不同加工方法對(duì)陜西地區(qū)引種五味子木脂素的影響

靳 淼，劉金娜，劉 慧，黑育榮，劉玉蘭

(1.楊凌職業(yè)技術(shù)學(xué)院，陜西 楊凌 712100；2.陜西云嶺生態(tài)科技有限公司，陜西 西安 710075)

五味子為常用中藥材，又被稱(chēng)為“北五味子”，是木蘭科五味子屬植物五味子 Schisandra chinensis ( Turcz．) Baill.的干燥成熟果實(shí)。具有收斂固澀、益氣生津、補(bǔ)腎寧心的作用，用于久嗽虛喘、夢(mèng)遺滑精、遺尿尿頻、久瀉不止、自汗盜汗、津傷口渴、內(nèi)熱消渴、心悸失眠等癥狀[1]。目前針對(duì)五味子化學(xué)成分研究表明，其果實(shí)中存在多種化學(xué)成分，例如木脂素類(lèi)、有機(jī)酸類(lèi)、揮發(fā)油類(lèi)、黃酮類(lèi)等，木脂素為五味子中最主要成分，含有量最高[2]，其中的五味子醇甲亦作為藥典中五味子含量的測(cè)定依據(jù)。

五味子主產(chǎn)地在東北，傳統(tǒng)的產(chǎn)地加工方式主要為曬干，目前有研究表明不同加工方式對(duì)五味子質(zhì)量有所影響[3～4]，但研究對(duì)象全部針對(duì)東北產(chǎn)五味子。五味子這幾年在陜西南部引種成功，長(zhǎng)勢(shì)良好，產(chǎn)量高，成為當(dāng)?shù)靥厣a(chǎn)業(yè)，但對(duì)于引種地來(lái)說(shuō)，五味子最適加工方法尚缺乏系統(tǒng)研究。筆者以陜西引種五味子為研究對(duì)象，通過(guò)測(cè)定五味子中木脂素類(lèi)成分，對(duì)五味子的不同干燥方法進(jìn)行了初步研究，以期為陜產(chǎn)五味子建立規(guī)范化加工方法提供依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 材料

五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子醇乙、五味子丙素、五味子乙素標(biāo)品均購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司，批號(hào)分別為Y14F10H80840、P13O8S45575、R12O8F45508、P05J9S52197、P28J8F36961、P29J8F38066，純度均大于98%；乙腈、甲醇均為色譜純；水為純凈水(品牌：娃哈哈)。

五味子樣品來(lái)自從東北引種到陜西省柞水縣營(yíng)盤(pán)鎮(zhèn)藥材種植基地的五味子“紅珍珠”種苗。

1.2 儀器

液相色譜儀( 美國(guó)賽默飛公司；Thermo U3000)；電熱鼓風(fēng)干燥箱( 北京科偉永興儀器有限公司；101-3型)；電子分析天平( 上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司；FA2004型)；超聲波清洗器( 昆山超聲儀器有限公司；KQ -100DE型；超聲功率600 W，40 kHz)。

2 方法與結(jié)果

2.1 加工方法

選擇五味子成熟果實(shí)，均勻分為8份，分別進(jìn)行不同加工處理。具體處理方法見(jiàn)表1。

表1 五味子不同加工方法

2.2 不同加工方法處理后五味子外觀品質(zhì)對(duì)比

不同加工方法處理后的五味子，外觀性狀見(jiàn)表2、圖1。

表2 不同加工方法五味子外觀特征

2.3 木脂素含量測(cè)定

2.3.1 色譜條件 WondaCract ODS-2 C18色譜柱(150 mm×4.6 mm，5μm)；流動(dòng)相是乙腈(A)-水(B)，梯度洗脫：0～18min，A為50%；18～25min，A為50%～65%；25～30min，A為65%～75%；30～40min，A為75%～65%；40～45min，A為65%～50%；45～55min，A為50%。進(jìn)樣量為20 μL；流速為1.0 mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)218 nm；柱溫30 ℃。

2.3.2 制備供試品溶液 不同處理的五味子打粉，過(guò)3號(hào)篩，稱(chēng)取0.5g粉末，記錄重量，將粉末置具塞錐形瓶中，再加40mL甲醇，稱(chēng)重并記錄。超聲35min，提取結(jié)束后放置室溫，稱(chēng)重，滴加甲醇補(bǔ)足到初始測(cè)定重量，搖勻并進(jìn)行第一次過(guò)濾，第一次過(guò)濾后濾液再次通過(guò)0.45μm微孔濾膜進(jìn)行第二次過(guò)濾，最終得供試品溶液。

2.3.3 制備對(duì)照品溶液 精密稱(chēng)取六種對(duì)照品，甲醇溶解，配制成 1.18 mg·mL-1(五味子醇甲)、0.51 mg·mL-1(五味子酯甲)、0.55 mg·mL-1(五味子甲素)、0.933 mg·mL-1(五味子醇乙)、0.46 mg·mL-1(五味子丙素)、0.75 mg ·mL-1五味子乙素)對(duì)照品溶液。

2.3.4 線性關(guān)系考察 精密量取上述對(duì)照品溶液0.05 mL、0.1 mL、0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1 mL、1.2 mL加入10 mL容量瓶?jī)?nèi)，甲醇定容后搖勻測(cè)定，色譜條件參照“2.3.1”。橫坐標(biāo)(X)為對(duì)照品溶液不同濃度，縱坐標(biāo)(Y)為所測(cè)得峰面積，作標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行線性回歸，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 五味子中6種木脂素類(lèi)成分線性關(guān)系

2.3.5 精密度試驗(yàn) 依據(jù)上述色譜條件，連續(xù)6次測(cè)定對(duì)照品溶液，比對(duì)峰面積并計(jì)算RSD值。最終測(cè)得RSD均≤1.34%，表明儀器的精密度良好。

2.3.6 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱(chēng)取6份，每份0.5g的五味子粉末，制備溶液進(jìn)行分析，制備方法參照“2.3.2”，色譜條件依照“2.3.1”，記錄峰面積，計(jì)算6種成分含量，結(jié)果表明RSD均≤2.28%，說(shuō)明此方法重復(fù)性良好。

2.3.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 吸取上述方法制成的五味子供試品溶液，分別于放置的第0、2、4、8、14、24 h進(jìn)樣分析檢測(cè)，色譜條件依照“2.3.1”，記錄各時(shí)間節(jié)點(diǎn)所測(cè)峰面積，結(jié)果各待測(cè)組分峰面積RSD均≤1.73%，說(shuō)明樣品溶液24 h內(nèi)有良好的穩(wěn)定性。

2.3.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱(chēng)取每份0.25 g已知含有量五味子樣品5份，加“2.3.3”制備好的對(duì)照品溶液，不同對(duì)照品加入的量與樣品中該成分含量基本一致。通過(guò)對(duì)結(jié)果的計(jì)算，得出加樣回收率為：五味子醇甲98.81%、五味子酯甲102.15%、五味子甲素101.46%、五味子醇乙99.32%、五味子丙素102.48%、五味子乙素102.24%，RSD分別為1.35%、1.52%、2.03%、0.97%、1.08%、0.87%。

2.3.9 樣品測(cè)定 取五味子樣品，制備供試品溶液進(jìn)行分析測(cè)定，制備方法依照“2.3.2”，色譜條件依照“2.3.1”，每批樣品重復(fù)3次。結(jié)果見(jiàn)圖2、表4。

表4 不同加工方法五味子藥材中木脂素類(lèi)成分含量(n=3)

3 討論

五味子中木脂素類(lèi)成分含量最高，具有保護(hù)心肌損傷、保肝、抗腫瘤等作用[5～8]，且2015版《中國(guó)藥典》將五味子醇甲納入藥材評(píng)價(jià)指標(biāo)，對(duì)五味子醇甲含量有著明確規(guī)定，故而選擇木脂素類(lèi)成分作為不同加工方法的參考指標(biāo)。從表4可以看到，引種到陜西的五味子經(jīng)過(guò)不同加工方式處理后，五味子醇甲含量最高，且符合藥典0.4%規(guī)定。除五味子醇甲外，五味子酯甲、五味子乙素、五味子醇乙含量均較高，五味子丙素含量最少。

不同溫度烘干的五味子六種木脂素類(lèi)成分隨著烘干溫度增高逐漸增加，在50℃達(dá)到峰值后，逐漸降低。曬后稍蒸再陰干較直接曬干、稍蒸后曬干所測(cè)木脂素類(lèi)成分含量均較高，這可能是曬干蒸制中成分發(fā)生了改變，具體原因有待進(jìn)一步研究。

不同加工方法對(duì)五味子外觀性狀影響較大，曬干后成品顏色不好，整體干癟；而熱風(fēng)烘干成品顏色較曬干好。曬干后顏色與東北產(chǎn)地曬干后顏色并不相同[9]，這可能與引種地氣候采收時(shí)間有關(guān)。引種到陜西的五味子采收時(shí)間為8月初陸續(xù)采收，而原產(chǎn)地東北五味子采收期大多在9月上中旬[10]。因引種地曬干時(shí)環(huán)境溫度整體較高，造成曬干后成品性狀較差。

綜合來(lái)看熱風(fēng)50℃烘干木脂素類(lèi)成分較高，外觀性狀較好，為引種地適宜的干燥方法。