兒童需氧微生物培養(yǎng)瓶培養(yǎng)法等檢驗方法在新型隱球菌腦膜炎中的診斷價值

楊海剛，夏海雄

（貴陽市第二人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗科，貴州 貴陽）

0 引言

新型隱球菌在自然界廣泛分布，在鴿糞中大量存在，同時可存在于人體表、口腔及腸道中?？汕址溉嘶騽游铮话阋酝庠葱愿腥緸橹?，但也可致內(nèi)源性感染，對人類而言，她通常是條件致病菌。新型隱球菌首先呼吸道侵入人體，由肺經(jīng)血型播散時可侵犯所有臟器組織，主要侵犯肺、腦及腦膜，引起慢性腦炎，也可侵犯皮膚、骨、關(guān)節(jié)和心臟等部位，新型隱球菌病好發(fā)于免疫功能低下者，如艾滋病、糖尿病、惡性腫瘤患者、器官移植及大劑量使用糖皮質(zhì)激素患者。其引起的感染可出現(xiàn)在人體所有臟器組織中，以感染中樞神經(jīng)系統(tǒng)引起新型隱球菌腦膜炎最為多見[1-3]。文獻(xiàn)報道，現(xiàn)年因臨床治療過程中，因經(jīng)驗性治療導(dǎo)致廣譜抗生素濫用或亂用、以及因治療需要增加的創(chuàng)操作，同時由于免疫制劑、激素的使用等眾多因素的影響，致侵襲性真菌感染及新型隱球菌腦膜炎感染的出現(xiàn)率表現(xiàn)出不斷增長的趨勢，雖新型隱球菌腦膜炎較其它真菌感染性疾病較少見，同時由于其感染癥狀無特異性，易出現(xiàn)誤診和漏診可能，感染后其死亡率一直處于高水平，如得不到及時規(guī)范治療，其預(yù)后非常差[4]。為加強(qiáng)對新型隱球菌腦膜炎感染的了解，本文特究回顧性分析貴陽市第二人民醫(yī)院2015 年11 月至2019 年10 月確14 例新型隱球菌腦膜炎患者臨床資料，并重點(diǎn)分析相對應(yīng)的檢測方法，以提高臨床醫(yī)師對該疾病診斷的實驗室檢測技術(shù)認(rèn)識。

1 對象與方法

1.1 一般資料

收集貴陽市第二人民醫(yī)院2015 年11 月至2019 年10 月確診的新型隱球菌腦膜炎14 例臨床資料，記錄其基礎(chǔ)方面疾病、主要臨床表現(xiàn)、易感因素、治療效果及預(yù)后。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn)

出院小結(jié)診斷為新型隱球菌腦膜炎；腦脊液培養(yǎng)檢出新型隱球菌和(或)腦脊液離心濃縮墨汁負(fù)染色陽性為確診病例。所有的腦脊液檢測標(biāo)本均為抗菌藥物使用前或藥物濃度低谷時采集。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

用SPSS 23.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料以率（%）表示。

2 結(jié)果

2.1 基本資料

患者一般資料特點(diǎn)：14 例患者中，男9 例、女5 例，男性居多(9/14)；年齡階段19-75 歲，平均(36.05±0.52) 歲；有明確禽鳥接觸史(3/14)占發(fā)病總數(shù)的21.4%；其中僅1 例為艾滋病患者，占發(fā)病總數(shù)7.1%；其余患者13 例，占發(fā)病總數(shù)92.9%；合并基礎(chǔ)疾病(13/14)例，占發(fā)病總數(shù)的92.9%，其中肝部疾病5 例，腎部疾病3 例，高血壓2 例，消化道疾病1 例，慢性乙型肝炎1 例，艾滋病引發(fā)疾病1 例。

2.2 臨床表現(xiàn)

患者均在診斷過程中出現(xiàn)頭痛等相關(guān)癥狀(100%)，后呈現(xiàn)進(jìn)行性加重；均伴有不同程度顱內(nèi)壓升高(100%)；其中發(fā)熱患者12例(85.7%)，多主要為低熱或者中度發(fā)熱，高熱不常見；由顱內(nèi)壓升高引起嘔吐患者9 例64.2%)；腹瀉、腹痛患者3 例(21.4%)；腦膜刺激征陽性10 例(71.4%)；嚴(yán)重造成復(fù)視、視物模糊2 例(14.3%)。

2.3 不同檢測方法的比較

腦膜炎患者腦脊液標(biāo)本檢測結(jié)果顯示：兒童需氧微生物培養(yǎng)瓶培養(yǎng)法陽性14 例，陽性率為100%；檢測隱球菌莢膜多糖抗原陽性13 例，陽性率為92.9%；墨汁負(fù)染色法陽性8 例， 陽性率為57.1%，比較3 種方法的方法學(xué)結(jié)果，顯示培養(yǎng)法顯著高于傳統(tǒng)墨汁負(fù)染色法，兒童需氧微生物培養(yǎng)瓶培養(yǎng)法與快捷簡便檢測隱球菌莢膜多糖抗原有非常高的符合性，與臨床的診斷符合率大100%，可廣泛臨床用于臨床診斷。

3 討論

新型隱球菌為呈圓形或卵圓形，革蘭染色陽性，菌體外有寬厚的莢膜，新型隱球菌是引起人類感染一種條件致病性真菌。人體免疫功能低下，如長期應(yīng)用廣譜抗生素、惡性腫瘤及應(yīng)用免疫抑制劑等時可機(jī)會性導(dǎo)致其感染[5-6]。本研究發(fā)現(xiàn)有13 例患者合并有基礎(chǔ)疾病，有12 例患者出現(xiàn)最常見的發(fā)熱癥狀；有10 例并發(fā)隱球菌腦膜炎，查體患者有不同程度出現(xiàn)頭暈頭痛，伴或不伴惡心嘔吐、手腳抽搐、視物模糊等神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，同時腦膜刺激征均為陽性。研究表明該病的預(yù)后主要取決于是否存在基礎(chǔ)疾病和有無合并癥[7-8]。

墨汁負(fù)染色發(fā)作為基礎(chǔ)和經(jīng)典的方法，在過去相當(dāng)長一段時間普遍用于實驗室檢測新型隱球菌的檢測方法。目前，臨床常用的方法還有培養(yǎng)法及隱球菌莢膜多糖抗原檢測法，當(dāng)然同時還有其他如影像學(xué)、分子技術(shù)和病理組織學(xué)檢查等相互聯(lián)合診斷方法[9]。本研究中利用墨汁負(fù)染色法、兒童需氧微生物培養(yǎng)瓶培養(yǎng)法、隱球菌莢膜多糖抗原對14 例臨床診斷隱球菌性腦膜炎患者腦脊液檢測，結(jié)果顯示兒童需氧微生物培養(yǎng)瓶培養(yǎng)法、隱球菌莢膜多糖抗原檢測法、墨汁負(fù)染色法的陽性率分別為陽性率為100%、92.9%、57.1%。培養(yǎng)法是隱球菌性腦膜炎診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，本研究中采用的兒童需氧微生物培養(yǎng)瓶培養(yǎng)法陽性率為100% ，略高于比其他文獻(xiàn)，主要的因素是我院腦脊液培養(yǎng)是按兒童需氧微生物培養(yǎng)瓶標(biāo)本推薦量1～3mL 由臨床醫(yī)生直接床旁無菌操作接種于瓶內(nèi)，這樣可有效提高接種標(biāo)本微生物含量，同時因該兒童需氧微生物培養(yǎng)瓶的營養(yǎng)物質(zhì)成分比較豐富，這樣既可有效減少送檢過程及檢驗中環(huán)節(jié)導(dǎo)致標(biāo)本污染可能，又可一定程度上提高陽性檢出率，當(dāng)然本次研究提供的數(shù)據(jù)有限，不具有廣泛代表性，但這是今后值得關(guān)注和研究的方向。墨汁負(fù)染色法作為傳統(tǒng)的可靠的診斷方法，陽性率（57.1%），與張江峰等的4 種檢測方法在隱球菌性腦膜炎中的診斷價值中報道的陽性率48.3%比較我院陽性率較高[9]，該方法主要依賴標(biāo)本的采集時機(jī)、采集量和檢驗人員的技能水平，檢驗人員經(jīng)驗不足均易發(fā)生漏診的情況。目前，隱球菌莢膜多糖抗原檢測法越來越多的得到臨床認(rèn)可，臨床廣泛應(yīng)用該方法快速快速篩查隱球菌性腦膜炎，且陽性率與培養(yǎng)法相當(dāng)，是一個非常好的快速診斷方法。

總之，培養(yǎng)法是輔助診斷隱球菌性腦膜炎的金標(biāo)準(zhǔn)，雖耗時比較長，一般得3-5 天，但其與臨床診斷的符合率，特別是我院采用兒童需氧微生物培養(yǎng)瓶的診斷符合率達(dá)100%，臨床為明確診斷和抗菌藥物指導(dǎo)建議首選的方法；傳統(tǒng)的墨汁染色方法對隱球菌性腦膜炎檢測更直觀且更可靠但陽性率低，是臨床實驗室最基本的檢測方法，但受檢驗人員技術(shù)因素及其它因素影響較大，隱球菌莢膜多糖抗原檢測方法具有操作簡單，報告迅速等特點(diǎn)，便于臨床的快速篩查，且與培養(yǎng)法的符合率高，可與培養(yǎng)法進(jìn)行相互佐證，在臨床診斷中具有非常高的診斷優(yōu)勢。因此，仔細(xì)觀察患者臨床表現(xiàn)，認(rèn)真詢問病史和居住環(huán)境，依據(jù)檢驗方法的聯(lián)合共同使用，對新型隱球菌性腦膜炎的及時、快速、準(zhǔn)確診斷具有十分重要的意義。