BTg-3 對(duì)甲狀腺濾泡癌細(xì)胞增殖、侵襲和遷移及WNT/β-catenin信號(hào)通路的影響

杜靜海, 郭 欣

（河北醫(yī)科大學(xué)附屬唐山工人醫(yī)院頭頸外科，河北 唐山 063000）

甲狀腺濾泡癌的發(fā)生發(fā)展與癌基因和抑癌基因表達(dá)失調(diào)關(guān)系密切，抑癌基因功能缺失或發(fā)生突變可導(dǎo)致甲狀腺濾泡癌的發(fā)生發(fā)展［1］。B 細(xì)胞轉(zhuǎn)位基因（BTg） 家族成員為抑癌基因，該家族成員最重要的生理功能為抑制細(xì)胞的增殖。BTg-3 為該家族成員之一， 也具有抑制惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展的特性［2］，研 究［3］顯 示：BTg-3 在 多 種 惡 性 腫 瘤 中 具有抑制腫瘤增殖、侵襲和遷移的作用。本課題組［4］對(duì)甲狀腺乳頭狀癌組織中BTg-3 的表達(dá)進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)：甲狀腺乳頭狀癌組織中BTg-3 呈低表達(dá)，過表達(dá)BTg-3 可通過抑制甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化抑制細(xì)胞增殖、 侵襲和遷移過程， 但BTg-3 在甲狀腺濾泡癌發(fā)生發(fā)展中的作用及其機(jī)制尚不清楚。本研究觀察甲狀腺濾泡癌組織和細(xì)胞中BTg-3 表達(dá)情況及過表達(dá)BTg-3 對(duì)甲狀腺濾泡癌細(xì)胞增殖、侵襲和遷移過程中WNT/β-連環(huán)蛋白（βcatenin） 信號(hào)通路的影響，探討其在甲狀腺濾泡癌發(fā)生發(fā)展中的作用及其可能機(jī)制。

1 材料與方法

1.1組織標(biāo)本選擇2019 年1 月—12 月本院頭頸外科收治的甲狀腺濾泡癌組織和甲狀腺濾泡腺瘤組織標(biāo)本各80 例， 甲狀腺濾泡癌患者平均年齡為（54.32±7.16） 歲， 其中男性14 例， 女性66 例；甲狀腺濾泡腺瘤患者平均年齡為（53.64±7.35） 歲，男性16 例，女性64 例。2 組患者年齡和性別構(gòu)成比比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。納入標(biāo)準(zhǔn)：均首次確診；行手術(shù)治療；術(shù)前未進(jìn)行其他相關(guān)治療；病理證實(shí)為甲狀腺濾泡癌或甲狀腺濾泡腺瘤。排除標(biāo)準(zhǔn)：其他惡性腫瘤者；甲狀腺其他疾患者；其他類型甲狀腺癌者。

1.2細(xì)胞、 主要試劑和儀器甲狀腺濾泡癌CGTHW-1 細(xì)胞和甲狀腺濾泡上皮Nthy-ori 細(xì)胞（上海中科院細(xì)胞庫）。兔抗人BTg-3 多克隆抗體、兔抗人Ki67 多克隆抗體、兔抗人增殖細(xì)胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen， PCNA） 多克隆抗體、兔抗人波形蛋白（Vimentin） 多克隆抗體、兔抗人上皮性鈣黏蛋白（E-cadherin） 多克隆抗體、兔抗人WNT1 多克隆抗體、兔抗人β-catenin 多克隆抗體、兔抗人糖原合成激酶3β （GSK3β） 多克隆抗體和兔抗人磷酸化GSK3β （p-GSK3β） 多克隆抗體（美國Abcam 公司），BTg-3 慢病毒過表達(dá)載體和陰性對(duì)照載體（上海吉瑪公司），胎牛血清、胰蛋白酶、杜爾伯科改良伊格爾（DMEM） 培養(yǎng)基和Lipofectamine 2000 轉(zhuǎn)染試劑（美國DBI 公司），DAB 試劑盒、CCK-8 試劑盒和結(jié)晶紫（美國Gibco 公司）， Transwell 小室（美國Millipore 公司），Matrigel 膠（美國BD 公司）。酶標(biāo)儀（美國Bio-Rad 公司）。

1.3免疫組織化學(xué)法檢測(cè)甲狀腺濾泡癌組織和甲狀腺濾泡腺瘤組織中BTg-3表達(dá)情況將甲狀腺濾泡癌組織和甲狀腺濾泡腺瘤組織石蠟塊切成4 μm 厚切片，采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)甲狀腺濾泡癌組織和甲狀腺濾泡腺瘤組織中BTg-3 蛋白表達(dá)情況：將石蠟切片常規(guī)脫蠟至水，枸櫞酸緩沖液修復(fù)抗原，加入過氧化氫去除可能產(chǎn)生干擾的過氧化物酶，加入一抗兔抗人BTg-3 多克隆抗體（1∶100） 過夜孵育，加入二抗（1∶5 000） 孵育45 min，加入DAB顯色3 min，蘇木素染色5 min，氨水返藍(lán)5 s，顯微鏡下觀察免疫組織化學(xué)染色情況。結(jié)果判斷：根據(jù)陽性細(xì)胞染色程度和范圍進(jìn)行分級(jí)。染色程度：無染色為0 分，淺黃色為1 分，棕黃色為2 分，棕褐 色 為3 分。 染 色 范 圍： 顯 色 細(xì) 胞 數(shù)＜25%為1 分，25%≤顯色細(xì)胞數(shù)≤50% 為2 分，50%≤顯色細(xì)胞數(shù)≤75% 為3 分， 顯色細(xì)胞數(shù)＞75%為4 分?？偡e分=顯色程度積分+顯色范圍積分?？偡e分0～3分判定為陰性，總積分≥4分判定為陽性［5］。

1.4細(xì)胞培養(yǎng)將甲狀腺濾泡癌CGTHW-1 細(xì)胞和甲狀腺濾泡上皮Nthy-ori 細(xì)胞置于含胎牛血清的DMEM 培養(yǎng)基中培養(yǎng)，每2～3 d 換液1 次，培養(yǎng)至細(xì)胞達(dá)80% 以上融合時(shí)采用胰蛋白酶進(jìn)行消化，并進(jìn)行傳代培養(yǎng)，取第3 代CGTHW-1 和Nthy-ori細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)研究。

1.5 Western blotting法檢測(cè)甲狀腺濾泡癌CGTHW-1細(xì)胞和甲狀腺濾泡上皮Nthy-ori細(xì)胞中BTg-3蛋白表達(dá)水平每組設(shè)7 個(gè)復(fù)孔，每孔2 mL，培養(yǎng)24 h，加入細(xì)胞裂解液，提取總蛋白，采用Bradford 法測(cè)定組織蛋白濃度，制備SDS-PAGE 凝膠， 取50 μg 蛋白上樣， 80 V 恒壓電泳， 濕法轉(zhuǎn)膜，脫脂奶粉封閉1 h，加入一抗：兔抗人BTg-3多克隆抗體（1∶100）， 過夜孵育； 加入二抗（1∶5 000） 孵育1 h，顯影、曝光后，采用Image-Pro Plus6.0 軟件分析條帶灰度值，以β-actin 為內(nèi)參照，計(jì)算目標(biāo)蛋白表達(dá)水平。目標(biāo)蛋白表達(dá)水平=目標(biāo)蛋白條帶灰度值/β-actin 條帶灰度值。

1.6細(xì)胞分組和轉(zhuǎn)染將甲狀腺濾泡癌CGTHW-1細(xì)胞隨機(jī)分為空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組和BTg-3 過表達(dá)組。轉(zhuǎn)染前1 d，取3 組CGTHW-1 細(xì)胞接種到6 孔板中，每組設(shè)7 個(gè)復(fù)孔，每孔4×105個(gè)細(xì)胞，加入含胎牛血清和雙抗的DMEM 培養(yǎng)基過夜培養(yǎng)；細(xì)胞達(dá)85% 以上融合時(shí)進(jìn)行轉(zhuǎn)染。BTg-3 過表達(dá)組每孔加入10 μL 轉(zhuǎn)染試劑和4 μg BTg-3 過表達(dá)載體培養(yǎng)，陰性對(duì)照組加入10 μL 轉(zhuǎn)染試劑和4 μg 陰性對(duì)照載體培養(yǎng)，空白對(duì)照組不轉(zhuǎn)染。6 h 后更換培養(yǎng)基，24 h 后移去病毒液加入完全培養(yǎng)基，再培養(yǎng)48 h 用于后續(xù)研究。采用Western blotting 法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后各組CGTHW-1細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率。轉(zhuǎn)染效率=轉(zhuǎn)染細(xì)胞數(shù)/總細(xì)胞數(shù)×100%。

1.7 CCK-8法檢測(cè)各組甲狀腺濾泡癌CGTHW-1細(xì)胞增殖活性取轉(zhuǎn)染48 h 后甲狀腺濾泡癌CGTHW-1 細(xì)胞，加入到96 孔培養(yǎng)板， 每孔3×103個(gè)細(xì)胞，每組設(shè)7 個(gè)復(fù)孔， 分別于24、 48 和72 h 時(shí)， 每 孔 加 入10 μL CCK-8 溶 液， 培 養(yǎng)2 h，采用酶標(biāo)儀于波長450 nm 處測(cè)定各組細(xì)胞吸光度（A） 值，以A 值代表細(xì)胞增殖活性。

1.8平板克隆實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組甲狀腺濾泡癌CGTHW-1細(xì)胞克隆形成率取轉(zhuǎn)染48 h 的CGTHW-1 細(xì)胞，接種到6 孔板上，每孔500 個(gè)細(xì)胞，每組設(shè)7 個(gè)復(fù)孔， 加入完全培養(yǎng)基， 培養(yǎng)14 d，見細(xì)胞克隆時(shí)棄去上清液，加入多聚甲醛靜置30 min，加入結(jié)晶紫靜置30 min，自然晾干，拍照觀察，計(jì)算克隆形成率?？寺⌒纬陕?克隆形成數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)×100%。

1.9 Transwell法檢測(cè)各組甲狀腺濾泡癌CGTHW-1細(xì)胞侵襲和遷移能力侵襲能力檢測(cè)：取轉(zhuǎn)染48 h的CGTHW-1 細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液。Transwell 上室采用Matrigel 膠包被。 取200 μL 重懸細(xì)胞（含8×104個(gè)細(xì)胞） 加入Transwell 上室，置入培養(yǎng)箱中 培 養(yǎng)24 h， 擦 去 小 室 細(xì) 胞， 多 聚 甲 醛 固 定30 min，結(jié)晶紫染色30 min，顯微鏡下拍照，觀察并計(jì)數(shù)200 倍視野下侵襲細(xì)胞數(shù)。遷移能力測(cè)定：Transwell 小室上室不用Matrigel 膠包被，其他步驟同侵襲能力檢測(cè)實(shí)驗(yàn)。

1.10 Western blotting法檢測(cè)各組甲狀腺濾泡癌CGTHW-1細(xì)胞中Ki67、PCNA、Vimentin、E-cadherin、WNT1、β -catenin、GSK3 β和p-GSK3β蛋白表達(dá)水平取轉(zhuǎn)染48 h 的甲狀腺濾泡癌CGTHW-1 細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度為2×105mL－1，接種至6 孔板中，每組設(shè)7 個(gè)復(fù)孔，每孔2 mL，培養(yǎng)24 h，加入細(xì)胞裂解液，提取總蛋白，BCA 法測(cè)定各組細(xì)胞蛋白濃度，經(jīng)電泳、濕法轉(zhuǎn)膜，脫脂奶粉封閉2 h， 加入一抗兔抗人Ki67 多克隆抗體（1∶200）、兔抗人PCNA多克隆抗體（1∶200）、兔抗人Vimentin多克隆抗體（1∶200）、兔抗人E-cadherin多克隆抗體（1∶200）、兔抗人WNT1 多克隆抗體（1∶300）、兔抗人β-catenin 多克隆抗體（1∶300）和兔抗人GSK3β 多 克 隆 抗 體（1∶300）、 兔 抗人p-GSK3β 多克隆抗體（1∶300） 過夜孵育，加入二抗（1∶2 000） 孵育2 h，ECL 發(fā)光，Image圖像分析系統(tǒng)分析條帶灰度值，以β-actin 為內(nèi)參，計(jì)算目標(biāo)蛋白表達(dá)水平。目標(biāo)蛋白表達(dá)水平=目標(biāo)蛋白條帶灰度值/β-actin 條帶灰度值。

1.11統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。2 種組織中BTg-3 陽性表達(dá)率和各組細(xì)胞克隆形成率組間比較采用χ2檢驗(yàn)，各組細(xì)胞增殖活性、侵襲細(xì)胞數(shù)、遷移細(xì)胞數(shù)和甲狀腺濾泡癌CGTHW-1 細(xì) 胞 中 BTg-3、 Ki67、 PCNA、Vimentin 、 WNT1 、 β -catenin 、 p-GSK3 β 及E-cadherin 蛋白表達(dá)水平以±s表示，多組間樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD 檢驗(yàn)。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1甲狀腺濾泡癌組織和甲狀腺濾泡腺瘤組織中BTg-3陽性表達(dá)率甲狀腺濾泡癌組織中BTg-3 陽性表達(dá)率（30.00%，24/80） 低于甲狀腺濾泡腺瘤組織（91.25%，73/80）（χ2=62.864，P＜0.01）。見圖1 （插頁七）。

2.2甲狀腺濾泡癌CGTHW-1細(xì)胞和甲狀腺濾泡上皮Nthy-ori細(xì)胞中BTg-3蛋白表達(dá)水平甲狀腺濾泡癌CGTHW-1 細(xì)胞中BTg-3 蛋白表達(dá)水平（0.14±0.03） 低于甲狀腺濾泡上皮Nthy-ori 細(xì)胞（0.90±0.08）（t=34.484，P＜0.01）。見圖2。

2.3各組甲狀腺濾泡癌CGTHW-1細(xì)胞中BTg-3蛋白表達(dá)水平與空白對(duì)照組（0.12±0.04） 和陰性對(duì)照組（0.14±0.03） 比較，BTg-3 過表達(dá)組甲狀腺濾泡癌CGTHW-1 細(xì)胞中BTg-3 蛋白表達(dá)水平（0.93±0.06） 升高（P＜0.01）。見圖3。

2.4各組甲狀腺濾泡癌CGTHW-1細(xì)胞增殖活性與空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組比較，各時(shí)間點(diǎn)BTg-3 過表達(dá)組甲狀腺濾泡癌CGTHW-1 細(xì)胞增殖活性降低（P＜0.05）。見表1。

圖2 Western blotting 法檢測(cè)甲狀腺濾泡癌CGTHW-1 細(xì)胞和甲狀腺濾泡上皮Nthy-ori 細(xì)胞中BTg-3 蛋白表達(dá)電泳圖Fig.2 Electrophoregram of expressions of BTg-3 protein in thyroid follicular carcinoma CGTHW-1 cells and thyroid follicular epithelial Nthy-ori cells detected by Westen blotting method

圖3 Western blotting 法檢測(cè)各組甲狀腺濾泡癌CGTHW-1細(xì)胞中BTg-3 蛋白表達(dá)電泳圖Fig.3 Electrophoregram of expressions of BTg-3 protein in thyroid follicular carcinoma CGTHW-1 cells in various groups detected by Western blotting method

表1 各組甲狀腺濾泡癌CGTHW-1 細(xì)胞增殖活性Tab.1 Proliferation activities of thyroid follicular carcinoma CGTHW-1 cells in various groups （n=7,±s）

表1 各組甲狀腺濾泡癌CGTHW-1 細(xì)胞增殖活性Tab.1 Proliferation activities of thyroid follicular carcinoma CGTHW-1 cells in various groups （n=7,±s）

*P＜0.05 compared with blank control group；△P＜0.05 compared with negative control group.

Group Blank control Negative control BTg-3 over-expression FP Proliferation activity(t/h) 24 0.48±0.05 0.49±0.06 0.40±0.05*△5.942 0.010 48 0.87±0.08 0.85±0.09 0.63±0.06*△20.757＜0.001 72 1.44±0.12 1.45±0.11 0.95±0.09*△49.587＜0.001

2.5各組甲狀腺濾泡癌CGTHW-1細(xì)胞克隆形成率與空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組比較，BTg-3 過表達(dá)組甲狀腺濾泡癌CGTHW-1 細(xì)胞克隆形成率降低（P＜0.05）。見圖4 （插頁七） 和表2。

2.6各組甲狀腺濾泡癌CGTHW-1細(xì)胞侵襲和遷移細(xì)胞數(shù)與空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組比較，BTg-3 過表達(dá)組甲狀腺濾泡癌CGTHW-1 細(xì)胞侵襲和遷移細(xì)胞數(shù)減少（P＜0.05）。見圖5 （插頁七）和圖6 （插頁七） 及表2。

表2 各組甲狀腺濾泡癌CGTHW-1 細(xì)胞克隆形成率、侵襲細(xì)胞數(shù)和遷移細(xì)胞數(shù)Tab.2 Clone formation rates, number of invasion cells, and number of migration cells of thyroid follicular carcinoma CGTHW-1 cells in various groups （n=7，±s）

表2 各組甲狀腺濾泡癌CGTHW-1 細(xì)胞克隆形成率、侵襲細(xì)胞數(shù)和遷移細(xì)胞數(shù)Tab.2 Clone formation rates, number of invasion cells, and number of migration cells of thyroid follicular carcinoma CGTHW-1 cells in various groups （n=7，±s）

*P＜0.05 compared with blank control group；△P＜0.05 compared with negative control group.

Group Blank control Negative control BTg-3 over-expression FP Clone formation rate（η/%）29.64±2.79 31.02±2.84 14.25±2.61*△80.310＜0.01 Number of invasion cells 215.42±19.46 213.54±20.31 73.24±15.67*△134.711＜0.01 Number of migration cells 209.51±15.62 207.84±16.02 84.19±14.32*△153.737＜0.01

2.7各組甲狀腺濾泡癌CGTHW-1細(xì)胞中Ki67、PCNA、Vimentin和E-cadherin蛋白表達(dá)水平與空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組比較，BTg-3 過表達(dá)組甲狀 腺濾泡癌CGTHW-1 細(xì)胞 中Ki67 、 PCNA 和E-cadherin 蛋白表達(dá)水平 降 低 （P＜0.05 ），E-cadherin 蛋白表達(dá)水平升高（P＜0.05）。見圖7和表3。

2.8各組甲狀腺濾泡癌CGTHW-1細(xì)胞中WNT1、β-catenin、GSK3β和p-GSK3β蛋白表達(dá)水平與空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組比較，BTg-3 過表達(dá)組甲狀腺濾泡癌CGTHW-1 細(xì) 胞 中WNT1 、β -catenin 和p-GSK3β 蛋 白 表 達(dá) 水 平 降 低（P＜0.05）。見圖8 和表4。

表3 各組CGTHW-1 細(xì)胞中Ki67、PCNA、Vimentin 和E-cadherin 蛋白表達(dá)水平Tab.3 Expression levels of Ki67, PCNA, Vimentin ,and E-cadherin proteins in CGTHW-1 cells in various groups（n=7，x±s）

表4 各組CGTHW-1 細(xì)胞中WNT1、β-catenin、GSK3β 和p-GSK3β 蛋白表達(dá)水平Tab.4 Expression levels of WNT1, β-catenin, GSK3β and p-GSK3β proteins in CGTHW-1 cells in various groups（n=7，x±s）

圖7 Western blotting 法檢測(cè)各組甲狀腺濾泡癌CGTHW-1細(xì)胞中Ki67、PCNA、Vimentin 和E-cadherin 蛋白表達(dá)電泳圖Fig.7 Electrophoregram of expressions of Ki67, PCNA,Vimentin, and E-cadherin proteins in thyroid follicular carcinoma CGTHW-1 cells in various groups detected by Western blotting method

圖8 Western blotting 法檢測(cè)各組甲狀腺濾泡癌CGTHW-1細(xì)胞中WNT1、β-catenin、GSK3β 和p-GSK3β 蛋白表達(dá)電泳圖Fig.8 Electrophoretogram of expressions of WNT1,β -atenin, GSK3β ,and p-GSK3β proteins in thyroid follicular cacinoma CGTHW-1 cells in various groups detected by Western blotting method

3 討 論

BTg 家族成員除具有抑制細(xì)胞增殖能力外，還具有調(diào)控細(xì)胞生長、促進(jìn)細(xì)胞分化和成熟、對(duì)受損傷的DNA 進(jìn)行修復(fù)等功能。BTg-3 為BTg 家族成員之一，也具有抑制細(xì)胞增殖、調(diào)控細(xì)胞生長、修復(fù)受損傷的DNA、 促進(jìn)細(xì)胞分化和成熟等作用；在BTg-3 的結(jié)構(gòu)域中存在1 個(gè) 特 異 性 的N 端 和A 盒，N 端和A 盒共同作用于E2FI，可有效抑制E2FI-DPI 轉(zhuǎn)錄復(fù)合物的生成， 阻止癌細(xì)胞進(jìn)入S 期，從而對(duì)癌細(xì)胞的增殖發(fā)揮抑制作用［6-7］。目前有不少學(xué)者對(duì)BTg-3 在惡性腫瘤中的作用進(jìn)行研究，如下調(diào)BTg-3 表達(dá)可促進(jìn)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞增殖、抑制細(xì)胞凋亡［8］；靶向下調(diào)BTg-3 表達(dá)可促進(jìn)腎癌細(xì)胞的生長和遷移［9］；過表達(dá)BTg-3 可抑制結(jié)直腸癌的表型和侵襲行為［10］；調(diào)節(jié)BTg-3 甲基化狀態(tài)可抑制大腸癌細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡［11］。

上述研究均表明：BTg-3 作為抑癌基因在多種惡性腫瘤的增殖、侵襲和遷移中發(fā)揮重要作用。本研究結(jié)果顯示：甲狀腺濾泡癌組織和細(xì)胞中BTg-3表達(dá)水平降低；過表達(dá)BTg-3 可降低甲狀腺濾泡癌細(xì)胞增殖活性、細(xì)胞克隆形成率、侵襲和遷移細(xì)胞數(shù)， 降低細(xì)胞中Ki67、 PCNA 和Vimentin 蛋白表達(dá)水平，升高E-cadherin 蛋白表達(dá)水平。Ki67 在增生細(xì)胞核中普遍存在，為增生細(xì)胞核的標(biāo)志性抗原，可比較好地反映細(xì)胞核的增殖能力。PCNA 為細(xì)胞增殖蛋白，可反映細(xì)胞的增殖狀態(tài)。Ki67 和PCNA 為惡性腫瘤生長相關(guān)蛋白，其水平升高可反映惡性腫瘤細(xì)胞增殖能力增加。上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化為介導(dǎo)惡性腫瘤侵襲遷移的關(guān)鍵步驟，其特點(diǎn)為使上皮細(xì)胞失去特性，轉(zhuǎn)化為具有間充質(zhì)和侵襲表型，上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化程度可反映惡性腫瘤細(xì)胞的侵襲遷移能力。在上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程中，上皮細(xì)胞標(biāo)志分子E-cadherin 表達(dá)水平降低，間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志分子Vimentin 表達(dá)水平升高。本研究結(jié)果表明：過表達(dá)BTg-3 可抑制甲狀腺濾泡癌細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移能力，BTg-3 也可抑制甲狀腺濾泡癌增殖、侵襲和遷移，與本課題組前期研究［4］結(jié)果相似，表明BTg-3 在甲狀腺濾泡癌中具有抑癌作用， 考慮BTg-3 對(duì)甲狀腺濾泡癌細(xì)胞增殖有抑制作用，故根據(jù)本研究結(jié)果分析BTg-3 對(duì)甲狀腺濾泡癌侵襲和遷移的影響可能也與細(xì)胞增殖受到抑制有關(guān)聯(lián)，本研究未對(duì)其進(jìn)行詳細(xì)探討，擬在未來研究中進(jìn)行專項(xiàng)研究。

本研究結(jié)果顯示：過表達(dá)BTg-3 可降低甲狀腺濾 泡 癌 細(xì) 胞 中WNT1、 β-catenin 和p-GSK3β 蛋 白表達(dá)水平。WNT1 和β-catenin 為WNT/β-catenin 信號(hào)通路的主要成員，胞漿中β-catenin 水平可決定WNT 信號(hào)傳遞， 為WNT 的主要效應(yīng)分子，GSK3β 在 靜 息 狀 態(tài) 下 可 抑 制β -catenin 表 達(dá)，GSK3β 被磷酸化后失去活性，升高胞漿中β-catenin水平［12-13］。本研究結(jié)果表明：過表達(dá)BTg-3 可抑制甲狀腺濾泡癌細(xì)胞中WNT/β -catenin 信號(hào)通路。WNT/β-catenin 信號(hào)通路在惡性腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡、侵襲和遷移等過程中發(fā)揮重要作用，該通路的異常激活與甲狀腺癌的發(fā)病和進(jìn)展關(guān)系密切［14］，WNT/β-catenin 可通過靶向調(diào)控細(xì)胞的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化影響惡性腫瘤細(xì)胞的侵襲和遷移過程［15-16］。BTg-3 可通過WNT/β-catenin 信號(hào)通路發(fā)揮作用，如BTg-3 過表達(dá)通過調(diào)節(jié)AKT /GSK3β/β-catenin信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制卵巢上皮癌細(xì)胞的增殖和侵襲［17］；BTg-3 過表達(dá)通過Wnt /β-catenin 信號(hào)通路抑制大腸癌SW480 細(xì)胞的增殖和侵襲［18］。 結(jié)合WNT/β -catenin 信號(hào)通路在甲狀腺癌發(fā)病中的作用和BTg-3 可通過WNT/β-catenin 發(fā)揮作用的結(jié)論并分析本研究結(jié)果表明：BTg-3 可能通過抑制WNT/β -catenin 信號(hào)通路激活，從而抑制甲狀腺濾泡癌細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程，抑制其增殖、侵襲和遷移能力，在甲狀腺濾泡癌發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮抑癌作用。

綜上所述，甲狀腺濾泡癌組織和細(xì)胞中BTg-3表達(dá)水平降低， 過表達(dá)BTg-3 可能通過抑制WNT/β-catenin 信號(hào)通路抑制甲狀腺濾泡癌細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移。