病證結(jié)合動物模型研究進(jìn)展＊

彭紫凝 ，邢玉鳳 ，龐欣欣 ，張雅歌 ，石秀杰 ，韓佳瑞 ，

（1. 河南中醫(yī)藥大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院 鄭州 450046；2. 河南省中醫(yī)院/河南中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院 鄭州450002）

在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的研究中，需要通過動物實(shí)驗(yàn)來驗(yàn)證臨床思路、探索新穎的治療方法，而動物模型是完整的動物實(shí)驗(yàn)中不可或缺的重要基礎(chǔ)[1-2]。目前，研究者所建立的大部分動物模型僅以西醫(yī)的疾病模型為主要參考，整個(gè)研究過程中醫(yī)理論指導(dǎo)與中醫(yī)證候因素均不能夠很好的體現(xiàn)[1]。而換一種方案，建立單純的中醫(yī)證候模型只是簡單的借鑒中醫(yī)藥的理論方法，一個(gè)“證”又對應(yīng)的不止一種疾病，對模型的建立不具有特異性，且重復(fù)性較差[3]。因此，迫切需要一種不僅能反映“病”而且能體現(xiàn)出“證”的動物模型，許多研究者就這一問題進(jìn)行深入研究，提出了病證結(jié)合的動物模型的概念。

病證結(jié)合動物模型的建立，是將現(xiàn)代醫(yī)學(xué)科學(xué)中，西醫(yī)所確定的疾病復(fù)制在動物身上，同時(shí)利用中醫(yī)理論指導(dǎo)，將中醫(yī)的證候復(fù)制到動物模型上，使研究的模型既具有了西醫(yī)疾病特點(diǎn)，又具有了中醫(yī)證候特點(diǎn)，比單純疾病模型或者單純證候模型具有更強(qiáng)的說服力，從而使醫(yī)學(xué)科學(xué)研究更具有針對性，更好地將微觀與宏觀、抽象與具體整合[4]。隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對病證結(jié)合動物模型的研究不斷深入，取得了相當(dāng)多的研究成果，本研究就近年來關(guān)于病證結(jié)合動物模型的研究成果進(jìn)展進(jìn)行綜述。

1 關(guān)于病證結(jié)合動物模型的構(gòu)建要點(diǎn)

構(gòu)建病證結(jié)合動物模型：第一，應(yīng)重視中醫(yī)理論指導(dǎo)，模型應(yīng)充分體現(xiàn)中醫(yī)理論對研究方向的疾病和證候的影響，如外傷血瘀證動物模型，其原理是根據(jù)《黃帝內(nèi)經(jīng)》“若有所墮墜、惡疝，在內(nèi)而不去……則氣血凝結(jié)”的論述，應(yīng)用杠桿擠壓法，構(gòu)建外傷血瘀證模型[5]。第二，疾病模型與證候之間應(yīng)當(dāng)密切關(guān)聯(lián)，如糖尿病腎病與氣陰兩虛證密切相關(guān)，腦卒中最常見氣虛血瘀證，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎最易建立風(fēng)寒濕痹證，等等。第三，根據(jù)研究疾病的不同，應(yīng)選擇最合適的動物，即與人體疾病變化規(guī)律盡可能相似的動物，如與內(nèi)分泌失調(diào)有關(guān)的疾病的研究，常選用大鼠，因?yàn)檩^其他動物而言，大鼠內(nèi)分泌腺最容易摘除；由于兔子容易產(chǎn)生發(fā)熱的反應(yīng)，最方便制作有關(guān)發(fā)熱的動物模型等[4]。第四，要選擇特異性強(qiáng)、重現(xiàn)性好、定量或半定量的指標(biāo)作為造模評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，以挖掘動物身上帶有符合中醫(yī)臨床辨證診斷標(biāo)準(zhǔn)的特征。如制備冠心病的寒凝心脈證動物模型，可通過觀察大鼠體征，配合心臟彩超、血液流變學(xué)等指標(biāo)來判定。下文將舉例說明幾種近年來研究較多且疾病發(fā)病率較高的病證結(jié)合動物模型。

1.1 糖尿病腎病病證結(jié)合的動物模型

糖尿病腎病是臨床常見的代謝性疾病，是終末期腎病的重要原因，大約35%～40%的1 型或2 型糖尿病患者會發(fā)展為糖尿病腎病，增加了心血管疾病的發(fā)病率和死亡率[6]。現(xiàn)階段,西醫(yī)治療糖尿病腎病大多是在飲食調(diào)整的基礎(chǔ)上,采用降糖降壓、調(diào)節(jié)代謝紊亂等一系列治療方法,療效一般。中醫(yī)認(rèn)為，糖尿病腎病屬于“消渴”“水腫”等范疇，其多氣虛、血瘀、陰虛、陽虛、濕濁等證型[7]，辨證施治與西醫(yī)治療結(jié)合可取得較好臨床療效。因此，構(gòu)建良好的病證結(jié)合動物模型對中西醫(yī)結(jié)合治療糖尿病腎病的研究必不可少。

目前，研究者制備糖尿病腎病動物模型，往往是通過予以大鼠高脂飼料和小劑量腹腔注射鏈脲佐菌素（STZ），成功制備2 型糖尿病腎病模型。胡愛民等[8]制備2 型糖尿病腎病模型后，采用饑飽失常、過度疲勞、恒溫水槽中游泳、驚嚇等方法制備氣陰兩虛證型，通過大鼠行為表現(xiàn)、腎臟病理變化、體液檢驗(yàn)及中藥反證法來驗(yàn)證制備成功。孫紅旭等[9]成功誘導(dǎo)糖尿病腎病模型后，再給予大鼠腺嘌呤和苦寒中藥混合灌服，制備脾腎陽虛的中醫(yī)證型，通過大鼠行為表現(xiàn)、腎臟病理變化、體液檢驗(yàn)來證實(shí)成功制備模型。樊少儀等[10]制備動物模型符合糖尿病腎病制備的標(biāo)準(zhǔn)后，通過疲勞游泳法制備氣虛型糖尿病腎病病證結(jié)合模型，主要通過大鼠行為表現(xiàn)、腎臟病理變化、體液檢驗(yàn)及游泳時(shí)間來驗(yàn)證制備成功。從上述研究結(jié)果表明，臨床上，糖尿病腎病的證候較為復(fù)雜，多虛實(shí)夾雜,而已有的病證結(jié)合模型仍較為單一，建立證候模型理論依據(jù)不夠充分，驗(yàn)證證候模型沒有相應(yīng)的理化指標(biāo)檢測，干預(yù)藥物沒有統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，評價(jià)行為表現(xiàn)尚未統(tǒng)一，等等，這些問題仍然需要進(jìn)一步研究來解決。

1.2 冠心病病證結(jié)合的動物模型

目前，我國因心血管病死亡人數(shù)占總死亡人數(shù)的40%，死亡率遠(yuǎn)超于其他疾病，其中冠狀動脈粥樣硬化性心臟?。ê喎Q冠心?。┤藬?shù)已經(jīng)高達(dá)1100 萬[11]。隨著社會發(fā)展和人們生活方式的變化，冠心病逐漸成為威脅人類健康的重大疾病之一[12]。雖然現(xiàn)代醫(yī)學(xué)在冠心病的二級預(yù)防、冠狀動脈旁路移植術(shù)等治療方法上已經(jīng)取得顯著進(jìn)展，但是仍然存在很多問題，如介入術(shù)后胸悶胸痛癥狀仍明顯，部分人對冠心病二級預(yù)防的藥物不耐受等，中醫(yī)藥治療則可以很好的緩解以上癥狀[13]。因此，針對冠心病的中西醫(yī)結(jié)合治療已經(jīng)刻不容緩，而科學(xué)的建立病證結(jié)合的動物模型也是進(jìn)一步研究冠心病治療方法的關(guān)鍵。

王朔等[14]采用冠狀動脈左前降支結(jié)扎法聯(lián)合高脂飼料喂養(yǎng)C57BL/6J 雄性小鼠建立冠心病痰瘀互結(jié)證動物模型，通過模擬心肌缺血復(fù)合動脈粥樣硬化的病理特征，確定該模型制備成功。周晟芳等[15]根據(jù)“恐傷腎”以及“寒凝血瘀”中醫(yī)理論，對Wistar大鼠采取驚嚇同時(shí)使其處在寒冷環(huán)境的方法，皮下注射激素氫化可的松，再通過結(jié)扎大鼠冠狀動脈的前降支，復(fù)合建立心肌缺血型的冠心病腎虛血瘀的病證結(jié)合的模型，通過大鼠體征、生化檢驗(yàn)、心電圖等來確定造模成功。黃爍等[16]采取讓W(xué)istar 雄性大鼠疲勞跑步運(yùn)動，同時(shí)給予其左冠狀動脈前降支行高位結(jié)扎的方法，觀察心電圖、大鼠體征、超聲心動圖、行為習(xí)慣、心臟病理檢驗(yàn)等指標(biāo)，表明已建立冠心病氣虛血瘀證病證結(jié)合模型。目前，對于如何檢驗(yàn)臨床冠心病一些證型，已經(jīng)初步有一系列方法及標(biāo)準(zhǔn)，例如，心電圖對瘀血陽微證、心肺氣虛證和氣陰兩虛證有診斷意義，心臟X 線對氣陰兩虛證、心肺氣虛證、氣滯痰阻證和陽虛氣滯證有診斷意義，等等[17]，但是對于建立動物模型尚未有完整研究，且這些臨床檢驗(yàn)指標(biāo)大部分不適用于動物模型，因此，仍需要進(jìn)一步深入研究。

1.3 哮喘的病證結(jié)合的動物模型

支氣管哮喘（簡稱哮喘）是臨床中較為常見的慢性呼吸道疾病，臨床主要表現(xiàn)為反復(fù)發(fā)作性的胸悶咳嗽、氣喘，病情遷延難愈[18]。哮喘在目前臨床上治療方法以吸入性糖皮質(zhì)激素為主，但治療效果有限[19]。中醫(yī)認(rèn)為，哮喘常見的證型是肺虛、肺腎兩虛、肺脾兩虛等[20]，治療上不僅可以改善癥狀，減輕西藥依賴性,還可以減少哮喘的急性發(fā)作次數(shù)。因此，建立病證結(jié)合哮喘模型為促進(jìn)中西醫(yī)結(jié)合治療哮喘的發(fā)展奠定堅(jiān)實(shí)的研究基礎(chǔ)。

厲蓓等[21]使用Balb/c 雄性小鼠，采用卵蛋白反復(fù)激發(fā)法建立肺氣虛哮喘模型，在此基礎(chǔ)上，基于“恐傷腎”原理用C57BL/6J 小鼠作為攻擊者模擬社交應(yīng)激，通過哮喘相關(guān)理化指標(biāo)判定成功建立肺腎氣虛哮喘動物模型。王志旺等[22]用皮下注射致敏液的方法激發(fā)小鼠哮喘，成模后對小鼠灌胃甲狀腺片溶解物，檢測小鼠肺通氣功能以及肺組織哮喘相關(guān)蛋白表達(dá)等指標(biāo)，成功建立陰虛哮喘病證結(jié)合動物模型。嵇冰等[23]制備模型時(shí)采用氫化可的松注射液皮下注射及卵清白蛋白致敏法，通過大鼠行為表現(xiàn)、體征、體液檢驗(yàn)、生化檢驗(yàn)、肺組織病理等一系列指標(biāo)驗(yàn)證，證實(shí)腎陽虛證支氣管哮喘的病證結(jié)合動物模型建立成功。關(guān)于哮喘病證結(jié)合動物模型的研究日漸增多，但是不同研究者對其認(rèn)識不一，導(dǎo)致病證結(jié)合動物模型研究良莠不齊。研究者構(gòu)建哮喘動物模型時(shí)，致敏因素不夠確定，不同的致敏因素效果不同，也無法確定是否影響到其他指標(biāo)，并且研究者對動物的行為觀察，如噴嚏、咳嗽等，具有很大程度的主觀性，研究者檢測的指標(biāo)也不夠統(tǒng)一完善。

1.4 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的病證結(jié)合動物模型

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎是一種以慢性關(guān)節(jié)滑膜炎為主的系統(tǒng)性疾病，其致殘率極高，已經(jīng)嚴(yán)重影響到患者的生存質(zhì)量[24]。類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎在中醫(yī)上屬于“痹癥”范疇。目前，臨床上的主要治療藥物多以西藥為主，雖效果明顯，但是毒副作用較大，而中醫(yī)藥治療療效持久，因此中西醫(yī)結(jié)合治療也許是最有效的治療方法[25]。由于臨床證候研究中存在諸多未知因素，需要構(gòu)建合適的病證結(jié)合動物模型來深入研究。

蘇杉等[26]對SD 大鼠皮內(nèi)注射Ⅱ型膠原乳劑并用改裝后的智能人工氣候箱和冰水刺激施加風(fēng)寒濕刺激制備風(fēng)寒濕類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎大鼠模型，通過對比大鼠足跖腫脹度、血清檢測指標(biāo)、AI評分等各項(xiàng)指標(biāo)，判定成功建立風(fēng)寒濕痹類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎病證結(jié)合動物模型。趙宏艷等[27]先用羥基脲法和去勢法制備大鼠腎虛模型和利血平法制備大鼠脾虛模型，后采用注射Ⅱ型膠原法制備類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎模型，成功后檢測類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎相關(guān)指標(biāo)，確定成功構(gòu)建腎虛證與脾虛證類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎病證結(jié)合動物模型。王蓉等[28]對SD 大鼠皮內(nèi)注射Ⅱ型膠原乳劑制備類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎大鼠模型，再把大鼠放入人工氣候箱進(jìn)行風(fēng)濕熱模型構(gòu)建，通過觀察大鼠一般情況及檢測相關(guān)指標(biāo)，證實(shí)成功建立風(fēng)濕熱痹類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。目前，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎動物模型僅模擬了患者的部分特征，其他多系統(tǒng)病變?nèi)绯拷?、關(guān)節(jié)壓痛等不適很難體現(xiàn)出來，仍有很大局限性。

1.5 其他病證結(jié)合動物模型

除了上述幾種研究較多、發(fā)病率較高的疾病外，研究者還研究了其他疾病相關(guān)的病證結(jié)合動物模型。例如，陳奔等[29]在樹鼩雙側(cè)腦室注射混合溶液，并在其腹腔注射角叉菜膠溶液，通過觀察樹鼩的一般情況，檢測癡呆和血瘀相關(guān)指標(biāo)，證實(shí)血瘀證病證結(jié)合癡呆模型制備成功。楊新鳴等[30]采用細(xì)菌內(nèi)毒素腹腔注射法聯(lián)合來曲唑灌胃法構(gòu)建腎虛血瘀型多囊卵巢綜合征病證結(jié)合大鼠模型，并通過觀察大鼠一般行為活動及檢測相關(guān)血清指標(biāo)等驗(yàn)證模型建立成功。郭軍雄等[31]采用番瀉葉灌服法聯(lián)合慢性束縛應(yīng)激法建立了腹瀉型腸易激綜合征“肝郁脾虛證”大鼠模型，通過觀察大鼠行為及檢測與胃腸道相關(guān)的血清等指標(biāo)證實(shí)該模型制備成功。

綜上所述，現(xiàn)階段病證結(jié)合模型的構(gòu)建大多數(shù)是在現(xiàn)代疾病造模的基礎(chǔ)上，通過符合中醫(yī)病因理論的外部刺激、飲食、藥物等因素刺激，多種因素疊加制作而成。但這些造模方法存在缺乏統(tǒng)一性、可操作性及重復(fù)性差等不能回避的問題，有待進(jìn)一步研究解決。

2 關(guān)于病證結(jié)合動物模型的評價(jià)

病證結(jié)合的動物模型的評價(jià)，應(yīng)是研究的重點(diǎn)部分，不僅包括西醫(yī)“病”的評價(jià)，還包含中醫(yī)“證”的評價(jià)。在現(xiàn)代科學(xué)研究的動物模型中，西醫(yī)疾病的判定已較為成熟，在此不做詳細(xì)贅述，但是現(xiàn)階段中醫(yī)證候?qū)傩缘脑u價(jià)判定，仍然存在一定的不確定性，因此建立病證結(jié)合的動物模型，證候?qū)傩缘呐卸☉?yīng)是核心環(huán)節(jié)[32]，目前研究模型評價(jià)多從以下幾個(gè)方面來判定。

2.1 從動物模型的宏觀體征及行為表現(xiàn)來判定

買鵬宇等[33]通過多因素復(fù)合法建立濕熱挾瘀證自身免疫性前列腺炎KM 小鼠模型，依據(jù)小鼠精神萎靡懶動、飲食飲水減少、毛發(fā)少光澤、舌體暗紅和大便溏稀等證候評價(jià)，判定濕熱挾瘀證模型構(gòu)建成功。曾梅艷等[34]建立脾胃虛寒型十二指腸潰瘍大鼠模型，模型大鼠不僅飲食、飲水量減少，出現(xiàn)倦怠，行動呆滯，大便溏瀉等體征，更是出現(xiàn)明顯毛發(fā)疏松粗糙甚至豎立發(fā)黃，大便溏瀉、肛門污穢等現(xiàn)象，接近于中醫(yī)脾胃虛寒型十二指腸潰瘍征象。目前，中醫(yī)證候的判斷大多依據(jù)臨床指南或?qū)＜夜沧R，如血瘀證冠心病參考《冠心病及急性心肌梗死中醫(yī)臨床辨證標(biāo)準(zhǔn)及防治指南》規(guī)定，血瘀證辨證要點(diǎn)為胸痛，痛有定處，舌質(zhì)紫黯，或有瘀點(diǎn)、瘀斑[35]。在患者身上，這些證候?qū)傩宰顬橹苯?，但是在動物模型上，臨床的四診信息也很難一一體現(xiàn)。此外，研究者主觀推定的診斷信息也存在不確定性，且不易量化，故據(jù)此判定動物模型的證候往往證據(jù)不足[32]。

2.2 從一些與證候相關(guān)的理化指標(biāo)判定

研究者采用理化指標(biāo)來判定，通過檢測與構(gòu)建證型相關(guān)聯(lián)的一些指標(biāo)，側(cè)面證實(shí)模型建立成功，如郭文鶴等[36]用血液流變學(xué)、凝血功能、升主動脈和肝組織的病理學(xué)等指標(biāo)，來衡量氣滯血瘀證動脈粥樣硬化病證結(jié)合大鼠模型是否構(gòu)建成功。雖然目前研究者找到了一些與證候相關(guān)的理化指標(biāo)，但是大多數(shù)與血瘀型有關(guān)，至于氣虛、痰濁、陽虛等證型，尚未發(fā)現(xiàn)可信度高的相關(guān)理化指標(biāo)。已經(jīng)確定的一些與證候相關(guān)的理化指標(biāo)，特異性也不夠，不能作為確定證候診斷的明確指標(biāo)，無法證明這些指標(biāo)的外在表現(xiàn)與患者外在證候是一致的。因此，以此來判定模型的證候?qū)傩裕瑯哟嬖谌毕荨?/p>

2.3 從中藥藥物的反證法來判定

中藥藥物的反證法即以方測證，是通過選擇臨床上常用且療效明顯的經(jīng)典方藥，來反證造模成功。如郭春榮等[37]通過檢測金匱腎氣湯對大鼠有治療效果而六味地黃湯不僅沒有效果反而加重哮喘，反證腎陽虛哮喘大鼠模型建立成功；李依潔等[38]建立脾腎陽虛型腸易激綜合征的病證結(jié)合的動物模型，給予溫腎健脾方反證，大鼠行為表現(xiàn)及體征指標(biāo)改善。研究者通過比較干預(yù)前、后一些較為特異性的檢測指標(biāo)，來反推此模型屬于哪一種證型。依據(jù)方劑反測其證候?qū)傩?，這種方法極具有中醫(yī)特色，但是仍存在一些問題：首先，反證法不具有特異性，中藥湯劑相對中醫(yī)的證并沒有一對一的關(guān)系，藥物反證無效也不能證明完全不對證，藥物有效也可能是相似證；其次，是反證法所采用的經(jīng)典方藥沒有統(tǒng)一參考標(biāo)準(zhǔn)，研究者自圓其說；最后，以方測證過程的謹(jǐn)慎性與嚴(yán)密性也不夠。因此，目前大多數(shù)的研究只是把該反證法作為佐證。

2.4 從造模的因素推測判定

認(rèn)定證候?qū)傩砸部梢詮牟∫蚪嵌韧茰y。黃正團(tuán)等[39]基于“恐傷腎”原理用夾尾恐嚇法建立腎虛證病證結(jié)合模型；于春月等[40]建立氣虛血瘀型慢性萎縮性胃炎的病證結(jié)合的動物模型，采用N-甲基-N＇-硝基-亞硝基胍、雷尼替丁飼料、水楊酸鈉和饑飽失常四個(gè)因素綜合造模法，可以制備氣虛血瘀動物模型。審因測證，即從中醫(yī)的病因來直接推測其證候的屬性，同樣存在一定的弊端：一方面缺乏肯定的證候診斷方法，另一方面同樣的致病因素有可能出現(xiàn)不一樣的中醫(yī)證候，影響了判定模型證候應(yīng)具備的唯一性。

大部分研究者對病證結(jié)合的動物模型的評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)仍然主要通過以上四種方法，模型評價(jià)方面目前仍存在較多的問題：第一，混合雜亂的造模因素不完全是中醫(yī)臨床上常見的病因；第二，動物模型癥狀和體征的采集方式和評價(jià)不夠完善；第三，客觀指標(biāo)和中醫(yī)的證候沒有密切的聯(lián)系；第四，以方測證存在方法學(xué)重要缺陷[41]。本研究認(rèn)為，病證結(jié)合的評價(jià)，應(yīng)當(dāng)不僅僅從單一的以上四種方法，還要疊加以上要素，力求每一個(gè)造的病證結(jié)合動物模型，在宏觀體征及行為表現(xiàn)、一些與證候相關(guān)的理化指標(biāo)、從造模因素推測判定方面均符合造模評價(jià)，并且能夠從中藥藥物方面反證。但具體的評價(jià)的度，以及如何判定該要素是否可以或足夠作為病證結(jié)合動物模型的評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，仍然是未來待突破的問題。

3 病證結(jié)合動物模型的應(yīng)用

目前，病證結(jié)合動物模型已廣泛應(yīng)用于各種疾病的研究中，能較好體現(xiàn)中醫(yī)辨證論治的思想，其主要應(yīng)用于以下五個(gè)方面：①用于研究證型與疾病之間的關(guān)系，如肺腎氣虛證型可以加重哮喘，哮喘的發(fā)生也多伴有肺氣虛等；②探究不同病因?qū)Σ煌膊〖白C型的影響，如研究寒冷氣溫刺激對動物患寒凝血瘀型冠心病的影響；③還可用于研究疾病的各種治療方法的療效評價(jià)，如推拿和活血化瘀藥均可以緩解血瘀證，但是推拿可能更易于緩解局部血瘀而用藥傾向于緩解全身等；④病證結(jié)合動物模型能夠較好地模擬臨床患者的證型，研究者可以擇選出最佳方劑干預(yù)該疾病和證型；⑤可用于病證毒理學(xué)的研究。

病證毒理學(xué)研究多采用正常動物來探究藥物量-時(shí)-毒關(guān)系，如有研究者探索不同濃度的加減當(dāng)歸芍藥湯對正常小鼠的最大耐受量[42]，病證結(jié)合模型可能為中藥病證毒理學(xué)提供新的方向，探索不同證型下中藥及中西醫(yī)結(jié)合用藥的安全性，促進(jìn)精準(zhǔn)用藥的發(fā)展，降低臨床上藥源性疾病風(fēng)險(xiǎn)[43-44]。

4 思考與展望

目前，如何構(gòu)建病證結(jié)合的動物模型，以及準(zhǔn)確對其進(jìn)行評價(jià)的研究還處于探索階段，問題仍然較多：①現(xiàn)階段制備模型時(shí)采用中醫(yī)病因造模較少，大多數(shù)都采取西醫(yī)疾病病理概念造模；②研究者在采用單因素造模時(shí)，雖然可以較好的確定單個(gè)病因?qū)?yīng)單個(gè)證型，但是模型與現(xiàn)實(shí)疾病的復(fù)雜性不相符。然而，在采用多種因素造模時(shí)，這些因素之間的相互關(guān)聯(lián)性難以證實(shí)，變量過多，可重復(fù)性差，并且中醫(yī)西醫(yī)因素混合，缺乏邏輯性；③現(xiàn)階段造模的評價(jià)方法尚缺乏量化的標(biāo)準(zhǔn)，不能夠準(zhǔn)確的評價(jià)造模是否成功，其中分為兩類：一類是證候可通過理化指標(biāo)來判定，但是判定標(biāo)準(zhǔn)不明確，如血瘀證可通過血液流變學(xué)等指標(biāo)檢測，測定指標(biāo)類型與判定標(biāo)準(zhǔn)尚未完全確定；另一類是暫未找到合適的理化指標(biāo)，只能通過較為主觀的一些評判標(biāo)準(zhǔn)，如肝郁脾虛證大多數(shù)只能通過動物行為觀察及稀便來判定；④中醫(yī)病證結(jié)合模型的可重復(fù)性較差，不如西醫(yī)病理模型具備定量復(fù)制的優(yōu)點(diǎn)，而且模型質(zhì)量的穩(wěn)定性等也有待提高；⑤現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中醫(yī)證候的診斷標(biāo)準(zhǔn)正在不斷完善，但是現(xiàn)階段病證結(jié)合所制備的動物模型并不能夠與臨床病證完全吻合，因此模型只能模擬反映臨床疾病的一部分，而反映的這部分也不是百分百定量確定的；⑥在以方測證時(shí)，研究者對選用的經(jīng)典方也口徑不一，目前尚未確定如何選擇最合適的方藥來對模型進(jìn)行驗(yàn)證，使模型制備更符合臨床標(biāo)準(zhǔn)。

值得慶幸的是，致力于科研與臨床的研究者對不同病證結(jié)合的動物模型的造模方法，仍在不斷對比、篩選及優(yōu)化。更有研究者致力于構(gòu)建集系統(tǒng)性與嚴(yán)謹(jǐn)性于一體的病證結(jié)合的動物模型和評價(jià)體系。眾多研究者期待隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對中醫(yī)藥研究的逐步完善與深刻挖掘，在現(xiàn)有研究成果的基礎(chǔ)上，病證結(jié)合動物模型必然能使中醫(yī)藥體系長足發(fā)展，在未來更上一層樓。