兩種前處理方法聯(lián)合使用定性、定量測(cè)定豆芽中4-氯苯氧乙酸

尤曉惠 鄭曉敏 謝甜 劉張霞

摘 要：建立了豆芽中4-氯苯氧乙酸定性和定量檢測(cè)的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法。采用分散固相萃取方法（QuChERS方法）進(jìn)行定性檢測(cè);分散固相萃取-陰離子固相萃取柱方法（QuChERS /MAX方法）進(jìn)行定量檢測(cè)。建立的QuChERS方法，簡(jiǎn)便、快速，適合豆芽樣品中4-氯苯氧乙酸的快速篩查;QuChERS/MAX方法凈化效果好，適合陽(yáng)性樣品的定量檢測(cè)。

關(guān)鍵詞：豆芽;4-氯苯氧乙酸;分散固相萃取;陰離子固相萃取柱;基質(zhì)效應(yīng)

4-氯苯氧乙酸是一種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，在豆芽生產(chǎn)中，4-氯苯氧乙酸可以促進(jìn)豆芽下胚軸粗大，減少根部萌發(fā)，加速細(xì)胞分裂[1]，使豆芽更加肥嫩、粗壯，提高豆芽的產(chǎn)量。曾經(jīng)很長(zhǎng)一段時(shí)間4-氯苯氧乙酸被廣泛用于豆芽的生產(chǎn)中。我國(guó)相關(guān)部門(mén)發(fā)布的2015年第11號(hào)公告，明令禁止4-氯苯氧乙酸用于豆芽生產(chǎn)。然而4-氯苯氧乙酸依然被濫用于豆芽的生產(chǎn)中，每年國(guó)家相關(guān)部門(mén)發(fā)布的不合格食品通告中非法使用4-氯苯氧乙酸導(dǎo)致的豆芽不合格情況頻頻出現(xiàn)。

目前，豆芽中4-氯苯氧乙酸的測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)有《豆芽中植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的測(cè)定BJS 201703》和《SN/T 3725-2013 出口食品中對(duì)氯苯氧乙酸殘留量的測(cè)定》。BJS 201703標(biāo)準(zhǔn)采用QuChERS方法對(duì)豆芽樣品進(jìn)行前處理，方法簡(jiǎn)便、快速，但是處理后的樣品溶液雜質(zhì)非常多，液質(zhì)測(cè)定時(shí)基質(zhì)效應(yīng)非常嚴(yán)重，造成豆芽中4-氯苯氧乙酸定量測(cè)定結(jié)果不夠準(zhǔn)確。SN/T 3725標(biāo)準(zhǔn)中，通過(guò)調(diào)節(jié)豆芽樣品溶液的pH值，改變4-氯苯氧乙酸在溶液中的溶解性對(duì)豆芽樣品中的4-氯苯氧乙酸進(jìn)行提取，提取后的樣品溶液經(jīng)處理后再通過(guò)MAX小柱進(jìn)行凈化，液質(zhì)測(cè)定時(shí)幾乎沒(méi)有基質(zhì)效應(yīng)，但是該方法的提取階段非常繁瑣并且需要消耗大量的有機(jī)試劑，凈化階段也非常的耗時(shí)。文獻(xiàn)中也主要是采用直接提取法、QuChERS方法和固相小柱凈化法進(jìn)行前處理[2-10]，本文擬建立兩種前處理方法，一種方法可以對(duì)豆芽中4-氯苯氧乙酸進(jìn)行快速篩查;另一種方法可以最大程度地消除基質(zhì)干擾，從而對(duì)4-氯苯氧乙酸進(jìn)行準(zhǔn)確定量。

1 材料和方法

1.1 儀器

Agilent1290高效液相色譜儀（Agilent公司）和AB4500Qtrap質(zhì)譜儀（ABSCIEX公司），Milli-Q超純水儀（Merck-Millipore公司），氮吹儀;Waters Oasis MAX固相萃取小柱（20 mg/mL）。

1.2 試藥試劑

4-氯苯氧乙酸鈉（Standford Chmi-cals），乙腈、甲醇為色譜純（美國(guó)Fisher公司），氨水（川東化工），甲酸（阿拉丁），凈化管（含150 mg PSA、900 mg MgSO4、150 mg C18）（島津）。

1.3 色譜和質(zhì)譜條件

2 結(jié)果與討論

2.1 樣品前處理方法

QuChERS方法用1%甲酸-乙腈進(jìn)行提取，由于乙腈對(duì)大部分化合物均有一定的溶解能力，可有效地將

4-氯苯氧乙酸從豆芽中提取出來(lái)。然后通過(guò)加入無(wú)水硫酸鎂使水相和有機(jī)相分層，降低4-氯苯氧乙酸在水相中的溶解度，從而將其轉(zhuǎn)移至乙腈層中。另外加入的PSA和C18，可去除部分色素、有機(jī)酸、酚類(lèi)及非極性干擾物，從而在提高回收率的同時(shí)減少干擾。QuChERS前處理得到的樣品溶液非常渾濁，即樣品溶液中還含有大量的干擾物質(zhì)。

為了進(jìn)一步降低干擾，通過(guò)MAX小柱對(duì)樣品溶液進(jìn)行進(jìn)一步凈化，以去除干擾雜質(zhì)。通過(guò)對(duì)4-氯苯氧乙酸結(jié)構(gòu)的分析，樣品溶液可以通過(guò)反向固相萃取小柱進(jìn)行凈化，又可以用陽(yáng)離子交換小柱進(jìn)行凈化，因此，選擇MAX小柱作為凈化柱。樣品溶液過(guò)柱后，分別選擇了3種溶液體系對(duì)小柱進(jìn)行淋洗，依次用3 mL 5%氨水、3 mL 30%甲醇的水溶液（含2%甲酸）、3 mL甲醇淋洗，通過(guò)調(diào)節(jié)溶液的pH值及逐步提高洗脫液的洗脫能力，使樣品中的干擾物得到最大程度的去除。

2.2 基質(zhì)效應(yīng)

對(duì)5個(gè)空白綠豆芽樣品和5個(gè)空白黃豆芽樣品分別用2種前處理方法進(jìn)行處理，得到空白樣品溶液。將10 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液（溶劑為甲醇）分別用空白樣品溶液及20%乙腈水溶液配置成100 ng/mL的溶液，用于考察不同樣品溶液的基質(zhì)效應(yīng)（X），基質(zhì)抑制效應(yīng)的計(jì)算公式見(jiàn)式（1）。

通過(guò)考察，QuChERS方法基質(zhì)抑制效應(yīng)在55%～78%，不同豆芽的基質(zhì)效應(yīng)不同且黃豆芽比綠豆芽的基質(zhì)抑制作用更強(qiáng)，凈化效果較差。定量檢測(cè)時(shí)雖然可以通過(guò)空白基質(zhì)標(biāo)曲進(jìn)行基質(zhì)效應(yīng)的消除，但是由于不同豆芽間基質(zhì)效應(yīng)不同，空白基質(zhì)標(biāo)曲并不能很好地消除基質(zhì)效應(yīng)，因此，定量檢測(cè)時(shí)會(huì)出現(xiàn)定量測(cè)定結(jié)果不夠準(zhǔn)確的問(wèn)題。QuChERS/MAX方法，基質(zhì)抑制均小于5%，凈化效果非常好。因此，再通過(guò)空白基質(zhì)標(biāo)曲對(duì)定量結(jié)果進(jìn)行校正，可以取得比較準(zhǔn)確的定量結(jié)果。

2.3 回收率

在樣品中分別加入10、20、100 μg/kg的標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照兩種處理方法進(jìn)行處理。同時(shí)做陰性樣品，得到空白基質(zhì)溶液，同時(shí)測(cè)定，并計(jì)算加標(biāo)回收率。

通過(guò)考察，QuChERS方法各添加水平的回收率在79%～90%。QuChERS/MAX方法各添加水平的回收率在75%～91%。

通過(guò)對(duì)回收率的考察，可知QuChERS方法可以將豆芽中的4-氯苯氧乙酸有效提取出來(lái)。而QuChERS/MAX方法，樣品溶液經(jīng)過(guò)MAX的進(jìn)一步凈化在凈化過(guò)程中4-氯苯氧乙酸并沒(méi)有損失。兩種方法的回收率均較高，可滿足檢測(cè)要求。

3 結(jié)論

兩種前處理方法的回收率均較高，均可滿足實(shí)驗(yàn)要求。QuChERS方法前處理后具有嚴(yán)重的基質(zhì)抑制效應(yīng)，并且不同樣品之間的基質(zhì)效應(yīng)差別較大。但是QuChERS方法更加的快速、便捷。QuChERS/MAX方法，經(jīng)過(guò)多環(huán)節(jié)的凈化，基質(zhì)效應(yīng)非常小，但是由于QuChERS方法前處理后的樣品溶液雜質(zhì)依然非常多，在MAX小柱凈化階段，一方面過(guò)柱的速度非常的慢，另一方面凈化環(huán)節(jié)較多，使得前處理耗時(shí)長(zhǎng)，不適合大批量樣品的快速篩查。因此，QuChERS方法適合樣品中4-氯苯氧乙酸的快速篩查;QuChERS/MAX方法適合樣品中4-氯苯氧乙酸的定量檢測(cè)。

參考文獻(xiàn)

[1]楊婕，黃少文，孫遠(yuǎn)明.4-氯苯氧乙酸鈉對(duì)綠豆芽生長(zhǎng)的影響及其殘留分析[J].食品工業(yè)科技，2015，（15）：104-108.

[2]李正元，周冰谷，關(guān)建山.高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法快速測(cè)定豆芽中4-苯氧乙酸鈉的殘留量[J].廣東化工，2020，47（11）：221-222.

[3]張亞蓮，柳菡.高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定豆芽中8種藥物殘留[J].分析測(cè)試學(xué)報(bào)，2015，34（2）：164-170.

[4]盧高超，王曉娟，李紅光.高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定豆芽中4-氯苯氧乙酸鈉[J].食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào)，2015，6（10）：4251-4257.

[5]劉運(yùn)明，劉華良，吉文亮.QuEChERS-高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定豆芽中7種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的殘留量[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2015，25（12）：1880-1883.

[6]張婧雯，郭春海，葛世輝.固相萃取-超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定豆芽中6-芐基腺嘌呤、赤霉素和4-氯苯氧乙酸的殘留量[J].中國(guó)食品衛(wèi)生雜志，2014，26（5）：441-445.

[7]蘆智遠(yuǎn)，馮歆軼，汪靜雯，等.固相萃取–高效液相色譜法測(cè)定豆芽中4- 氯苯氧乙酸鈉和6-芐基腺嘌呤的殘留量[J].化學(xué)分析計(jì)量，2017，26（5）：55-58.

[8]李娜，盧娜，邵輝.超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法快速測(cè)定豆芽中6-芐基腺嘌呤、4-氯苯氧乙酸鈉、2，4-滴和赤霉素[J].天津農(nóng)業(yè)科學(xué)，2020，26（4）：1-5.

[9]胡志國(guó)，鐘彩麗，何林才.超高效液相色譜串聯(lián)四極桿質(zhì)譜測(cè)定豆芽中的4-氯苯氧乙酸[J].山東化工，2019，48（8）：83-84.

[10]李健，鄭磊.液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定豆芽中4種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑[J].現(xiàn)代食品科技，2019，35（1）：257-263.

作者簡(jiǎn)介：尤曉惠（1986—），女，漢族，重慶人，碩士，工程師。研究方向：食品化妝品檢驗(yàn)。