獼猴桃細(xì)菌性潰瘍病綠色防控的研究進(jìn)展

劉湘林，方毅，畢勇，李小春，胡艷波

(1.湖北三峽職業(yè)技術(shù)學(xué)院，湖北宜昌 443000；2.長(zhǎng)陽土家族自治縣林業(yè)局)

獼猴桃細(xì)菌性潰瘍病(Pseudomonassyingaepv.actinidiae，以下簡(jiǎn)稱潰瘍病)為毀滅性病害，會(huì)造成嚴(yán)重的產(chǎn)量和經(jīng)濟(jì)損失。國內(nèi)外對(duì)該病的防控技術(shù)已有大量的研究報(bào)道，包括種苗、土壤、施肥、合理負(fù)載、修剪等農(nóng)業(yè)防治措施和化學(xué)、生物農(nóng)藥防治。筆者歸納總結(jié)了潰瘍病的綠色防治措施，包括抗?jié)⒎N苗、生物農(nóng)藥(包括拮抗菌、植物源和抗生素農(nóng)藥)兩方面。

1 獼猴桃抗細(xì)菌性潰瘍病種苗的培育

首先應(yīng)明確獼猴桃對(duì)潰瘍病菌的抗性機(jī)理，對(duì)砧木和品種的抗病性選育做出預(yù)判。培育高抗?jié)儾〉墨J猴桃苗木，包括高抗砧木和高抗接穗(品種)的選擇。

1.1 獼猴桃對(duì)潰瘍病菌的抗性機(jī)理

獼猴桃形態(tài)結(jié)構(gòu)與抗病性。李庚飛[1]、李聰[2]、張小桐[3]等研究，獼猴桃一年生枝條皮孔的長(zhǎng)度、密度與抗病性呈顯著負(fù)相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為0.915、0.919。一年生枝條皮孔長(zhǎng)度小、分布稀疏、突起較少是抗病的重要形態(tài)標(biāo)志。李聰[2]對(duì)葉片的氣孔長(zhǎng)度和分布密度研究也得出相同的結(jié)論。

獼猴桃的生理生化特性與抗病性。①獼猴桃抗氧化酶活性與抗病性。李淼[4]研究不同品種自然感染潰瘍病菌前后一年生枝條、葉片的抗氧化酶活性變化發(fā)現(xiàn)，感染潰瘍病菌前,抗病品種一年生枝條、葉片中的過氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)、超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性均低于感病品種；感染潰瘍病菌后,抗病品種和感病品種的5種酶活性均升高,抗病品種的增加幅度遠(yuǎn)高于感病品種。石志軍[5]認(rèn)為枝條韌皮部和葉中POD、SOD、CAT活性與病情指數(shù)呈正相關(guān)。張小桐[3]認(rèn)為抗病品種抗氧化酶活性低。李庚飛[1]認(rèn)為獼猴桃的POD、SOD酶活性高而抗病性低的結(jié)論與李淼的研究結(jié)論一致。②酚類物質(zhì)與抗病性。李庚飛[1]發(fā)現(xiàn)獼猴桃的抗病能力與枝條韌皮部的酚含量呈正相關(guān)；李聰[2]認(rèn)為獼猴桃品種的抗病性越強(qiáng)，葉片中的酚類物質(zhì)含量越高。③可溶性蛋白、可溶性糖與抗病性。石志軍[5]認(rèn)為獼猴桃韌皮部和葉片內(nèi)可溶性蛋白含量與病情指數(shù)呈負(fù)相關(guān)，可溶性糖含量與病情指數(shù)呈正相關(guān)。而李淼[6]發(fā)現(xiàn)抗病品種健株枝條、葉片中的可溶性蛋白含量顯著高于易感品種，枝條中可溶性蛋白含量與品種抗性呈正相關(guān)。李聰[2]認(rèn)為獼猴桃葉片中可溶性蛋白含量越高，抗病性越強(qiáng)。獼猴桃對(duì)潰瘍病的抗性與體內(nèi)可溶性蛋白含量成正相關(guān)，與可溶性糖含量呈負(fù)相關(guān)。

獼猴桃四倍體與抗病性。張弛[7]利用秋水仙素誘導(dǎo)紅陽形成四倍體，四倍體株系表現(xiàn)抗熱性、抗旱性均強(qiáng)于二倍體；POD、SOD酶活性分別是二倍體的4.5倍和2.2倍；離體葉片接種潰瘍病菌后，四倍體株系表現(xiàn)比二倍體更抗病。

1.2 獼猴桃抗?jié)儾≌枘镜倪x育

目前，中國一般使用野生的中華獼猴桃、美味獼猴桃或秦美、米良1號(hào)實(shí)生苗作砧木，專門進(jìn)行獼猴桃砧木育種研究比較少。段眉會(huì)[8]從野生美味獼猴桃資源中選育出抗?jié)ⅱ裉?hào)、抗?jié)ⅱ蛱?hào)2個(gè)砧木品種。雷玉山[9]以秦美為材料育出生長(zhǎng)快、嫁接親和力高、嫁接苗潰瘍病抗性高的砧木。陳錦永[10]從砧木的應(yīng)用、親和性、對(duì)接穗的影響及砧木抗逆等方面進(jìn)行了系統(tǒng)的歸納，可為砧木選育借鑒。

1.3 獼猴桃抗?jié)儾∑贩N的選育

李聰[2]田間調(diào)查發(fā)現(xiàn)毛花高抗?jié)儾?；徐香、金魁、金農(nóng)2號(hào)、海沃德中抗；秦美、金香中感；楚紅、黃金果高感。張小桐[3]得出金魁最抗,早鮮次之,魁蜜中抗,華美、海沃德中感,秦美、金豐感病,其中金豐最感病。石志軍[5]對(duì)不同品種枝條人工接種潰瘍病病原菌，華特和徐香表現(xiàn)高抗；迷你華特、金魁、綠肉優(yōu)系(G-HZ201201) 和毛雄抗??；紅陽、黃肉優(yōu)系11-7、大紅、早鮮、早艷和黃肉優(yōu)系Y-HZ201201高感。李淼[11]用聚類分析得出：中華軟、美味硬免疫；早鮮、金魁高抗；魁蜜中抗；華美2號(hào)、海沃德為中感品種；金豐、秦美為感病品種。

對(duì)潰瘍病抗性由強(qiáng)到弱依次為毛花獼猴桃(Actinidiaeriantha)、美味獼猴桃(Actinidiadeliciosa)、中華獼猴桃(Actinidiachinensis)；從品種角度，抗?jié)儾〉挠腥A特、徐香、金魁等，紅陽表現(xiàn)最不抗病。

2 獼猴桃細(xì)菌性潰瘍病的生物防治

獼猴桃潰瘍病生物防治涉及面極廣，僅從生物農(nóng)藥的拮抗菌(菌類活體)和生物代謝產(chǎn)物-抗生素制劑兩方面進(jìn)行歸納總結(jié)。

2.1 獼猴桃潰瘍病拮抗菌的篩選

EM菌的防治效果。EM菌(Effective Microorganisms)是以光合細(xì)菌、乳酸菌、酵母菌和放線菌為主的10個(gè)屬 80余種微生物復(fù)合而成的一種微生物活菌制劑。作用機(jī)理是EM菌與病原微生物爭(zhēng)奪營養(yǎng)逐漸占據(jù)優(yōu)勢(shì)，形成有益微生物菌優(yōu)勢(shì)群落，從而控制病原微生物的繁殖和對(duì)作物的侵襲。楊清平[12]將5年生紅陽潰病病斑刮除后，分3次涂EM菌泥、EM菌50倍液、200倍農(nóng)用鏈霉素和沼液，其防治效果依次為EM菌泥>EM菌50倍液>200倍農(nóng)用鏈霉素>沼液，EM菌稀釋倍數(shù)不高于50倍時(shí)防治效果較好。焦紅紅[13]用EM菌劑涂干和灌根預(yù)防獼猴桃潰瘍病效果高于60%。

拮抗細(xì)菌的篩選。崔麗紅[14]從絞股藍(lán)根及其根際土中篩選出3個(gè)細(xì)菌菌株，進(jìn)行皿內(nèi)拮抗?jié)儾』钚栽囼?yàn)和盆栽試驗(yàn)，表現(xiàn)出較強(qiáng)的拮抗活性。邵寶林[15]從土壤中分離出25株芽孢桿菌，經(jīng)篩選得到蠟樣芽孢桿菌(Bacilluscereus)B2菌株對(duì)潰瘍病拮抗作用最強(qiáng)，用該菌株發(fā)酵原液稀釋成1×109cfu/mL發(fā)酵液，選擇50倍稀釋液噴霧、100倍稀釋液涂抹能有效降低獼猴桃潰瘍病的危害。郭睿文[16]從湖南、江西、四川等地采集獼猴桃的健康株和疑似病株，進(jìn)行內(nèi)生細(xì)菌的分離、純化、鑒定，篩選出拮抗作用較好且穩(wěn)定的6個(gè)菌株，經(jīng)過16S rDNA測(cè)序和 GenBank分析，假單孢菌(Pseudomonassp.)3株、梭形芽孢桿菌屬(Lysinibacillussp.)3株。

拮抗真菌的篩選。燕金宜[17]從紅陽健康植株枝條中分離出1株黑孢菌屬(Nigrosporasp.)內(nèi)生真菌J2菌株，對(duì)獼猴桃細(xì)菌性潰瘍病病原菌有較好的抗性，其抑菌圈大小為15mm，繼代7次后抑菌圈大小為12mm，有較好的遺傳穩(wěn)定性，具有開發(fā)成生物防治菌株的潛力。

拮抗放線菌的篩選。田雪蓮[18]從獼猴桃根際土壤中分離、篩選出鏈霉菌屬(Streptomyces) 的NA-TXL-1菌株，采用預(yù)防法、治療法進(jìn)行盆栽實(shí)驗(yàn)，發(fā)酵原液的防治效果分別為73.1%、55.6%。朱海云[19]從健康獼猴桃植株中篩選出肉桂地鏈霉菌(Streptomycescinnamonensis) M109菌株，抑菌效果 MIC值為0.91mg/mL，采用噴霧法和注干法防治獼猴桃潰瘍病，防效分別為72.1%、 84.6%。宋曉斌[20]從西藏土壤中分離、篩選出鏈霉菌屬X22菌株，對(duì)獼猴桃潰瘍病病原細(xì)菌具有良好拮抗作用,抑菌圈大小為11.5mm；通過在植株上噴菌株懸液48小時(shí)后接潰瘍病菌表現(xiàn)出較好防治效果。對(duì)潰瘍病菌具有抑制作用的放線菌多屬于鏈霉菌屬。王芳[21]使用鏈霉菌屬SY-L12菌株為材料，采用液體共培養(yǎng)法和含菌抑菌圈法研究菌株對(duì)潰瘍病菌的生長(zhǎng)抑制作用，菌株在培養(yǎng)24小時(shí)后其發(fā)酵原液對(duì)病原菌的生長(zhǎng)抑制率達(dá)94.0%，在28℃、150r/min培養(yǎng)8～9天，最利于活性物質(zhì)的生產(chǎn)，發(fā)酵產(chǎn)物對(duì)潰瘍病的盆栽防效為85.4%，優(yōu)于對(duì)照藥劑氫氧化銅，可作為生物農(nóng)藥開發(fā)應(yīng)用。

獼猴桃潰瘍病噬菌體的研究。雷慶[22]于2007年首次報(bào)道獼猴桃潰瘍病菌噬菌體。從獼猴桃潰瘍病病枝中分離到一株噬菌體,測(cè)定該噬菌體在65℃下10分鐘內(nèi)即可全部失活、在pH值4～ 9范圍內(nèi)可穩(wěn)定存在、紫外線照射12分鐘幾乎全部失活；該噬菌體的最佳感染復(fù)數(shù)(感染時(shí)噬菌體與細(xì)菌數(shù)量的比值)為0.1，感染潰瘍病菌的潛伏期約60分鐘、爆發(fā)期約70分鐘、裂解量為123。

2.2 植物源農(nóng)藥的防治效果

目前用于防治潰瘍病的植物源農(nóng)藥主要有多羥基雙萘醛(WCT)和乙蒜素兩種。

多羥基雙萘醛。是從錦葵科(Malvaceae)植物篩選出來的一種活性化合物,對(duì)植物病毒復(fù)制有很好的抑制作用。 WCT稀釋50倍液對(duì)獼猴桃潰瘍病田間防治效果為58.5%，效果好于菌毒清；對(duì)潰瘍病的田間防治效果為69.3%，傷口平均愈合率為45.68%；接種WCT和潰瘍病原菌后,WCT預(yù)防處理的PPO和POD活性均較其他處理高[23]。WCT防治潰瘍病的機(jī)理是WCT能顯著提高抗氧化酶活性和誘導(dǎo)產(chǎn)生抑菌蛋白。

乙蒜素。從大蒜中提取，為大蒜素的乙基同系物，不但能抑制多種真菌、細(xì)菌，而且有促進(jìn)生長(zhǎng)的作用。黃露[24]對(duì)22種殺菌劑進(jìn)行室內(nèi)毒力測(cè)定，乙蒜素的EC50為20.1mg/L。高蓬明[25]發(fā)現(xiàn)乙蒜素對(duì)潰瘍病的抑菌效果明顯，田間防治以800倍液防效較好，可作為防治潰瘍病的有效藥劑在生產(chǎn)上應(yīng)用。80%乙蒜素10倍液涂干和1000倍液噴施防效分別為79.3%、89.5%[26]。

2.3 抗生素類農(nóng)藥

抗生素是由微生物(包括細(xì)菌、真菌、放線菌屬)或高等動(dòng)植物在生活過程中所產(chǎn)生的具有抗病原體或其他活性的一類次級(jí)代謝產(chǎn)物，能干擾其它生活細(xì)胞發(fā)育功能的化學(xué)物質(zhì)。

農(nóng)用鏈霉素。尹春峰[27]發(fā)現(xiàn)72%農(nóng)用鏈霉素田間防效85.3%。不同獼猴桃品種[28]的使用效果會(huì)有差異。

中生菌素。尹春峰[27]發(fā)現(xiàn)3%中生菌素1000倍液噴霧對(duì)獼猴桃潰瘍病的防效62.8%，3%中生菌素50倍液刮除病斑涂抹防效73.8%。3%中生菌素600倍液噴灑可作為防潰瘍的輔助藥劑[29]。

土霉素。崔永亮[30]從13種藥物中篩選出鹽酸土霉素抑菌效果最好，樹干注射1.0%鹽酸土霉素加0.005%吲哚乙酸加0.5%NH3NO3加0.5%KNO3加0.2%KH2PO4，病斑愈合率72.3%。龍友華[28]用90%鏈·土霉素可濕性粉劑涂抹獼猴桃潰瘍病病斑具有較好的防治效果，病斑愈合率82.5%。

四霉素。歐志升[31]試驗(yàn)0.3%四霉素田間防效71.1%。江景勇[32]將0.15%四霉素800 倍液加80%代森錳鋅800倍液作為防治獼猴桃潰瘍病組合藥劑之一，具有較好的效果。

春雷霉素。歐志升[31]采用20%葉枯唑可濕性粉劑(細(xì)寶)加20%噻唑鋅懸浮劑加農(nóng)用有機(jī)硅、1.5%金霉唑噻霉酮加2%細(xì)銼春雷霉素、50%多抗·喹啉銅加3%中生菌素加靚麗素、0.5%潰腐靈加0.5%靚果胺4組藥劑防治紅陽潰瘍病，防治效果分別為75.2%、71.6%、66.2%、59.9%。春雷霉素相關(guān)研究較少，還需要進(jìn)行室內(nèi)毒力測(cè)定和田間防效試驗(yàn)，可以作為輔助藥劑在生產(chǎn)中使用。

3 小結(jié)

防控獼猴桃潰瘍病最關(guān)鍵的措施是培育高抗?jié)儾〖藿用纾瑧?yīng)從以下方面選擇：①形態(tài)特征指標(biāo)。一年生枝條皮孔長(zhǎng)度小、分布稀疏、突起較少。②生理生化指標(biāo)。一年生枝條POD、PPO、SOD、CAT、PAL等酶活性健康時(shí)低，感病后活性大幅度增加；枝條和葉片中酚類物質(zhì)和可溶性蛋白含量高、可溶性糖含量低的品種。③多倍體抗性強(qiáng)。④明確不同種類和品種的抗性。毛花獼猴桃>美味獼猴桃>中華獼猴桃，華特、徐香、金魁抗性較高，紅陽表現(xiàn)最不抗病。

同時(shí)開展防控措施研究，篩選拮抗菌，加強(qiáng)植物源農(nóng)藥和抗生素農(nóng)藥的研究。EM菌用于涂干對(duì)潰瘍病有較好的防治效果。其他還有細(xì)菌、真菌、放線菌、病菌噬菌體等菌株，對(duì)潰瘍病菌有較強(qiáng)的拮抗作用，應(yīng)加大研究力度。多羥基雙萘醛和乙蒜素兩種植物源農(nóng)藥對(duì)潰瘍病防治有一定的效果，可以在生產(chǎn)中適量選用?？股剞r(nóng)藥對(duì)潰瘍病有較好防治效果的有農(nóng)用鏈霉素、土霉素、四霉素3種，生產(chǎn)中可以較大量選用；中生菌、春雷霉素2種有一定的防治效果，生產(chǎn)中可適量選用。