金蓮花多酚提取工藝及含量測(cè)定方法研究

阿力同其米克 姜湘英 胡君萍 扎克艷·地力夏提

摘 要 為了探討淡紫金蓮花中多酚提取工藝及含量測(cè)定方法，以沒食子酸為對(duì)照品，采用Folin-Ciocalteu比色法測(cè)定金蓮花中多酚含量，通過單因素試驗(yàn)和L9（34）正交試驗(yàn)確定金蓮花中多酚的提取方法。結(jié)果表明，金蓮花中多酚的提取方法為樣品料液比為1∶125，回流2 h，提取3次所得的金蓮花提取物中多酚含量為77.55 mg·g-1。沒食子酸在0.988～8.587 μg·mL-1范圍內(nèi)與吸光度呈良好線性關(guān)系，平均回收率為97.25%，RSD為1.5%。該方法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，可用于金蓮花中多酚提取物制備以及質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞 淡紫金蓮花;多酚;Folin-Ciocalteu比色法;含量測(cè)定

中圖分類號(hào)：R284 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2020.29.073

金蓮花（Flos Trollii）為毛莨科植物金蓮花（Rollius chinensis Bunge.）和亞洲金蓮花（Trollius asiaticus L.）的干燥花[1]。金蓮花在天山山區(qū)廣泛分布，在鞏乃斯班禪溝作為優(yōu)勢(shì)種群大面積分布，在蒙醫(yī)中用于風(fēng)濕、急慢性扁桃體炎、急性中耳炎等病癥。金蓮花屬植物全世界應(yīng)用廣泛，用藥歷史悠久。淡紫金蓮花（Trollius lilacinus Bunge）隸屬毛茛科，是天山山區(qū)雪域早春開花植物，長期以來，被新疆蒙醫(yī)們用作清理陳舊性肺熱及清熱解毒。

目前文獻(xiàn)對(duì)金蓮花的研究主要是圍繞著金蓮花黃酮類成分，但是對(duì)多酚類成分的研究較少。經(jīng)研究證明，植物多酚對(duì)人類健康具有獨(dú)特作用，多酚化合物的抗炎、抗氧化、抗微生物，抗腫瘤作用已成為現(xiàn)在的熱門[2-3]。前期調(diào)查研究表明，金蓮花中多酚類含量高，具有很大開發(fā)利用價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

金蓮花（產(chǎn)地吉林，廠家上海封浜中藥飲片公司，批號(hào)140917）。

沒食子酸對(duì)照品（天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所，批號(hào)CNAB035-Q）;鎢酸鈉、鉬酸鈉、硫酸鋰，均為國產(chǎn)分析純。

T6紫外分光光度計(jì)，購自新世紀(jì)北京普析通用儀器有限責(zé)任公司;SB-1000型水浴鍋，購自上海愛郎儀器有限公司。

1.2 方法

1.2.1 總酚測(cè)定

對(duì)金蓮花中多酚含量采用Folin-Ciocalteu法進(jìn)行測(cè)定。

1.2.1.1Folin-Ciocalteu試劑配制

精密稱取鉬酸鈉6.3 g、鎢酸鈉25 g置圓底燒瓶中，用175 mL蒸餾水溶解，加入濃鹽酸溶液25 mL和85%磷酸溶液12.5 mL，加熱回流10 h，放冷，再加硫酸鋰3.75 g和雙氧水18.50 mL，加熱沸騰至顏色亮黃色（約10 min），冷卻過濾置棕色容量瓶中，加水稀釋至250 mL即得。

1.2.1.2對(duì)照品溶液配制

精密稱取沒食子酸對(duì)照品4.49 mg，置于50 mL容量瓶中，加蒸餾水溶解，稀釋至刻度，得標(biāo)準(zhǔn)溶液，濃度為0.098 mg·mL-1。

1.2.1.3金蓮花多酚樣品溶液制備

精密稱取金蓮花粉末0.2 g，加25 mL水，回流2 h，提取3次，過濾，提取濾過液，濾液濃縮并定定容至50 mL，即得供試品溶液。

1.2.1.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

分別精密量取標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.1 mL、0.3 mL、0.5 mL、0.7 mL和0.9 mL于10 mL容量瓶中，各加6 mL水，搖勻，再加0.5 mL福林試劑，搖勻。1 min之后加入碳酸鈉溶液（濃度75 g·L-1）1.5 mL，混勻，用蒸餾水定容至刻度，水浴75 ℃反應(yīng)10 min，在760 nm波長處測(cè)定吸光度。建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，以濃度c（mg·mL-1）為橫坐標(biāo)，吸光度A為縱坐標(biāo)，得到回歸方程為A=147.12c-0.0143，相關(guān)系數(shù)R2為0.995 1。

1.2.1.5測(cè)定多酚的方法

精密吸取1.2.1.3中溶液0.1 mL，置于10 mL容量瓶中，依次加入水6 mL、福林試劑0.5 mL、75 g·L-1的碳酸鈉溶液1.5 mL，加蒸餾水稀釋至刻度，充分混勻，在75 ℃加熱10 min后冷卻，在波長760 nm處測(cè)定吸光度。

1.2.1.6精密度實(shí)驗(yàn)

取樣品，按1.2.1.5方法重復(fù)測(cè)定6次吸光度。

1.2.1.7穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取樣品，按1.2.1.3方法，分別于制備后0 h、2 h、4 h、6 h測(cè)定其吸光度。

1.2.1.8重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

照1.2.1.3方法制備6份樣品溶液，按1.2.1.5方法測(cè)定吸光度。

1.2.1.9加樣回收率實(shí)驗(yàn)

精密稱取供試品溶液9份（各0.1 mL），分別加入濃度為1.02 mg·mL-1的對(duì)照品溶液0.01 mL、0.02 mL、0.03 mL，按1.2.1.5方法，測(cè)定吸光度，計(jì)算回收率。

1.2.2 篩選金蓮花中多酚提取工藝

1.2.2.1篩選提取溶劑

精密稱取0.2 g藥材共12份，分別加入甲醇、乙醇、水、丙酮各25 mL，超聲30 min，過濾;精密吸取濾液適量，按1.2.1.5測(cè)定吸光度，另取20 mL濾液，濃縮干燥，計(jì)算浸膏得率。

1.2.2.2提取方法的篩選

精密稱取金蓮花0.2 g，加入25 mL水，分別采用回流法（90 ℃水浴回流30 min）和超聲法（超聲30 min）提取，過濾，分別吸取濾液0.2 mL，方按1.2.1.5測(cè)定吸光度，另取20 mL濾液濃縮干燥，計(jì)算浸膏得率。結(jié)果見表2。

1.2.2.3金蓮花中多酚提取工藝優(yōu)化

在以上單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，采用L9（34）正交設(shè)計(jì)（表1），確定金蓮花中多酚最佳提取工藝。精密稱取金蓮花各0.2 g，以水為溶劑，采用回流提取法，優(yōu)選溶劑體積、提取時(shí)間和提取次數(shù)，提取濾液，濾液濃縮并定容至50 mL。精密吸取上述溶液0.1 mL，按1.2.1.5測(cè)定吸光度，按回歸方程計(jì)算多酚的含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 溶劑的篩選結(jié)果

由表2結(jié)果得知，水的吸光度和浸膏得率最高，初步推斷水是提取最佳溶劑。

2.2 提取方法篩選結(jié)果

不同的提取方法所得提取液的吸光度和提取率見表3。結(jié)果表明，不同提取方法中超聲法所得的浸膏得率略高，回流法所得的多酚含量較高，故采用回流法提取金蓮花中多酚。

2.3 金蓮花中多酚提取工藝優(yōu)化

從表4極差分析可得，以上因素對(duì)多酚工藝提取的影響順序?yàn)锳（溶劑體積）>B（提取時(shí)間）>C（提取次數(shù)），金蓮花多酚最佳提取工藝為A1B3C3，即精密稱取供試品粉末0.2 mg，加入125倍水，回流提取3次，每次2 h。

2.4 精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

取金蓮花樣品，按1.2.1.5方法測(cè)定吸光度，重復(fù)測(cè)定6次。6次結(jié)果分別為0.348、0.348、0.350、0.350、0.351、0.351，RSD為0.39%，表明方法精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

取金蓮花樣品，按1.2.1.3方法，分別制備后0 h、2 h、4 h、6 h測(cè)定吸光度，結(jié)果分別為0.377、0.378、0.386、0.391，RSD為1.74%，結(jié)果表明，樣品的穩(wěn)定性較好。

2.6 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

照1.2.1.3方法制備樣品溶液6份，按1.2.1.5方法測(cè)定吸光度。6次結(jié)果分別0.453、0.430、0.437、0.440、0.443、0.450，RSD為1.92%，表明重復(fù)性較好。

2.7 加樣回收率試驗(yàn)

按1.2.1.9方法測(cè)定回收率的結(jié)果見表5，測(cè)得平均回收率為97.25%，該回收率較高，達(dá)到實(shí)驗(yàn)要求。

2.8 樣品中多酚含量測(cè)定

分別取金蓮花和淡紫金蓮花樣品，按1.2.1.3制備樣品溶液，按1.2.1.5測(cè)定吸光度，計(jì)算多酚含量并計(jì)算浸膏得率。結(jié)果金蓮花中多酚含量為77.55 mg·g-1，浸膏得率為50.79%;淡紫金蓮花中多酚含量為37.71 mg·g-1，浸膏得率為57.85%。通過試驗(yàn)可知，金蓮花中多酚含量比淡紫金蓮花的高，淡紫金蓮花的浸膏得率略高。

3 結(jié)論

采用Folin-Ciocalteu比色法，以沒食子酸為對(duì)照品，測(cè)定金蓮花中的總酚含量，沒食子酸在0.988～8.587 μg·mL-1濃度范圍內(nèi)與吸光度呈良好線性關(guān)系。該法設(shè)備要求低、操作簡(jiǎn)便快捷、穩(wěn)定性和重現(xiàn)性好，可作為檢測(cè)金蓮花總酚的可靠方法。

本實(shí)驗(yàn)采用單因素和正交試驗(yàn)，考察溶劑的篩選、提取方法、提取次數(shù)、料液比等參數(shù)，對(duì)金蓮花多酚的提取工藝進(jìn)行研究，金蓮花以水作為溶劑，料液比為1∶125，90 ℃回流提取3次，每次2 h時(shí)所得的金蓮花提取物浸膏最多，浸膏率為50.79%，多酚含量77.55 mg·g-1。說明該方法浸膏率高，多酚含量高，簡(jiǎn)單，快速，材料易得等特點(diǎn)，具有一定的推廣價(jià)值。

參考文獻(xiàn)：

[1] 白云娥，漆曉梅，高運(yùn)玲.金蓮花的生藥學(xué)研究[J].山西醫(yī)科大學(xué)報(bào)，2001，32（1）：27

[2] 李艷梅.金蓮花質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范化研究[D].石家莊：河北師范大學(xué)，2012.

[3] 王宏.蘋果渣中多酚物質(zhì)的提取分離，抗氧化活性研究[D].西安：陜西師范大學(xué)，2006.

（責(zé)任編輯：劉 昀）