前列腺炎合并不育癥患者彈性蛋白酶、miR-551b水平及診斷疾病價(jià)值

熊 標(biāo) 朱 里 盧 童 周治軍

湖北省天門市第一人民醫(yī)院(431700)

慢性前列腺炎是泌尿生殖系統(tǒng)常見(jiàn)疾病[1-2]。發(fā)病機(jī)制包括細(xì)菌感染和非細(xì)菌感染[3]，非細(xì)菌感染型病因復(fù)雜，推測(cè)由免疫、神經(jīng)內(nèi)分泌共同參與的病理變化[4]。許多研究均發(fā)現(xiàn)慢性前列腺炎對(duì)男性生殖功能有嚴(yán)重影響[5]。前列腺按摩液(EPS)中彈性蛋白酶(NE)水平能反映前列腺炎癥程度，且呈正相關(guān)關(guān)系[6]；miR - 551 b基因單核苷酸多態(tài)性和精子運(yùn)動(dòng)能力相關(guān)，可能參與了雄性生殖系統(tǒng)發(fā)育及精子活力調(diào)節(jié)[7]。本研究通過(guò)對(duì)慢性前列腺炎不育癥患者EPS中NE和miR-551 b水平分析，探究其對(duì)前列腺炎患者不育的診斷價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2017年7月—2019年5月本院收治的前列腺炎合并不育癥患者60例作為觀察組，同期健康志愿者60例為對(duì)照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合相關(guān)前列腺炎[8]和男性不育[9]診斷標(biāo)準(zhǔn)；②無(wú)精神障礙、語(yǔ)言障礙、聽(tīng)力障礙等影響研究進(jìn)程者；③婚后夫妻性生活正常且未采取避孕措施≥2年未生育。排除標(biāo)準(zhǔn)：①不育由女方引起；②生殖障礙、性功能低下、隱睪癥或放化療引起不育；③嚴(yán)重心肝腎功能、造血系統(tǒng)、循環(huán)系統(tǒng)疾病等；④精索靜脈曲張、感染、內(nèi)分泌系統(tǒng)及其他慢性疾病者。所有納入人員均對(duì)本研究知情并簽署同意書(shū)，本研究獲本院倫理委員會(huì)同意。

1.2 生化指標(biāo)檢測(cè)

兩組患者均禁欲3～5 d后采集EPS和精液5 ml，酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)EPS中NE(試劑盒由上海酶聯(lián)生物技術(shù)有限公司生產(chǎn))；精液離心 10 min 去除精子細(xì)胞，取上清離心 5 min 進(jìn)一步去除其他細(xì)胞殘?jiān)玫骄珴{，提取精漿總RNA(試劑盒由賽默飛世爾科技提供)，miR - 551 b采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)，對(duì)提取的總RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄得到miR - 551 bDNA單鏈(試劑盒由TaKaRa公司提供)，熒光定量檢測(cè)miR-551 b表達(dá)水平(試劑盒由TaKaRa公司提供)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)采用SPSS18.0處理，EPS中NE、miR-551b表達(dá)采用中位數(shù)(四分位數(shù))[M(P25,P75)]表示，采用非參數(shù)Mann-Whitney U檢驗(yàn)分析；采用Spearman秩相關(guān)進(jìn)行相關(guān)性分析；診斷效能以百分率表示，采用ROC曲線進(jìn)行診斷效能分析。以P<0.05為差異具有顯著性。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般情況

觀察組年齡(30.6±4.3)歲(30.0～45.5歲)，病程(3.1±1.2)歲(1.6～5.1年)；對(duì)照組年齡(35.6±4.2)歲(30.3～45.5歲)。兩組年齡無(wú)差異 (P>0.05)。

2.2 NE、miR-551b表達(dá)情況

觀察組EPS中NE水平[1472.25(812.23,1735.65) ]高于對(duì)照組[156.38(76.35,226.52)]，miR-551b[5.13(2.34,13.47)]表達(dá)水平低于對(duì)照組[22.31(8.64,42.23)](P均<0.05)。Spearman秩相關(guān)分析結(jié)果顯示，觀察組NE水平與miR-551b表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.874,P<0.01)。

2.3 NE和miR-551b診斷前列腺炎合并不育效能

采用Graphpad 6.0軟件進(jìn)行診斷效能分析。NE檢測(cè)敏感度(72.9%)高于miR-551b(70.5%)，特異度(64.7%)、準(zhǔn)確性(74.1%)低于miR-551b(72.1%、77.2%)，而NE和miR-551b聯(lián)合診斷的敏感度(79.2%)、特異度(81.5%)和準(zhǔn)確性(84.3%)均高于單一檢測(cè)(均P<0.05)。不同指標(biāo)檢測(cè)前列腺炎合并不育癥患者診斷的ROC曲線下面積(AUC)存在差異。見(jiàn)表1。

表1 不同檢測(cè)指標(biāo)診斷前列腺炎合并不育癥AUC

3 討論

雖然很多學(xué)者均認(rèn)為慢性前列腺炎可導(dǎo)致男性不育，但對(duì)不育的診斷目前尚缺乏可靠的分子標(biāo)志物。臨床常用方法主要有常規(guī)精液分析，但其標(biāo)志物如肉毒堿、果糖、酸性磷酸酶和α-糖苷等診斷敏感度和特異度均較差；同時(shí)有研究顯示男性不育患者中僅有50%表現(xiàn)精液異常，部分精液異?；颊呷杂猩芰10]。此外男性不育的檢查還有睪丸活檢，但具有侵入性使患者依從性差。近年研究發(fā)現(xiàn)[11]，人精漿中含有豐富的miRNA，在男性不育患者中的表達(dá)與正常男性存在差異。miR-551b是一種與細(xì)胞增殖和凋亡相關(guān)的miRNA，其基因單核苷酸多態(tài)性與精子運(yùn)動(dòng)能力相關(guān)，可能參與了雄性生殖系統(tǒng)發(fā)育及精子活力調(diào)節(jié)。NE則與患者前列腺炎炎癥程度呈正相關(guān)關(guān)系[12]。兩者聯(lián)合檢測(cè)診斷前列腺炎患者不育價(jià)值。

本研究發(fā)現(xiàn)，觀察組的EPS中NE含量高于對(duì)照組，精漿中miR-551b表達(dá)水平低于對(duì)照組，同時(shí)NE含量與miR-551b表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)。有研究表明[13]，炎癥可導(dǎo)致氧自由基的增加，直接或間接對(duì)精子細(xì)胞膜和DNA產(chǎn)生損傷和破壞作用。正常生理?xiàng)l件下，NE對(duì)所在細(xì)胞具有保護(hù)作用，并與其蛋白酶抑制劑保持平衡狀態(tài)；發(fā)生炎癥后，蛋白酶抑制劑對(duì)NE調(diào)節(jié)失控，使其活化后侵入其他組織器官，引起功能障礙[14]。此外，有研究顯示[15]，NE濃度與精液生化指標(biāo)參數(shù)檸檬酸、鋅、酸性磷酸酶以及精子能動(dòng)性和密度均呈顯著負(fù)相關(guān)，提示前列腺按摩液中高水平NE對(duì)男性生育能力有負(fù)面影響。有研究發(fā)現(xiàn)[16]，無(wú)精癥患者精漿miR-551b含量顯著低于正常對(duì)照組，這與本研究結(jié)果類似，提示miR-551b可能成為男性不育的診斷指標(biāo)。有研究指出[17]，miR-551b可調(diào)節(jié)在睪丸發(fā)育和精子發(fā)生中有重要調(diào)節(jié)作用的TGF-β轉(zhuǎn)錄因子基因家族的靶基因表達(dá)，同時(shí)對(duì)細(xì)胞增殖凋亡還具有重要調(diào)節(jié)作用，因此miR-551b可能參與了精子的發(fā)生過(guò)程。

本研究中，兩種指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)診斷前列腺炎合并不育癥敏感度、特異度和準(zhǔn)確性較高。有研究表明[18]，以EPS中NE>600 ng/ml 為陽(yáng)性診斷，ⅢA 型前列腺炎靈敏度 99%，特異度 100%，能較好鑒別前列腺炎導(dǎo)致不育患者。有動(dòng)物研究證明[19]，miR-551b單核苷酸多態(tài)性和公牛精子前向運(yùn)動(dòng)相關(guān)；而相關(guān)研究表明[20]，miR-551b對(duì)弱精癥和無(wú)精癥鑒別診斷的敏感度高達(dá)100%，同時(shí)精漿中水平是無(wú)精癥或弱精癥的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。提示miR-551b有望成為鑒定男性不育癥的分子標(biāo)志物。

綜上所述，NE和miR-551b表達(dá)水平在前列腺炎合并不育癥患者發(fā)生異常，兩者聯(lián)合檢測(cè)對(duì)診斷前列腺炎患者不育具有較高的特異度和靈敏度，有望成為診斷前列腺炎患者不育癥的分子標(biāo)志物。