鴿新城疫病毒HI 抗體效價(jià)合格率與離散度的相關(guān)性分析

李杰 劉保國(guó) 寧春妹 杭柏林*

（1，河南省新鄉(xiāng)市畜產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測(cè)檢驗(yàn)中心 453003；2，河南科技學(xué)院動(dòng)物科技學(xué)院 453003）

新城疫（Newcastle Disease）是雞和鴿常見(jiàn)的一種病毒性傳染病，發(fā)病率和死亡率高，是世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）規(guī)定的動(dòng)物A 類(lèi)疫病，也是我國(guó)的I 類(lèi)動(dòng)物疫病[1]。常用疫苗免疫進(jìn)行預(yù)防新城疫的發(fā)生。新城疫病毒抗體的檢測(cè)常采用血凝抑制試驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè)，測(cè)定的抗體常稱(chēng)為血凝抑制（HI）抗體。當(dāng)鴿體內(nèi)新城疫病毒HI 抗體效價(jià)高，可有效降低鴿新城疫的發(fā)生。鴿群新城疫病毒HI 抗體的合格率高可有效保護(hù)鴿群不受鴿新城疫的影響。疫苗免疫后，檢測(cè)新城疫病毒HI 抗體效價(jià)時(shí)常常發(fā)現(xiàn)不同個(gè)體之間的HI 抗體效價(jià)不整齊，表現(xiàn)出一定的離散性[2,3]。為了了解鴿新城疫病毒HI 抗體效價(jià)合格率與離散度之間的相關(guān)性，本研究檢測(cè)了免疫鴿血清中新城疫病毒的HI 抗體，分析了HI 抗體效價(jià)的合格率和離散度，借助軟件分析了合格率和離散度之間的相關(guān)性，希望為鴿新城疫的防控提供一些幫助。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 試劑

檸檬酸鈉（分析純）和氯化鈉（分析純）購(gòu)自天津市天力化學(xué)試劑有限公司，健康公雞購(gòu)自新鄉(xiāng)市洪門(mén)鎮(zhèn)中心菜市場(chǎng)，碘伏購(gòu)自山東利爾康醫(yī)療科技股份有限公司，乙醇（75%）購(gòu)自新鄉(xiāng)市三偉消毒劑有限公司，雞新城疫活疫苗（La Sota 株）購(gòu)自哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司。其他為實(shí)驗(yàn)室常用試劑與耗材。

1.1.2 儀器

離心機(jī)（型號(hào)為T(mén)G16-WS）購(gòu)自湘儀離心機(jī)儀器有限公司，生化培養(yǎng)箱（型號(hào)為GNP-9270）購(gòu)自上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）購(gòu)自，電子天平（型號(hào)為 LT202B）購(gòu)自常熟市天量?jī)x器有限責(zé)任公司，移液器（Research plus）購(gòu)自德國(guó) Eppendorf 股份有限公司，高壓蒸汽滅菌器（型號(hào)為MJ-78A）購(gòu)自施都凱儀器設(shè)備（上海）有限公司，冰箱（型號(hào)為 BCD-325WKY1DPM）購(gòu)自廣東容聲電器股份有限公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 血液樣本的采集

199 份鴿血液樣本采集自鶴壁市某鴿場(chǎng)的21 棟鴿舍，樣本采集鴿均曾用新城疫病毒疫苗免疫過(guò)。采集時(shí)用碘伏擦拭，再用75%乙醇脫碘，然后用一次性無(wú)菌注射器從鴿翅部靜脈采集0.5～1ml 血液，4℃保存 2～4h。

1.2.2 血清樣本的制備

采集的血液于4000 轉(zhuǎn)/min 離心10min，將上清轉(zhuǎn)移至另一個(gè)無(wú)菌離心管中，-20℃保存。

1.2.3 雞紅細(xì)胞懸液的制備

按照鴿子血液樣本的采集方法從雞翅靜脈采集血液，用3.8%檸檬酸鈉抗凝，按照文獻(xiàn)[4]的方法制備1%雞紅細(xì)胞懸wHI 抗體效價(jià)的測(cè)定，按照文獻(xiàn)[4]方法進(jìn)行制備。當(dāng)HI 抗體效價(jià)≥5log2 時(shí)，認(rèn)為個(gè)體的免疫合格，HI 抗體效價(jià)＜5log2 時(shí)，認(rèn)為個(gè)體的免疫不合格；當(dāng)HI 抗體效價(jià)≥7log2 時(shí)，群體免疫合格[2]?？贵w的離散度用變異系數(shù)來(lái)表示，變異系數(shù)=（標(biāo)準(zhǔn)差/平均值）×100%，抗體的離散度≤10%為佳[2]。

1.2.5 相關(guān)性分析

鴿血清抗體效價(jià)合格率和離散度之間的非參數(shù)相關(guān)性（Spearman）利用GraphPad Prism 軟件中的統(tǒng)計(jì)工具進(jìn)行分析，p 值為兩尾檢驗(yàn)，置信區(qū)間為95%；同時(shí)利用該軟件中的線性回歸分析繪制回歸線，置信區(qū)間為95%。

2 結(jié)果與分析

2.1 鴿新城疫病毒HI 抗體效價(jià)的合格率與離散度

抽檢鴿的新城疫病毒HI 抗體檢測(cè)結(jié)果如附表所示。從附表中可以看出，新城疫病毒HI 抗體效價(jià)合格率最高為100%，共有8 棟鴿舍，占采樣總棟數(shù)的38.09%；合格率低于70%的鴿舍有8 棟，占采樣總棟數(shù)的38.09%；合格率最低為20%，有2棟鴿舍，占采樣總棟數(shù)的 9.52%；HI 抗體效價(jià)平均值大于7log2 的有7 棟鴿舍，群體免疫合格率為33.33%。從抗體離散度來(lái)看，所抽檢的21 棟鴿舍鴿新城疫病毒HI 抗體的離散度均大于10%，均不是很好，僅7 棟鴿舍鴿新城疫病毒HI 抗體的離散度小于20%。結(jié)果說(shuō)明，部分鴿舍中某些鴿的新城疫病毒免疫發(fā)生了失敗，部分鴿舍可能發(fā)生新城疫病毒野毒的感染。因此，需要進(jìn)行新城疫病毒的緊急免疫和再次加強(qiáng)免疫。

2.2 鴿新城疫病毒HI 抗體效價(jià)合格率與離散度的相關(guān)性

鴿新城疫病毒HI 抗體效價(jià)合格率與離散度之間的相關(guān)性如附圖所示。從附圖中可以看出，鴿新城疫病毒HI 抗體效價(jià)的合格率與離散度之間的相關(guān)系數(shù)r=-0.99136，P＜0.0001，呈極顯著性負(fù)相關(guān)。

3 討論

隨著疫苗的應(yīng)用，禽群爆發(fā)典型新城疫的幾率大大降低，但免疫禽群常常出現(xiàn)非典型新城疫。禽群中長(zhǎng)期存在新城疫病毒強(qiáng)毒是免疫禽群出現(xiàn)非典型新城疫的重要原因之一。當(dāng)免疫禽只的抗體效價(jià)下降，導(dǎo)致禽群群體免疫水平下降，不能抵抗強(qiáng)毒的攻擊，禽群將可能發(fā)生新城疫。因此，需要經(jīng)常檢測(cè)免疫禽只的抗體效價(jià)，以確定再次免疫的時(shí)間。

免疫后新城疫病毒HI 抗體效價(jià)是否合格的判定主要根據(jù)抗體效價(jià)的保護(hù)臨界值，高于臨界值時(shí)認(rèn)為是合格的，低于臨界值時(shí)認(rèn)為是不合格。但有人認(rèn)為新城疫的保護(hù)性HI 抗體效價(jià)的臨界值為4log2[5]，但也有參照 《高致病性禽流感診斷技術(shù)》（GB/T 16550-2008）認(rèn)為 5log2 是保護(hù)臨界值[2]。本著嚴(yán)格的要求，在本研究中以5log2 為合格的判定臨界值。一般認(rèn)為群體中有70%～80%的動(dòng)物有抵抗力，不會(huì)發(fā)生大規(guī)模的爆發(fā)性流行[1]。在本研究中，有1/3 鴿舍的抗體合格率低于70%，同時(shí)個(gè)體間抗體離散度高。這可能與免疫方法有關(guān)。經(jīng)詢(xún)問(wèn)得知，鴿場(chǎng)主要采用飲水方法進(jìn)行新城疫疫苗的免疫。而不同鴿的飲水量不同，導(dǎo)致攝入的疫苗量不同，最終機(jī)體產(chǎn)生的抗體量也不同，在鴿舍間出現(xiàn)出不同的抗體效價(jià)合格率和抗體效價(jià)離散度。本研究分析發(fā)現(xiàn)，鴿新城疫病毒HI 抗體效價(jià)的合格率與離散度之間呈顯著的負(fù)相關(guān)。這提示，正確免疫，確保每羽鴿接種相同劑量的疫苗，可以降低抗體效價(jià)的離散度，同時(shí)提高抗體效價(jià)的合格率。因此，我們建議鴿場(chǎng)進(jìn)行免疫時(shí)應(yīng)嚴(yán)格按照疫苗使用說(shuō)明書(shū)進(jìn)行每羽鴿的皮下注射滅活苗或點(diǎn)眼滴鼻弱毒苗，同時(shí)加強(qiáng)抗體效價(jià)監(jiān)測(cè)，及時(shí)加強(qiáng)免疫，以確保免疫效果。