jìn)入核內(nèi)的dsDNA，與配體相結(jié)合后介導(dǎo)自身炎癥小體的形成及活化［6］。有研究發(fā)現(xiàn)在自身免疫性疾病如系統(tǒng)性紅斑狼瘡中，會(huì)出現(xiàn)抗IFI16抗體和IFI16表達(dá)增高的現(xiàn)象。最新研究證實(shí)，IFI16+細(xì)胞的數(shù)量與慢性乙型肝炎（CHB）和HBV相關(guān)的慢性肝衰竭（HBV-ACLF）患者的炎癥程度顯著相關(guān)，可能是HBV-ACLF肝損傷發(fā)病機(jī)制的重要原因［7］，表明IFI16可能在炎癥性肝損傷的發(fā)生和發(fā)展過程中具有重要的作用。

Th17細(xì)胞是較多類型適應(yīng)性免疫中IL-17的主要來源，IL-17家族成員主要有IL-17A、IL-17B、IL-17c、IL-17D（IL-27）、IL-17E（IL-25） 及 IL-17F，IL-17家族細(xì)胞因子通過靶細(xì)胞上的表面受體介導(dǎo)其生物學(xué)功能。IL-17RA表達(dá)在多種細(xì)胞上，在IL-17刺激下誘導(dǎo)促炎分子，導(dǎo)致過度炎癥和明顯的組織損傷。自身免疫性肝炎發(fā)生時(shí)，Th17活化增多，并分泌一系列炎癥因子，促進(jìn)肝臟炎性反應(yīng)和肝臟損傷［8］。研究證實(shí)，在AIH患者血清中IL-17表達(dá)增高，在小鼠AIH模型中抑制IL-17能夠減弱炎性肝損傷［9］。研究認(rèn)為IL-17及產(chǎn)生IL-17細(xì)胞與自身免疫性肝病密切相關(guān)［10］。Huang等［11］首次確認(rèn)IL-17C/IL-17RE在AIH發(fā)生中的作用，抑制該軸的活性有可能成為治療該病的新型藥物靶點(diǎn)。

有報(bào)道稱IFN-γ，TNF-α，IL-17及IL-22等炎性因子誘導(dǎo)角質(zhì)形成細(xì)胞，能夠上調(diào)IFI16的表達(dá)［12］，但具體機(jī)制未明確。本資料結(jié)果顯示，AIH患者血清中IFI16、IL-17、Caspase-1、IL-1β和IFI16表達(dá)水平均顯著高于健康對(duì)照組，并隨疾病緩解而下降，提示IL-17、炎癥小體IFI16及炎癥效應(yīng)分子均參與AIH炎癥性肝損傷的發(fā)生發(fā)展過程。同時(shí)通過相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)外周血IFI16水平與IL-17A、 Caspase-1、IL-18與IL-1β均呈顯著正相關(guān)，因此推測(cè)在AIH發(fā)病過程中，活化CD4+T細(xì)胞向Th17細(xì)胞分化，其分泌主要效應(yīng)因子IL-17誘導(dǎo)上調(diào)IFI16表達(dá)，促進(jìn)IFI16對(duì)Caspase-1的活化，活化的Caspase-1剪切IL-1β、IL-18前體，成熟的IL-1β和IL-18發(fā)揮促炎作用，誘導(dǎo)肝細(xì)胞炎性應(yīng)答，造成免疫失衡進(jìn)一步誘發(fā)AIH，但具體機(jī)制仍需進(jìn)一步研究。

綜上所述，IFI16在自身免疫性肝炎發(fā)生發(fā)展中的起重要作用，在AIH發(fā)病過程中由壞死或凋亡細(xì)胞產(chǎn)生的自身dsDNA的識(shí)別，進(jìn)而誘導(dǎo)肝細(xì)胞炎性應(yīng)答，但I(xiàn)FI16在AIH發(fā)病機(jī)制中的作用尚需探索，明確其作用有可能使其成為AIH早期診斷、治療與預(yù)后判斷的一個(gè)新的切入點(diǎn)。