HPLC法測定6省各等級天麻中天麻素和對羥基苯甲醇的含量

呂紫璇++車早紅++唐瑜++陳建++張傳平++劉前林

摘要：目的 HPLC法測定6省各等級天麻中天麻素和對羥基苯甲醇的含量。方法 色譜柱Agilent XDB-C18柱（250mm×4.6mm，5μm），流動(dòng)相乙腈-0.05%磷酸溶液（3：97），流速1.0ml/min，檢測波長220nm，柱溫35℃。結(jié)果 天麻素進(jìn)樣量在0.04102～0.8204ug范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好；對羥基苯甲醇進(jìn)樣量在0.02504～0.5008ug范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。結(jié)論 檢測出天麻6省各等級中天麻素和對羥基苯甲醇的含量。

關(guān)鍵詞：天麻；高效液相色譜法；天麻素對羥基苯甲醇

天麻為蘭科植物天麻（Gastrodia elata Blume）的干燥塊莖，具息風(fēng)止痙；平肝陽；祛風(fēng)通絡(luò)功效?，F(xiàn)全國各地均有栽培，以甘肅、云南、湖北、貴州、安徽、陜西、四川等為大產(chǎn)區(qū)?！吨袊幍洹?015版新增對羥基苯甲醇含量為天麻質(zhì)量的控制指標(biāo)，本課題對6省各等級天麻中天麻素和對羥基苯甲醇的含量進(jìn)行檢測，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

島津LC-20A高效液相色譜儀；Sartorius-ME215S電子天平。天麻素對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號110807-200205）；對羥基苯甲醇對照品（Lot No：NJ141012-17，USA）；色譜乙腈，超純水，其余試劑為分析純；天麻樣品為6省基地采集加工后的成品。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件 色譜柱Agilent XDB-C18柱（250mm×4.6mm，5μm），流動(dòng)相乙腈-0.05%磷酸溶液（3：97），流速1.0ml/min，檢測波長220nm，柱溫35℃；進(jìn)樣量：5μl。

2.2溶液制備

2.2.1對照品溶液的制備精密稱取對照品，加甲醇制成每1ml含天麻素0.04102mg、對羥基苯甲醇0.02504mg的混合溶液，即得。

2.2.2供試品溶液的制備取本品粉末（過三號篩）約2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇50ml，稱定重量，超聲處理（功率120W，頻率40kHz）30min，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，濾過，精密量取續(xù)濾液10ml，濃縮至近干無醇味，殘?jiān)右译?水（3：97）混合溶液溶解，轉(zhuǎn)移至25ml量瓶中，用乙腈-水（3：97）混合溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3方法學(xué)考察

2.3.1系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)取上述溶液進(jìn)樣，記錄色譜圖。理論塔板數(shù)按天麻素峰計(jì)算大于5000，分離度大于1.5，見圖1。

2.3.2線性關(guān)系考察取混合對照品溶液，分別進(jìn)樣1μl、2μl、4μl、10μl、20μl，以進(jìn)樣量（X）對峰面積（Y）作線性回歸，天麻素得回歸方程為：Y=2000000.0000x+5464.2000，r=0.9997表明進(jìn)樣量在0.04102～0.8204ug范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；對羥基苯甲醇得回歸方程為：Y=3000000.0000x+9823.1000，r=0.9999表明進(jìn)樣量在0.02504～0.5008ug范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3.3精密度試驗(yàn)：取混合對照品溶液，連續(xù)測定6次，結(jié)果天麻素、對羥基苯甲醇的峰面積的RSD分別為0.3%、0.3%（n=6）。

2.3.4重復(fù)性試驗(yàn)：精密取同一批天麻，按供試品溶液的制備方法制備6份供試品溶液測定，天麻素、對羥基苯甲醇含量的RSD分別為0.2%、0.1%（n=6）。表明此方法重復(fù)性良好。

2.3.5穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，分別在0、2、4、8、12、24h進(jìn)樣5μl，結(jié)果天麻素、對羥基苯甲醇峰面積的RSD分別為0.2%、0.2%。表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.6加樣回收試驗(yàn)：取已知含量天麻6份，精密加入對照品適量，按供試品溶液制備方法制備溶液并測定，計(jì)算回收率，結(jié)果對天麻素、羥基苯甲醇平均回收率分別為98.37%、98.85%，RSD%分別為0.27%、0.69%（n=6），見表1。

2.4樣品測定 取天麻樣品，測定，見表2。

由上結(jié)果可以得出：①按《中國藥典》2015版一部標(biāo)準(zhǔn)，按干燥品計(jì)算，含天麻素（C13H18O7）和對羥基苯甲醇（C7H8O2）的總量不得少于0.25%，所有天麻含量均合格；②從等級含量來看，天麻等級和其含量并不成正比，如甘肅產(chǎn)特級、四川產(chǎn)特級與陜西產(chǎn)特級，均為同批天麻的最低水平，而四川產(chǎn)三級為同批天麻最高。

3 討論

云南產(chǎn)為烏天麻，四川產(chǎn)為烏紅天麻，其余各省天麻均為紅天麻，從上數(shù)據(jù)來看，烏天麻與烏紅天麻天麻素和對羥基苯甲醇的總量與紅天麻并無太大差異；云南產(chǎn)與四川產(chǎn)天麻比較厚實(shí)，水分比較高，干燥難度較大，對天麻素和對羥基苯甲醇含量有一定影響。

參考文獻(xiàn)：

[1]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版，2015.

編輯/安樺