全自動酶免儀和免疫發(fā)光儀檢測乙肝兩對半定量的研究進展

周家順

（廣西欽州市靈山縣中醫(yī)醫(yī)院 檢驗科，廣西 靈山 535400）

0 引言

乙肝兩對半[1]亦稱乙肝五項，分別為：①乙肝表面抗原（HBsAg）、②乙肝表面抗體（抗-HBs）、③乙肝e抗原（HBeAg）、④乙肝e抗體（抗-HBe）、⑤乙肝核心抗體（抗-HBc）。乙型肝炎是常見傳染病之一，我國約有9300萬人攜帶乙肝病毒[2]，準確的檢測乙肝兩對半，對于乙型肝炎患者有著重要的意義。全自動酶免儀[3]采用時間分辨免疫熒光技術(shù)檢測乙肝兩對半，具有靈敏度高、特異性強、結(jié)果穩(wěn)定等優(yōu)點。本文對全自動酶免儀和免疫發(fā)光儀檢測乙肝兩對半定量[4]的研究進展綜述如下。

1 乙肝兩對半檢測的歷史

20世紀50年代末，Baruch Blumber經(jīng)過幾年的努力，他終于確定了在澳大利亞土著人血液中發(fā)現(xiàn)的乙肝病毒表面抗原（HbsAg）即澳抗。Baruch Blumberg博士和Millman Irving博士一起，發(fā)現(xiàn)了乙型肝炎檢測方法。以后又發(fā)現(xiàn)了抗-HBs、HBeAg、抗-HBe和抗-HBc，上述五項統(tǒng)稱乙肝兩對半。檢測兩對半，歷經(jīng)定性、半定量和定量方法，目前應(yīng)用較多的是定量檢測。時間分辨免疫熒光法定量[5]檢測乙肝兩對半，具有靈敏度高、特異性強、結(jié)果穩(wěn)定等優(yōu)點，更好反映乙肝病毒在體內(nèi)的變化。

2 全自動酶免儀器定量檢測乙肝兩對半的原理

全自動酶免儀檢測原理[6]：使用稀土離子（Eu3+）作為示蹤物，通過Eu3+與具有雙功能結(jié)構(gòu)的螯合劑以及抗原形成稀土離子-螯合劑-抗原螯合物。當標記抗原、待測抗原共同競爭抗體，形成免疫復(fù)合物，將結(jié)合部分與游離部分分開后，時間分辨免疫熒光儀可以檢測復(fù)合物中的熒光強度，從而確定待測抗原的量。

3 免疫發(fā)光儀檢測原理

以酶標記物質(zhì)進行免疫反應(yīng)[7]，免疫反應(yīng)物再作用于發(fā)光底物發(fā)光，用發(fā)光儀測定抗原或抗體含量。

4 全自動酶免儀檢測乙肝兩對半?yún)⒖挤秶?/h2>

4.1 HBsAg檢 測[8]＜0.50 ng/mL，HBsAg含 量 正 常；HBsAg≥0.50 ng/mL，HBsAg含量高于正常，人體被感染乙肝。

4.2 抗-HBs＜10 mIU/mL，抗-HBs含量正常；抗-HBs≥10 mIU/m，表明機體有抗體，不被傳染。

4.3 HBeAg＜0.50 DRU/mL，HBeAg含 量 正 常；HBeAg≥0.50 DRU/mL，預(yù)示乙肝有傳染性，含量越多，HBeAg傳染性越強。

4.4 抗-HBe＜1.50 DRU/mL，HBeAb含量正常；抗-HBe≥1.50 DRU/mL，抗-HBe含量異常，表明乙肝傳染性低。

4.5 抗-HBc定量[9]＜ 0.10 DRUU/mL，抗-HBc含量正常；抗-HBc≥0.1 DRU/mL，表示機體感染過乙肝病毒。

5 免疫發(fā)光儀檢測乙肝兩對半?yún)⒖挤秶?/h2>

5.1 當免疫發(fā)光儀測定HBsAg＜0.50 ng/mL，HBsAg含量正常；HBsAg≥0.50 ng/mL，HBsAg含量異常。

5.2 抗-HBs＜10 mIU/mL，HBsAb含量正常；抗-HBs≥10 mIU/mL，表面抗體含量高于正常。

5.3 HBeAg＜0.50 DRU/mL，HBeAg含量正常；HBeAg≥0.50 DRU/mL，HBeAg含量異常。

5.4 抗-HBe＜1.50 DRU/mL，抗-HBe含量正常；抗-HBe≥1.50 DRU/mL，抗-HBe含量異常。

5.5 抗-HBc＜ 0.10 DRUU/mL，抗-HBc含量正常；抗-HBc≥0.10 DRUU/mL，抗-HBc含量異常。

6 檢測兩對半實驗室方法

6.1 檢測兩對半實驗室方法有三種，一是定性檢測，另外兩種是半定量和定量檢測。

6.2 兩對半常規(guī)定性檢測。國產(chǎn)乙肝金標法和酶聯(lián)免疫吸附試驗，檢測的結(jié)果只有陰性和陽性，但是結(jié)果反映不了體內(nèi)乙肝病毒的含量，實驗室主要用于篩查。

6.3 半定量檢測。結(jié)果是標本檢測值與臨界值的比值，半定量的單位是：S/CO，S代表檢測光密度值（OD值），CO代表檢測的臨界值，若S/CO≥1判為陽性，＜1為陰性，半定量檢測的靈敏度和準確性比定性檢測好，但結(jié)果不準確，只能大致檢測抗原、抗體在血清中的濃度。

6.4 定量檢測。還可以準確檢測出抗原、抗體的含量。全自動酶免儀采用時間分辨免疫熒光法定量檢測乙肝兩對半，該儀器具有靈敏度高、特異性強、結(jié)果穩(wěn)定等優(yōu)點，是目前應(yīng)用較多的儀器。

7 全自動酶免儀和免疫發(fā)光儀檢測乙肝兩對半定量的研究

7.1 免疫發(fā)光儀發(fā)光過程短，本底較高。儀器故障率較高，試劑穩(wěn)定性差，試劑價格高等缺點。

7.2 全自動酶免儀專業(yè)使用一次性針，零污染，保證實驗結(jié)果安全性及準確性；每個微板位可獨立控制孵育，振蕩，提高了實驗室的規(guī)范化程度，實驗結(jié)果更準確。

7.3 用全自動酶免儀和免疫發(fā)光儀對160例臨床標本同時檢測，按照規(guī)程操作，參加室內(nèi)室間質(zhì)評均符合要求[10]。全自動酶免儀的應(yīng)用實現(xiàn)了自動化檢測，具有靈敏度高，結(jié)果穩(wěn)定，零污染，試劑穩(wěn)定等優(yōu)點，是檢測兩對半被公認是較好的儀器。

8 全自動酶免儀檢測乙肝兩對半定量的臨床意義

8.1 乙肝兩對半定量分析的臨床意義[11]

8.1.1 HBsAg：它的出現(xiàn)是感染乙肝病毒的標志。在感染乙肝病毒2-6個月，在血清中檢測到超出正常含量，表明是急性乙肝、慢性乙肝患者。

8.1.2 抗-HBs：是對乙肝病毒保護性抗體。高于正常值表明既往感染過乙肝病毒，但已經(jīng)排除病毒，產(chǎn)生了保護性抗體[12]。

8.1.3 HBeAg：乙肝患者體內(nèi)可查出e抗原，超出正常數(shù)值說明乙肝病毒在體內(nèi)復(fù)制。

8.1.4 抗-HBe：高于正常數(shù)值表明患者的傳染性降低，病毒復(fù)制降低或緩解。

8.1.5 抗-HBc：它的含量高于正常數(shù)值，表明乙肝病毒正在復(fù)制[16]。

8.2 全自動酶免儀和免疫發(fā)光儀檢測乙肝兩對半定量課題有關(guān)高于正常值的類型及意義

8.2.1 HBsAg、抗-HBc表示急性感染；或者是慢性攜帶者，病毒復(fù)制力低下，傳染弱；或者處于恢復(fù)期。

8.2.2 HBsAg、HBeAg、抗-HBc俗稱大三陽[14]，表示著急性感染；或者是慢性攜帶者，反映體內(nèi)病毒數(shù)量多，病毒復(fù)制活躍，傳染性強。

8.2.3 HBsAg、抗-HBe、抗-HBc俗稱小三陽[15]，過去認為小三陽患者的傳染已顯著降低。但是臨床上肝功能異常，同時伴有乙肝病毒含量高于正常，表明乙肝小三陽不一定預(yù)后就好，這是乙肝病毒變異。

8.2.4 HBsAg、抗-HBs：①亞臨床型HBV感染早期；②不同亞型HBV二次感染。

8.2.5 抗-HBs：健康人群接種乙肝疫苗后產(chǎn)生保護性抗體；有些人群也會在接觸乙肝病毒后自動產(chǎn)生乙肝病毒表面抗體，乙肝病毒表面抗體是對乙肝病毒免疫和保護性抗體。

8.2.6 抗-HBs、抗-HBe：乙肝病毒感染后已恢復(fù)。

8.2.7 抗-HBs、抗-HBc：感染過乙肝病毒，現(xiàn)已完全恢復(fù)，保護性的抗體已經(jīng)出現(xiàn)，對乙肝病毒已具有抵抗力。

8.2.8 抗-HBs、抗-HBe、抗-HBc機體處于恢復(fù)期，保護性的抗體已經(jīng)存在，但e抗體不能長期的存在，e抗體不久也會消失，若e抗體半年后不消失，說明體內(nèi)病毒已發(fā)生病變，需要給予重視，加強治療。

8.2.9 抗-HBs、HBeAg、抗-HBc：非典型性或亞臨床型乙肝病毒感染。

8.2.10 抗-HBe、抗-HBc：既往感染乙肝病毒，現(xiàn)處于恢復(fù)期。HBsAg已經(jīng)消失，但保護性的抗體還沒有出現(xiàn)，對HBv沒有抵抗力。

8.2.11 抗-HBc：可以作為急性感染的窗口期，它是乙肝病毒核心抗原的總抗體，含量高于正常值時表示乙肝病毒既往感染或現(xiàn)在感染。

綜上所述，兩種儀器在檢測準確性等方面均較好，而全自動酶免儀檢測具有靈敏度高、特異性強、結(jié)果穩(wěn)定、零污染、試劑穩(wěn)定等優(yōu)點，全自動酶免儀定量檢測乙肝兩對半顯示了良好的應(yīng)用前景，值得基層醫(yī)院推廣應(yīng)用。