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胡遠(yuǎn)鵬 李中華

（湖南省益陽(yáng)市資陽(yáng)區(qū)畜牧水產(chǎn)局 413001）

在生豬養(yǎng)殖過(guò)程中，臨床引發(fā)仔豬腹瀉的病因十分復(fù)雜，其中主要包括營(yíng)養(yǎng)性、毒素中毒、細(xì)菌和病毒感染等原因，其中豬流行性腹瀉病毒（PEDV）、豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）和豬輪狀病毒（PORV）是以前較為常見(jiàn)可引起仔豬腹瀉的病毒性病原，此外，新發(fā)豬德塔冠狀病毒（PDCoV）和豬腸道冠狀病毒（SeACoV）也在我國(guó)部分地區(qū)豬場(chǎng)流行，給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失[1]。PDCoV 于2012 年首次在美國(guó)被報(bào)道，目前該病在我國(guó)不同地區(qū)豬場(chǎng)廣泛流行，但由于豬場(chǎng)獸醫(yī)或工作人員對(duì)該病尚不了解，且容易造成誤診，導(dǎo)致延誤疫病治療與防控[2]。此外，以上腸道病毒感染導(dǎo)致仔豬出現(xiàn)的臨床癥狀類(lèi)似，傳統(tǒng)的臨床診斷無(wú)法進(jìn)行確診，如果發(fā)生混合感染甚至可能造成漏診[3]。

本文首次對(duì)湖南省婁底市一例仔豬PDCoV 和TGEV 混合感染導(dǎo)致腹瀉的病例進(jìn)行報(bào)道，根據(jù)臨床診斷結(jié)合實(shí)驗(yàn)室診斷結(jié)果最終確診，闡述該類(lèi)混合感染病例診斷與防控過(guò)程，旨在為養(yǎng)殖戶（企業(yè)）與獸醫(yī)對(duì)此類(lèi)混合感染病例診斷提供參考。

1 豬場(chǎng)發(fā)病情況

2019 年11 月初，由于氣溫突變，湖南耒陽(yáng)市某養(yǎng)殖場(chǎng)產(chǎn)房2 棟部分欄舍新生仔豬全部出現(xiàn)腹瀉，嘔吐等癥狀，駐場(chǎng)獸醫(yī)對(duì)發(fā)病仔豬肌肉注射青霉素和安乃近等抗生素，但效果不佳，且其后臨近欄舍仔豬大面積發(fā)病，其中發(fā)病的新生仔豬達(dá)137 頭，雖然對(duì)發(fā)病豬群進(jìn)行對(duì)癥治療，但仍然死亡97 頭。經(jīng)確定該豬場(chǎng)母豬免疫注射過(guò)豬偽狂犬病、豬瘟、口蹄疫和圓環(huán)等疫苗。

2 臨床與病理癥狀

發(fā)病仔豬體溫升高、發(fā)抖、極度消瘦、脫水，排出水樣糞便，糞便帶有腥臭味，且部分豬群嘔吐；發(fā)病嚴(yán)重豬群四肢無(wú)力，因嚴(yán)重脫水而極度口渴，最后死亡。剖檢病死仔豬可見(jiàn)主要病變器官集中在腸道，腸道內(nèi)存在大量黃色液體，且腸壁因仔豬持續(xù)性腹瀉而變薄和充血，且無(wú)彈性；腸系膜淋巴結(jié)腫大且充血，且豬肛門(mén)松弛。

根據(jù)流行病學(xué)特點(diǎn)和發(fā)病仔豬臨床及病理癥狀，我們初步判斷該病主要為腸道病毒感染所致，但不能排除是否有其他病原感染。

3 實(shí)驗(yàn)室診斷

3.1 病毒性病原檢測(cè)

采集3 份腸道組織樣品，與適量生理鹽水混合并研磨，反復(fù)凍融3 次后高速（12000rpm）離心10min，取上清進(jìn)行核酸提取，并通過(guò)RT-PCR 法分別檢測(cè)PEDV、TGEV、PDCoV 和TGEV 等腸道病毒和豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒（PRRSV）、豬瘟病毒（CFSV），PCR 法檢測(cè)豬圓環(huán)病毒（PCV2）、豬偽狂犬病毒（PRV）和豬細(xì)小病毒（PPV）。擴(kuò)增產(chǎn)物結(jié)果如圖1 所示，3 份樣品均檢測(cè)為PDCoV（約600bp）和TGEV（約450bp）陽(yáng)性，但其他被檢測(cè)病原均為陰性（凝膠電泳圖略）。

3.2 細(xì)菌性病原檢測(cè)

為了確定發(fā)病豬群是否感染細(xì)菌性病原，無(wú)菌采集腸道組織，以滅菌接種環(huán)將腸組織液接種于鮮血瓊脂培養(yǎng)基，將培養(yǎng)基置于37℃恒溫箱（有氧或無(wú)氧環(huán)境）24h 或48h，查看培養(yǎng)基表面是否存在菌落。結(jié)果均未發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基表面出現(xiàn)菌落。

4 診斷

結(jié)合臨床與實(shí)驗(yàn)室診斷結(jié)果，我們判斷該場(chǎng)仔豬發(fā)病由PDCoV 和TGEV 混合感染所致。

5 治療與防控

5.1 治療措施

針對(duì)疫情采取如下緊急治療措施：（1）對(duì)全群母豬免疫接種豬流行性腹瀉和豬傳染性胃腸炎弱毒疫苗（華派生物工程集團(tuán)有限公司產(chǎn)品）2 頭份，同時(shí)對(duì)產(chǎn)房仔豬緊急免疫1 頭份；（2）由于目前尚無(wú)診斷PDCoV 的疫苗，所以對(duì)病豬只能進(jìn)行對(duì)癥治療，其主要措施為：將發(fā)病豬群和健康豬群分開(kāi)飼養(yǎng)，在母豬飼料中添加適量黃芪多糖，提高免疫力；在仔豬飲水中添加葡萄糖、小蘇打、電解多維和食鹽，提高免疫力，防止脫水；在產(chǎn)房?jī)?nèi)鋪撒干粉消毒劑，同時(shí)帶豬進(jìn)行消毒，適量提高豬場(chǎng)溫度，同時(shí)保持干燥；（3）對(duì)無(wú)治療意義或死亡病豬進(jìn)行無(wú)害化處理。

5.2 防控措施

將糞污清除并無(wú)害化處理后，使用強(qiáng)力碘、過(guò)氧乙酸等消毒劑對(duì)全場(chǎng)進(jìn)行消毒；在欄舍過(guò)道鋪撒生石灰，以保障豬場(chǎng)干燥；定期采集豬群血液和糞便樣品，送至專(zhuān)業(yè)檢測(cè)機(jī)構(gòu)進(jìn)行病原監(jiān)測(cè)和抗體檢測(cè)；及時(shí)對(duì)豬群進(jìn)行疫苗免疫接種，且免疫兩周后應(yīng)檢測(cè)豬群抗體產(chǎn)生情況，若抗體未達(dá)到保護(hù)水平，應(yīng)及時(shí)進(jìn)行再次免疫等。

6 討論

豬流行性腹瀉病是抑制我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展的主要疫病之一，目前PEDV、TGEV、PROV 和PDCoV 是引發(fā)仔豬腹瀉的主要腸道病毒，但以上腸道病毒引發(fā)的臨床癥狀較為類(lèi)似，僅根據(jù)臨床及病理癥狀判定病原較困難，必須借助試驗(yàn)室診斷技術(shù)進(jìn)行確診，實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)中以RT-PCR 和PCR 法最為常見(jiàn)且方便[3，4]。值得注意的是，豬腸道病毒也容易與其他病原發(fā)生混合感染，如PRRSV、PCV2 等[5，6]。因此，在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室診斷時(shí)，應(yīng)盡可能去診斷更多的病原種類(lèi)，以免造成漏診，延誤疫病的治療與防控。

本文通過(guò)分子生物學(xué)技術(shù)確診本病例中仔豬腹瀉由PDCOV和TGEV 混合感染所引起，筆者猜測(cè)病原入場(chǎng)可能是通過(guò)豬場(chǎng)從外面引進(jìn)母豬導(dǎo)致，由于母豬感染TGEV 和PDCOV 等腸道病毒不會(huì)出現(xiàn)明顯的臨床癥狀，該類(lèi)病原在監(jiān)測(cè)過(guò)程中也容易被忽視。當(dāng)病原入侵產(chǎn)房后便導(dǎo)致初生仔豬腹瀉，造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。當(dāng)確診該豬場(chǎng)爆發(fā)PDCoV 和TGEV 混合感染后，我們對(duì)豬群緊急免疫接種豬流行性腹瀉和豬傳染性胃腸炎弱毒疫苗，可初步對(duì)TGEV 的流行進(jìn)行控制，但目前針對(duì)PDCoV 的有效疫苗較少，而且PDCoV 和TGEV 引發(fā)的臨床癥狀基本類(lèi)似，所以需采取一系列對(duì)癥治療措施，控制疫情的進(jìn)一步發(fā)生，降低養(yǎng)殖企業(yè)的經(jīng)濟(jì)損失。今后對(duì)該類(lèi)疫病的防控應(yīng)提高豬場(chǎng)生物安全水平的同時(shí)，規(guī)范化飼養(yǎng)，提高豬群免疫力，同時(shí)定期檢測(cè)豬群免疫接種相應(yīng)疫苗和抗體水平。