化學(xué)發(fā)光法檢測HBsAg臨界值結(jié)果的研究及處理

南京市高淳人民醫(yī)院（211300）孫穎

血液中乙肝標志物的種類較多，其中表面抗原（HBsAg)是最主要的，HBsAg陽性是確診乙型肝炎的基本條件。由于人類個體差異及感染時間長短等因素，人體內(nèi)HBsAg含量存在高低差異，我國低濃度的 HBsAg人群在乙肝患者中，占有一定的比例，約占陽性的23%，因此，不能輕視這部分人群，如未及時檢出，乙肝病毒可能會通過輸血、手術(shù)等途徑擴散開來，造成疾病的傳播，低濃度HBsAg患者的發(fā)現(xiàn)對臨床選擇正確治療手段甚至醫(yī)生自我保護有重大意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集我院2016年6月～12月HBsAg 定量結(jié)果為臨界值(0.05 IU/ml≤HBsAg≤2IU/m1)的樣本共30份。

1.2 試劑與方法

1.2.1 儀器試劑 美國雅培的ARCHITECT IR2000全自動化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析儀，原裝配套HBsAg試劑及確認試劑，按保養(yǎng)手冊進行儀器的保養(yǎng)及維護，每日檢測質(zhì)控，使用安圖專用發(fā)光定量質(zhì)控品。

1.2.2 測定方法 采用化學(xué)發(fā)光微粒子免疫檢測技術(shù)測定HBsAg，當出現(xiàn)結(jié)果0.05～2IU/ml時，將標本用最大離心力重新離心10min以上，再次測定HBsAg，如結(jié)果<0.05IU/ml，則報告HBsAg陰性；如檢測結(jié)果仍落在0.05～2之間，則進行HBsAg抗體中和確認試驗，HBsAg確認試驗是利用CMIA技術(shù)，同時測定中和及未中和標本的HBsAg的S/CO值，如果未中和標本信號S/CO≥0.70，且中和標本的RLU與未中和標本相比減少了>50%時，即可確認HBsAg陽性。

2 結(jié)果

3 0 例H B s A g 定量檢測初次結(jié)果為0.06～1.43，平均0.55，均為臨界結(jié)果，標本經(jīng)重新離心10min以上，再次檢測HBsAg，結(jié)果為0.07～1.87，平均0.54，用抗體中和確認試驗進行HBsAg確認，按照判斷標準中和率下降>50%為確認試驗陽性，30例標本中有28例符合標準，HBsAg確認為陽性，2例未確認，確認試驗陽率高達93%。

3 討論

乙肝是我國最常見的肝臟疾病，臨床常常應(yīng)用抗原抗體特異性結(jié)合原理的方法來測定HBsAg及相關(guān)抗體，其檢測結(jié)果是診斷乙肝的基礎(chǔ)。由于檢測方法的靈敏度各有差異，導(dǎo)致一些低濃度HBsAg不能被檢測出，尤其是臨界值。據(jù)研究[1]低濃度HBsAg的出現(xiàn)原因較復(fù)雜，可能是以下3個方面：①患者處于乙肝感染的隱匿期、急性乙肝恢復(fù)期、感染后自身痊愈的后期攜帶者，此時病毒是低水平復(fù)制，并且可能存在血清學(xué)轉(zhuǎn)換，出現(xiàn)抗體[2]。②病毒的變異會使HBsAg的抗原性發(fā)生改變，導(dǎo)致靈敏度不夠，結(jié)果表現(xiàn)為弱陽性，體內(nèi)的HBsAg含量實際很高。③因機體的免疫系統(tǒng)對病毒的應(yīng)答反應(yīng)表現(xiàn)為免疫耐受，導(dǎo)致表面抗原水平表達較低。

日常工作中，本院每月檢測的近2000例HBsAg約有3～5例為低濃度，約占總數(shù)的1%～2%，比例雖不高，日積月累，將是一份大數(shù)據(jù)，怎樣準確報告，避免引起糾紛，是我們必須面對的問題，按照檢驗操作規(guī)程，當結(jié)果存在疑問時，應(yīng)該進行抗體中和確認試驗或HBV-DNA檢測以驗證結(jié)果的可靠性。但是，由于進口試劑成本以及標本數(shù)量不能滿足日常檢測的需要，HBsAg確認試驗未能開展，我們與試劑廠家聯(lián)系，最終予以檢測。

本次研究結(jié)果顯示，30例標本大多數(shù)能被特異性抗體吸附，證明患者體內(nèi)確實存在病毒抗原，HBsAg陽性為真實結(jié)果；2例不能進行確認者，具體原因不能查明，有研究[3]提出可能是因為血中難以消失的物質(zhì)的干擾以及抗體中和試驗的本身敏感性對檢測的干擾，在HBsAg濃度很低時，會導(dǎo)致中和試驗呈假陰性。同時，雅培試劑說明書上也特別提出：因為早期感染或早期恢復(fù)，非特異性結(jié)合可能掩蓋樣品中低濃度的HBsAg，導(dǎo)致假陰性，對此，我們建議對HBsAg定量結(jié)果為陽性而確認試驗陰性者，應(yīng)建立跟蹤隨訪記錄，掌握HBsAg在病情變化中的改變。

隨著時代的發(fā)展，人們法律意識日益增強，CMIA法檢測HBsAg結(jié)果為弱陽性的標本，換一種靈敏度不及CMIA的方法來檢測，很可能會出現(xiàn)陰性結(jié)果，這種時陰時陽的結(jié)果容易引起醫(yī)患糾紛，必須引起足夠的重視。所以本次研究建議在條件允許的情況下，特別是當HBsAg為低濃度值(<2IU/ml)時，應(yīng)進行HBsAg抗體中和確認試驗，以保證結(jié)果的準確性，避免差錯的發(fā)生。