迪慶州馬鈴薯“中甸紅”脫毒苗快繁技術(shù)

斯南白宗

（迪慶州農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所，云南 香格里拉674499）

馬鈴薯是糧、菜、飼、加工兼用型作物，也成為全球四大糧食作物，也是迪慶州廣大農(nóng)牧民的主要糧食作物，是發(fā)展畜牧業(yè)的主要飼料，是經(jīng)濟(jì)收入的重要來(lái)源之一。迪慶州特殊的地理環(huán)境已使迪慶州馬鈴薯成為云南省最重要的優(yōu)質(zhì)馬鈴薯種薯繁育和反季商品薯生產(chǎn)地之一。但是迪慶州大部分地區(qū)的馬鈴薯種植采用傳統(tǒng)自留種薯方式，馬鈴薯病毒的積累和傳播導(dǎo)致種性退化，嚴(yán)重影響產(chǎn)量和品質(zhì)，已成為制約迪慶州馬鈴薯發(fā)展的重要因素之一。迪慶州農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所自2012年開始引進(jìn)設(shè)備，組織科研人員利用莖尖剝離技術(shù)對(duì)馬鈴薯進(jìn)行脫毒，經(jīng)過(guò)科技人員不斷地研究，2013年可以利用這一技術(shù)成功獲得脫毒苗，通過(guò)組織培養(yǎng)馬鈴薯組培苗，進(jìn)而生產(chǎn)出馬鈴薯脫毒種薯用于生產(chǎn)，2016年生產(chǎn)出第一批商品薯，并進(jìn)行推廣，這一方法恢復(fù)了原品種的特征特性，達(dá)到了提純復(fù)壯的目的，有效防止了迪慶州馬鈴薯種薯退化，大大提高了馬鈴薯產(chǎn)量和品質(zhì)。截至2018年，迪慶州農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所已成功脫毒了中甸紅、云薯505、云薯401、麗薯6號(hào)等22個(gè)品種，其中包括本地品種10個(gè)。本實(shí)驗(yàn)選用的品種中甸紅是由迪慶州農(nóng)科所和州種子公司從阿壩紅宣品種的大田優(yōu)良單株中系統(tǒng)選育而成。2001年通過(guò)云南省品種審定。經(jīng)過(guò)10多年的反復(fù)留種栽種，其產(chǎn)量已受到嚴(yán)重影響，通過(guò)脫毒苗快繁技術(shù)達(dá)到了提純復(fù)壯的目的。迪慶州馬鈴薯脫毒苗快繁技術(shù)已逐漸成熟，為馬鈴薯產(chǎn)業(yè)的發(fā)展提供了大量?jī)?yōu)質(zhì)種薯，為迪慶州馬鈴薯增產(chǎn)奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。

1 材料準(zhǔn)備

材料選用中甸紅，試驗(yàn)地點(diǎn)在迪慶州農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所實(shí)驗(yàn)室。對(duì)中甸紅進(jìn)行田間選株，這一步驟尤為重要，其母株應(yīng)選擇性狀穩(wěn)定、生長(zhǎng)健壯、無(wú)病蟲害的成年馬鈴薯健康植株，并做好標(biāo)記。待收獲時(shí)選擇所標(biāo)記中單株產(chǎn)量和大薯率高及最能代表本品種特色的植株薯塊作為脫毒材料（且保證所選薯塊無(wú)任何損傷）。將薯塊放在室內(nèi)，避免強(qiáng)光照曬，溫度保持在15～25℃，濕度保持在50%～60%。待頂芽生長(zhǎng)到2～3cm 后，將其取下作為馬鈴薯快繁的外植體[1]。

2 消毒和剝離技術(shù)

在中甸紅脫毒苗的組織培養(yǎng)中，取得無(wú)菌外植體是組織培養(yǎng)成功的必要前提。新取得頂芽要做表面消毒處理，先用自來(lái)水反復(fù)沖洗，清除頂芽表面污垢，除去傷殘部分，剪成小段裝入培養(yǎng)皿中。再開啟超凈工作臺(tái)和滅菌器，準(zhǔn)備好培養(yǎng)皿、燒杯、蒸餾水、升汞水（0.1%～0.2%）、酒精（75%）、鑷子、剪刀、解剖刀、顯微鏡。將剪成小段的馬鈴薯芽放入培養(yǎng)皿用酒精（75%）浸泡10～20s，再用升汞水（0.1%～0.2%）浸泡8～10min，最后蒸餾水清洗6～8次。在浸泡和清洗過(guò)程中要多次使用鑷子、剪刀、解剖刀，使用后及時(shí)用酒精燈和滅菌器滅菌。將外植體接入MS+B9（10～20mg·L-1）+韋林（30～40mg·L-1），pH 值5.8，在培養(yǎng)室培養(yǎng)15～20d 室溫控制在25±1℃，等根長(zhǎng)到2cm 左右進(jìn)行變溫處理（40℃8h 或者25℃16h）培養(yǎng)40～60d。通過(guò)莖尖剝離技術(shù)接入MS+NAA 0.05mg·L-1+6-BA 0.1mg·L-1+GA30.2mg·L-1+泛酸鈣0.2mg·L-1+0.1%活性炭+糖30g·L-1+瓊脂6.5g·L-1，pH 值5.8的培養(yǎng)基中，培養(yǎng)25～30d。

3 莖尖分生組織培養(yǎng)方法

中甸紅莖尖分生組織培養(yǎng)，室溫保持在25±1℃，室內(nèi)濕度在70%～80%，前5d 培養(yǎng)的光照強(qiáng)度為1000Lx，第10d 光照強(qiáng)度為2000Lx，第15d光照強(qiáng)度為3000Lx，莖尖長(zhǎng)到1cm 后，光照強(qiáng)度為3500Lx，培養(yǎng)20d 后，再次進(jìn)行變溫處理（40℃8h或者25℃16h）40～60d。

后進(jìn)行1～2次的繼代培養(yǎng)，待長(zhǎng)成完全植株后，檢測(cè)是否帶病毒。馬鈴薯病毒檢測(cè)技術(shù)經(jīng)歷了傳統(tǒng)生物學(xué)檢測(cè)、免疫學(xué)檢測(cè)和分子生物學(xué)檢測(cè)3個(gè)階段[1]。迪慶州農(nóng)科所由于技術(shù)和設(shè)備的限制，一般寄到外地進(jìn)行檢測(cè)，每年檢測(cè)1～2次。

4 馬鈴薯組培苗的繼代擴(kuò)繁

檢測(cè)完成后，篩選出完全脫毒的中甸紅組培苗進(jìn)行繼代擴(kuò)繁，接入MS 培養(yǎng)基中，放在組培室培養(yǎng)，培養(yǎng)條件：溫度在18～25℃，濕度在50%～60%，光照時(shí)間16h·d-1。起始培養(yǎng)的光照強(qiáng)度為2000Lx，第2周為3000Lx，第3周開始為4000Lx。第2周開始長(zhǎng)根，第4～5周形成完全植株。再進(jìn)行繼代擴(kuò)繁2～4次。

5 組培苗培育應(yīng)注意的事項(xiàng)

5.1 消毒

在組培苗接種過(guò)程中，超凈工作臺(tái)、鑷子、剪刀、培養(yǎng)皿都要進(jìn)行消毒到位，不得隨意將超凈工作臺(tái)上的器具拿到工作臺(tái)外。

5.2 溫度

根據(jù)迪慶地理環(huán)境，馬鈴薯組培苗最適宜的溫度在18～25℃，低于15℃會(huì)抑制植物生長(zhǎng)，高于30℃組培苗會(huì)出現(xiàn)燒苗現(xiàn)象，而且會(huì)大大提高組培苗的污染率，一般組培室溫度過(guò)高會(huì)出現(xiàn)在夏季，就迪慶而言，6—7月是高峰期，8月溫度會(huì)有所下降，若干旱少雨，也會(huì)造成污染率升高。4～5℃有利于馬鈴薯組培苗的保存。空調(diào)可以有效控制室內(nèi)溫度，但是空調(diào)的使用也會(huì)使室內(nèi)的霉菌孢和細(xì)菌孢流動(dòng)速度加快從而提高組織培養(yǎng)的污染率。

5.3 濕度

馬鈴薯培育過(guò)程中最適宜的濕度在70%～80%，濕度過(guò)高會(huì)影響雜菌的滋生，濕度過(guò)低，會(huì)使培養(yǎng)基出現(xiàn)干裂，影響組培苗的生長(zhǎng)。組培室內(nèi)也受氣候的影響，雨季濕度大，可以用除濕器除濕，但是在迪慶高海拔地區(qū)一般濕度最高也就在70%左右。在干旱季節(jié)，可以在室內(nèi)每個(gè)角落放幾盆水，以增加空氣濕度。

5.4 培養(yǎng)室的衛(wèi)生打掃

每天對(duì)使用過(guò)的儀器設(shè)備進(jìn)行認(rèn)真打掃，用消毒水，認(rèn)真擦洗臺(tái)面、地面，保證臺(tái)面、地面清潔；每周五清洗消毒儀器設(shè)備1次，對(duì)整個(gè)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行熏蒸（甲醛+高錳酸鉀）消毒，保證儀器設(shè)備潔凈和空氣處于無(wú)菌狀態(tài)[1]。